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1、
幽門螺旋桿菌尿素酶抗體檢測操作程序
(膠體金法)
1.目的
用于定性檢測人血液樣本中的胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體,可用于臨床輔助診斷消化道胃幽門螺旋桿菌感染。
2.范圍
適用于臨床對幽門螺旋桿菌尿素酶抗體的檢測。
3. 檢驗原理
試劑盒應用滲濾式間接法原理,將幽門螺旋桿菌尿素酶固定在硝酸纖維素膜載體上,待檢血清中幽門螺旋桿菌尿素酶抗體IgGY與抗原結合形成抗原抗體復合物,加入膠體金標記的鼠抗人IgG單克隆抗體與復合物結合,根據是否形成肉眼可見的紅色圓斑(T端),判斷結果。硝酸纖維素膜上的質控區(qū)固定有兔抗鼠IgG,加入膠體金標記的鼠抗人IgG單克隆抗體后與之結合形成紅色圓
2、斑(C端)。
4.主要組成成分
4.1 反應板:4.2cm×2.8cm×0.7cm上下對合、中央有直徑為0.9±0.05cm小孔的塑料小盒,其內主要為固定有油門螺旋桿菌尿素酶抗原的硝酸纖維素膜和吸水材料
4.2 試劑Ⅰ:0.02mol/L PH 7.4 PBS溶液,內含吐溫-20.
4.3 試劑Ⅱ:主要含有膠體金標記的鼠抗人IgG單克隆抗體、穩(wěn)定劑和防腐劑。
5.儲存條件及有效期
產品應儲存在2℃-8℃條件中,不能冷凍;有效期9個月。拆封后未用完的反應板應放入密封袋2℃-8℃保存,應在一個月內用完。
6. 樣本要求
6.1 樣本采集:按照臨床采血技術規(guī)范操作采集靜脈血,
3、采集的靜脈血置室溫30分鐘或37℃水浴15-20分鐘后,低速離心(2000轉/分-3000轉/分)5-10分鐘,分離血清。
6.2 樣本保存:若分離后的血清不能及時檢測,應將樣本保存在2℃-8℃條件下,若保存時間超過7天,則需將樣本保存在-20℃以下并避免反復凍融,以免抗體效價降低。
6.3 當明顯溶血(血紅蛋白濃度>1.96g/L)、黃疸(膽紅素濃度>40.1umol/L)、高血脂(甘油三酯濃度>7.0mmol/L),影響血清的滲透性并明顯增加反應膜的背景顏色,對結果的判斷有影響,此類標本不宜使用。
7.檢測步驟
7.1 滴加二滴試劑Ⅰ于反應板孔中,待完全滲入;
7.2 滴加100
4、ul血清于反應板孔中,待完全滲入;
7.3 滴加二滴試劑Ⅰ于反應板孔中,待完全滲入;
7.4 滴加二滴試劑Ⅱ于反應板孔中,待完全滲入;
7.5 滴加二滴試劑Ⅰ于反應板孔中,待完全滲入;
7.6 操作完成后5分鐘內判斷結果。
8.檢測結果的判斷
陽性:反應板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑,T端出現(xiàn)紅色圓斑,為幽門螺旋桿菌尿素酶抗體陽性。
陰性:反應板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑,T端不出現(xiàn)紅色圓斑,為幽門螺旋桿菌尿素酶抗體陰性。
失效:反應板孔中C端不出現(xiàn)紅色圓斑,或C、T端均不出現(xiàn)紅色圓斑,表示失效。可能是由于操作不正確或試劑盒失效,應重試。
9.參考范圍
正常:陰性 異常:陽性。
5、
10.臨床意義
10.1 本方法僅用于定性檢測人血液中的胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體。
10.2 陽性結果僅表明:胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體的存在,但不能作為胃幽門螺旋桿菌感染的唯一判斷標準,確診應結合臨床癥狀及其他診斷技術。也可根據問診結果,3-6個月內沒有進行根除治療者,陽性結果即為現(xiàn)癥感染;3-6個月內有進行根除治療者,陽性結果為疑似感染,需進行其它方法檢測,或過一段時間進行重復檢測。
10.3 病人曾經感染過幽門螺旋桿菌,其抗體也在較長時間存在于體內,因此抗體陽性結果并不能說明病人正感染著幽門螺旋桿菌。
10.4 陰性結果表明:樣本中檢測不到幽門螺桿菌抗體,但不能完全排除胃幽門螺
6、旋桿菌感染的可能性,可能是胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體沒有出現(xiàn)或是抗體水平過低不能被本試劑盒檢測出來。也可根據問診結果,3-6個月內有進行治療者,陰性結果即為根除治療成功;3-6個月內未進行根除治療者,陰性結果即為未感染幽門螺桿菌。
11.檢驗方法的局限性
11.1 本試劑僅用于檢測幽門螺旋桿菌尿素酶抗體而非直接檢測幽門螺旋桿菌,因而陽性結果并不能確診是幽門螺旋桿菌感染。檢測結果僅供臨床參考,不能單獨作為確診或排除病例的依據,為達到診斷目的,對患者狀況的診斷應結合患者臨床體征與癥狀和其他的檢測結果綜合分析。
11.2 抗體含量低的血清樣本,不能被檢測出來是可能的。部分幽門螺旋桿菌感染的患者,
7、不產生抗體或產生少量的抗體。此時,可能顯示陰性結果。
11.3 當檢測結果與臨床不符時,應用培養(yǎng)基進行培養(yǎng)或用其他方法確診。
11.4 感染初期,IgG未產生或滴度很低會導致陰性結果,應提示患者在7-14天內復查,復查時同時平行檢測上次采集的標本以確認是否出現(xiàn)血清學轉陽或滴度明顯升高。
11.5 免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者,其血清學抗體檢測的參考價值有限。
12.產品性能指標
12.1 滲透時間:膜的滲透時間小于60秒。
12.2 符合率:陽性符合率和陰性符合率為100%。
12.3 批內精密度:陽性參考品和陰性參考品檢測的重復性為100%。
12.4 批間精密度:陽
8、性參考品和陰性參考品檢測的重復性為100%。
12.5 最低檢出限:陽性參考品用陰性參考品進行倍比稀釋至1:2作為最低檢出限。
12.6 交叉反應:本試劑盒的檢測與解脲支原體抗體陽性血清存在交叉反應,未發(fā)現(xiàn)與以下病原體抗體陽性血清存在交叉反應:乙肝病毒、丙肝病毒、克萊伯氏菌。
12.7 干擾試驗:樣本中含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑時不影響結果,當RF濃度高于350IU/ml時,有假陽性出現(xiàn),ANA、ENA自身抗體,通常不影響試驗結果。血清中膽紅素、血紅蛋白、血脂在通常情況下不會影響試驗結果,但當它們的濃度分別超過40.1umol/L、1.96g/L、7.0mmol/L將干擾結果
9、觀察,此類標本不宜使用。
13.注意事項
13.1 本品僅供體外檢測之用。
13.2 在盒簽標明的有效期內使用。
13.3 血液收集后盡快分離血清或血漿避免溶血,只有清亮的非溶血樣本可用。
13.4 請將低溫保存的血清或血漿樣本恢復到室溫后使用,不要反復凍融。
13.5試驗中所有樣品均應作為傳染性物品處理。
13.6檢測線的顏色強度隨樣品中幽門螺桿菌尿素酶抗體濃度的變化而變化,但不宜用于檢測幽門螺桿菌尿素酶抗體的濃度。
14.參考文獻:
14.1 尚紅,王毓三,申子瑜主編《全國臨床檢驗操作規(guī)程》
14.2 三明博峰生物科技有限公司幽門螺旋桿菌尿素酶抗體檢測使用說明書
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參考分析#