(全國通用版)2022年高考生物一輪復(fù)習(xí) 選考部分 生物技術(shù)實(shí)踐 課時(shí)跟蹤檢測(三十九)微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

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1、(全國通用版)2022年高考生物一輪復(fù)習(xí) 選考部分 生物技術(shù)實(shí)踐 課時(shí)跟蹤檢測(三十九)微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中,對環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)如圖操作步驟,從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題:(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作為碳源的有_。(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng),苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸_,以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集,應(yīng)進(jìn)一步_,以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加_。(3)右圖為連續(xù)劃線法示意圖,在圖中_(填圖中序

2、號)區(qū)域更易獲得單菌落。(4)采用比色測定法(使用苯酚顯色劑)檢測降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng),下表中15號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為_。管號123456苯酚濃度(mg/L)1如果廢水為50 mg/L苯酚溶液,降解后約有21%的苯酚殘留,則需將殘留液稀釋_(填序號:51020)倍后,再進(jìn)行比色。解析:(1)富集培養(yǎng)基中蛋白胨、苯酚都是含碳的有機(jī)物,可作為碳源。(2)欲富集酚降解菌,隨轉(zhuǎn)接次數(shù)的增加,應(yīng)逐漸增加培養(yǎng)基中苯酚的含量;若接種培養(yǎng)后平板上菌落過于密集,則應(yīng)進(jìn)一步稀釋后再進(jìn)行涂布,以降低平板上菌落密度,便于菌落計(jì)數(shù)與分離;平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基,除含有水、營養(yǎng)

3、物質(zhì)(碳源、氮源、無機(jī)鹽等)外,還需添加瓊脂作為凝固劑。(3)利用連續(xù)劃線法接種時(shí),最后的劃線區(qū)域()中,菌體的密度較小,容易獲得單菌落。(4)因系列濃度梯度中6號比色管中苯酚濃度為1 mg/L,故15號比色管中的苯酚濃度應(yīng)分別為0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L;根據(jù)題意,廢水為50 mg/L苯酚溶液,降解后約有21%的苯酚殘留,要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于01 mg/L,需將殘留液稀釋20倍左右。答案:(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀釋涂布凝固劑(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.82(2018臨沂模擬)莠去津是一種含氮農(nóng)藥,在土壤

4、中不易降解,為修復(fù)被其污染的土壤,可按下面程序選育能降解莠去津的細(xì)菌(目的菌)。請據(jù)圖回答(已知莠去津在水中溶解度低,含過量莠去津的固體培養(yǎng)基不透明):(1)由圖推斷,從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)的過程稱為_,目的是_。(2)在將C瓶菌種接種到固體培養(yǎng)基之前通常要進(jìn)行_,將菌種接種到固體培養(yǎng)基的方法有平板劃線法和_法,從圖中看本實(shí)驗(yàn)采用的是_(填“前者”或“后者”)。(3)一段時(shí)間后,培養(yǎng)基出現(xiàn)無透明圈和有透明圈兩種菌落,我們篩選的目的菌是菌落中_的細(xì)菌,該菌落生長所需的氮元素主要來自_。(4)為弄清固體培養(yǎng)基中的非目的菌落來自C瓶菌種還是培養(yǎng)基,應(yīng)如何設(shè)置對照組?_。解析:(1)圖中從A瓶到C瓶液體

5、培養(yǎng)的過程稱為選擇培養(yǎng),目的是初步選擇能降解莠去津的細(xì)菌(目的菌)并提高其密度。(2)將菌種接種到固體培養(yǎng)基的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法兩種,由圖中固體培養(yǎng)基上的菌落分布可知,該接種方法是稀釋涂布平板法,包括梯度稀釋操作和涂布平板操作。(3)根據(jù)題目信息“莠去津在水中溶解度低,含過量莠去津的固體培養(yǎng)基不透明”可知,能夠降解莠去津的目的菌會使菌落周圍出現(xiàn)透明圈,因此可以選擇菌落周圍存在透明圈的細(xì)菌。由于培養(yǎng)基中只有莠去津一種氮源,因此分解莠去津的微生物所需的氮元素主要由莠去津提供。(4)為弄清固體培養(yǎng)基中的非目的菌落來自C瓶菌種還是培養(yǎng)基,應(yīng)設(shè)置滅菌后不接種菌種的培養(yǎng)基,與實(shí)驗(yàn)組放在相同條

6、件下培養(yǎng),若培養(yǎng)基上無菌落出現(xiàn),則非目的菌落一定來自C瓶菌種,若培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落,則說明非目的菌落可能來自培養(yǎng)基。答案:(1)選擇培養(yǎng)初步選擇能降解莠去津的細(xì)菌(目的菌)并提高其密度(2)梯度稀釋稀釋涂布平板后者(3)有透明圈莠去津(4)配制的培養(yǎng)基滅菌后不接種菌種,與實(shí)驗(yàn)組放在相同條件下培養(yǎng)3圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過程,圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。(1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以_為唯一氮源;鑒別培養(yǎng)基還需添加_作指示劑,產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長一段時(shí)間后,其菌落周圍的指示劑將變成_色。(2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上,均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL,培養(yǎng)一段時(shí)間后

7、,平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是_,每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為_108個(gè);與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比,此計(jì)數(shù)方法測得的細(xì)菌數(shù)較_。(3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活,突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸,使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中,終止密碼為_,突變基因表達(dá)的蛋白含_個(gè)氨基酸。解析:(1)脲酶能夠催化尿素水解釋放出氨和二氧化碳,因此選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以尿素為唯一氮源。挑取單菌落接種到加有酚紅指示劑的鑒別培養(yǎng)基中,培養(yǎng)一段時(shí)間后,菌落周圍的氨增加,pH升高

8、,酚紅指示劑將變紅。(2)該過程采取的接種方法為稀釋涂布平板法。利用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),應(yīng)選擇菌落數(shù)在30300的平板,因此平板上長出的細(xì)菌菌落平均數(shù)為(156178191)3175個(gè)。每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為1750.11051.75108個(gè)。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法能將死細(xì)胞計(jì)算在內(nèi),而稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法只能計(jì)數(shù)活細(xì)胞(只有活細(xì)胞才能在平板上生長),故一般血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法要比稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法的結(jié)果大。(3)圖乙從起始密碼算起的堿基序號為271,前270個(gè)堿基決定90個(gè)氨基酸,從271位到箭頭處可以決定1個(gè)氨基酸,然后插入70個(gè)核苷酸,可決定23個(gè)氨基酸,多出一個(gè)堿基,加上后面

9、的AG剛好可以決定1個(gè)氨基酸,則后面UGA是終止密碼。因此突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA終止密碼為UGA,突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)所含氨基酸數(shù)為901231115(個(gè))。答案:(1)尿素酚紅紅(2)稀釋涂布平板法1.75少(3)UGA1154(2018邯鄲模擬)某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示,請分析回答下列問題:(1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是_,這種培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源來自培養(yǎng)基中的_。實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng),由此推測“目

10、的菌”的代謝類型是_。(3)在上述實(shí)驗(yàn)操作過程中,獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是_。(4)轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時(shí),常采用平板劃線的方法進(jìn)行接種,此過程中所用的接種工具是_,操作時(shí)采用_滅菌的方法。(5)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理后才能倒掉,這樣做的目的是_。(6)某同學(xué)計(jì)劃統(tǒng)計(jì)污水池中“目的菌”的總數(shù),他選用104、105、106稀釋液進(jìn)行平板劃線,每種稀釋液都設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿。從設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的角度看,還應(yīng)設(shè)置的一組對照實(shí)驗(yàn)是_,此對照實(shí)驗(yàn)的目的是_。解析:(1)在選擇培養(yǎng)基中加入特定物質(zhì),可以篩選出特定的微生物。(2)根據(jù)題目所給的培養(yǎng)基配方,“目的菌”生長所需的氮源和碳源只能來自培養(yǎng)基中

11、的化合物A。異養(yǎng)需氧型細(xì)菌在培養(yǎng)時(shí)需要振蕩。(3)獲得純凈特定“目的菌”的關(guān)鍵是防止外來雜菌入侵。(4)用平板劃線的方法進(jìn)行接種,接種工具是接種環(huán),操作時(shí)一般采用灼燒滅菌。(5)為防止造成環(huán)境污染,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理才能倒掉。(6)計(jì)數(shù)目的菌數(shù)量時(shí),注意設(shè)置一組不接種的空白培養(yǎng)基對照實(shí)驗(yàn),此對照實(shí)驗(yàn)的目的是證明培養(yǎng)基制備過程中未被雜菌污染。答案:(1)篩選目的菌選擇(2)化合物A異養(yǎng)需氧型(3)防止外來雜菌污染(4)接種環(huán)灼燒(5)防止造成環(huán)境污染(6)不接種的空白培養(yǎng)基檢驗(yàn)培養(yǎng)基制備過程中是否被雜菌污染5研究人員成功地從土壤中篩選到能產(chǎn)生纖維素酶的微生物。請就“如何從

12、土壤中獲得纖維素分解菌”回答以下問題:(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少包括三種組分,即C1酶、CX酶和_酶。(2)剛果紅可以與纖維素等多糖形成紅色復(fù)合物,但并不與_和_發(fā)生這種反應(yīng)。常用的剛果紅染色法有兩種:第一種是先培養(yǎng)微生物,再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng);第二種是在_時(shí)就加入剛果紅。_(填“第一種”或“第二種”)方法會使菌落之間發(fā)生混雜。(3)如果觀察到產(chǎn)生_的菌落,說明可能獲得了纖維素分解菌。為了確定是纖維素分解菌,還需要進(jìn)行_的實(shí)驗(yàn)。纖維素酶的測定方法一般是采用對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的_進(jìn)行定量的測定。解析:(1)纖維素酶包括三種組分,分別是C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶

13、。(2)剛果紅可以與纖維素等多糖形成紅色復(fù)合物,但并不與纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。剛果紅染色法有兩種,第一種是先培養(yǎng)微生物,再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng);第二種是在倒平板時(shí)就加入剛果紅。第一種方法由于加剛果紅時(shí)已經(jīng)形成菌落,因此會使菌落之間發(fā)生混雜。(3)纖維素分解菌能夠分解培養(yǎng)基中的纖維素,因此菌落周圍會出現(xiàn)不變紅的透明圈。為了確定是纖維素分解菌,還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。纖維素酶的測定方法一般是采用對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測定。答案:(1)葡萄糖苷(2)纖維二糖葡萄糖倒平板第一種(3)透明圈發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶葡萄糖6有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑,長期使用會污染環(huán)境

14、。研究發(fā)現(xiàn),苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過程如圖甲、乙所示。(1)微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、_四類,該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源,其原因是_。(2)與微生物培養(yǎng)基相比,植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和_,這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成_保存?zhèn)溆谩?3)純化菌株時(shí),通常使用的劃線工具是_。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后,第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌,第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落,其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有_。(4)為探究苯磺隆的降解機(jī)制,將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心,取上清液做圖乙所

15、示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是_,該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理?為什么?_。解析:(1)微生物生長繁殖需要的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、水和無機(jī)鹽四類。根據(jù)題意可知,土壤中某些微生物有降解苯磺隆的能力,該實(shí)驗(yàn)的目的是探索其降解機(jī)制,因此,需要分離出有降解苯磺隆能力的土壤中的某些微生物,故選擇培養(yǎng)時(shí)為了排除其他碳源的干擾,培養(yǎng)基中的唯一碳源只能是苯磺隆。(2)與微生物培養(yǎng)基相比,植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基需要添加生長素和細(xì)胞分裂素,用于調(diào)節(jié)植物細(xì)胞再分化;這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成母液保存?zhèn)溆谩?3)純化菌株時(shí),通常使用的劃線工具是無菌接種環(huán)。劃線的平板培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)域的劃線上不間斷地長滿了菌,第二劃線

16、區(qū)域所劃的第一條線上無菌落,而其他劃線上有菌落。造成此現(xiàn)象的原因可能有兩個(gè):一是接種環(huán)灼燒后未冷卻,菌種接觸到高溫的接種環(huán)而死亡;二是劃第二劃線區(qū)域第一條線時(shí)未從第一區(qū)域末端開始。(4)根據(jù)圖乙所示實(shí)驗(yàn)中的上清液加入蛋白酶溶液推測,實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘骄磕康木晔欠衲芊置诮到獗交锹〉牡鞍踪|(zhì),實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不合理之處是缺少不加蛋白酶溶液、其他條件同圖乙的空白對照。答案:(1)氮源和無機(jī)鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長繁殖(2)細(xì)胞分裂素母液(3)接種環(huán)接種環(huán)灼燒后未冷卻;劃線未從第一區(qū)域末端開始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)不合理,缺少空白對照7(2018銀川模擬)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),最為關(guān)鍵的是

17、不僅要為微生物提供合適的營養(yǎng)條件和環(huán)境條件,還要能解決雜菌對培養(yǎng)物的污染問題。請結(jié)合微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)知識回答以下問題:(1)培養(yǎng)基能為微生物提供營養(yǎng)。各種培養(yǎng)基的配方不同,但一般都含有_,如蛋白胨除了提供氮源之外,還提供_;另外,培養(yǎng)基還需要滿足微生物對_的要求。(2)獲得純正培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來微生物入侵。對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手,需要進(jìn)行清潔和_(填“消毒”或“滅菌”);而一般對培養(yǎng)基通常選擇_法進(jìn)行滅菌。(3)微生物的接種方法很多,其核心都是要防止雜菌污染,保證培養(yǎng)物的純正。微生物接種最常用的方法是_和_。(4)對分離的微生物作進(jìn)一步鑒定和篩選,常需要借助生物化學(xué)方法,如在

18、以_為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入_可用來鑒定纖維素分解菌;而篩選纖維素分解菌,則依據(jù)培養(yǎng)基是否產(chǎn)生_(特征)來篩選。 解析:(1)培養(yǎng)基的配方中應(yīng)含有碳源、氮源、無機(jī)鹽、水等各種成分,配制時(shí)還應(yīng)考慮滿足微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣等的要求。蛋白胨可提供碳源、氮源和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)。(2)為防止外來微生物入侵,通常對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行消毒,而對培養(yǎng)器皿、接種用具、培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。對培養(yǎng)基通常選擇高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。(3)接種微生物最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。(4)對分離的微生物作進(jìn)一步鑒定,常需要借助生物化學(xué)方法,如鑒定纖維素分解菌時(shí),在以纖維素為唯一碳源的培

19、養(yǎng)基中加入剛果紅,而篩選纖維素分解菌則以培養(yǎng)基是否產(chǎn)生透明圈來篩選。答案:(1)碳源、氮源、無機(jī)鹽、水碳源和維生素pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣(2)消毒高壓蒸汽滅菌(3)平板劃線法稀釋涂布平板法(4)纖維素剛果紅透明圈8分離篩選降解纖維素能力強(qiáng)的微生物,對于解決秸稈等廢棄物資源的再利用和環(huán)境污染問題具有理論和實(shí)際意義。研究人員從土壤和腐爛的秸稈中分離篩選出能高效降解纖維素的菌株,并對篩選出的菌株進(jìn)行了初步研究。(1)對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用方法是_。為在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落,若以接種環(huán)為工具,則用_法進(jìn)行接種。(2)先將樣品懸液稀釋后涂在放有濾紙條的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選得到初篩菌株,再將初篩菌株接

20、種到以_為唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)25 d,加入_溶液后,依據(jù)出現(xiàn)的顏色反應(yīng)進(jìn)行篩選,觀察菌落特征并測量_。同時(shí)將初篩菌株制備成的菌液放入加有濾紙條的液體培養(yǎng)基中,恒溫振蕩培養(yǎng)8 d,觀察濾紙條的破損情況,結(jié)果見表。由表可知,8種菌株中1、3、7號菌株產(chǎn)酶能力較強(qiáng),你的解釋是_。菌株編號檢測指標(biāo)1號2號3號4號5號6號7號8號DP5.911.736.541.533.231.767.291.34濾紙破損注:DP(D/d)2,其中d表示菌落直徑(cm),D表示透明圈直徑(cm);“”為濾紙邊緣膨脹;“”為濾紙整齊膨脹并彎曲;“”為濾紙不定形;“”為成團(tuán)糊狀;“”為半清狀。(3)為進(jìn)一步研究1、3、7號

21、菌株對秸稈降解的效果,分別用這三種菌株對秸稈進(jìn)行處理,并在第5 d和第10 d對秸稈和秸稈中含有的纖維素、半纖維素以及木質(zhì)素等組分的降解情況進(jìn)行了測定。結(jié)果如圖。由圖分析可知,三種菌株對_的降解最強(qiáng),與第5 d結(jié)果相比,第10 d秸稈各組分中_的降解率變化最大。解析:(1)對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌。平板劃線法中利用接種環(huán)或接種針,稀釋涂布平板法利用涂布器涂布稀釋液。(2)分離篩選出能高效降解纖維素的菌株時(shí),培養(yǎng)基應(yīng)以纖維素為唯一碳源;鑒別纖維素分解菌時(shí)需要加入剛果紅染液,當(dāng)形成菌落以后可以根據(jù)菌落周圍是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。由表可知,8種菌株中1、3、7號三種菌株透明圈直徑與菌落直徑的比都較高,且濾紙片破損程度高,表明這些菌株產(chǎn)酶能力較強(qiáng)。(3)分析柱形圖可知,三種菌株對半纖維素的降解最強(qiáng);與第5 d結(jié)果相比,第10 d秸稈各組分中纖維素的降解率變化最大。答案:(1)高壓蒸汽滅菌平板劃線(2)纖維素 剛果紅 透明圈直徑與菌落直徑此三種菌株透明圈直徑與菌落直徑的比都較高,且濾紙片破損程度高(3)半纖維素纖維素

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