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1、細(xì)胞培養(yǎng)中的三維基質(zhì),細(xì)胞培養(yǎng)中的三維基質(zhì),楊文清11208120,1,三維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)( three-dimensional cell culture,TDCC) 是指將具有三維結(jié)構(gòu)不同的載體與各種不同種類的細(xì)胞在體外共同培養(yǎng), 使細(xì)胞能夠在載體的三維立體空間結(jié)構(gòu)中遷移、生長(zhǎng), 構(gòu)成三維的細(xì)胞載體復(fù)合物。,2,3,4,海藻酸鈣凝膠：,海藻酸鈣凝膠包埋法是將動(dòng)物細(xì)胞與一定量的海藻酸鈣溶液混合均勻，然后滴到一定濃度的氯化鈣溶液中，形成直徑約1mm的內(nèi)含動(dòng)物細(xì)胞的海藻酸鈣膠珠，分離洗滌后即可用于培養(yǎng)。此法操作時(shí)條件溫和，對(duì)活細(xì)胞損傷小。但固定后機(jī)械強(qiáng)度不高。為了大量制備海藻酸鈣凝膠包埋的固定化細(xì)胞
2、，國(guó)外已有專門的固定噴嘴設(shè)備可供使用。,5,瓊脂糖凝膠：,瓊脂糖凝膠可用二相法制得。將含有細(xì)胞的瓊脂糖溶液分散到一個(gè)水部溶相中（如石蠟油），形成直徑約0.2mm的凝膠珠，移去石蠟油后，細(xì)胞即可進(jìn)行培養(yǎng)。同海藻鈣一樣，瓊脂糖更適合培養(yǎng)懸浮細(xì)胞，盡管凝膠珠的形成過(guò)程很復(fù)雜，目前放大體積不足20L。但瓊脂糖凝膠無(wú)毒性，具有較大的空隙，可以允許大分子物質(zhì)自由擴(kuò)散，因此該法適合于蛋白質(zhì)物質(zhì)的連續(xù)生產(chǎn)。有人曾用瓊脂糖包埋雜交瘤細(xì)胞和淋巴細(xì)胞生產(chǎn)單克隆抗體和白細(xì)胞介素。,6,血纖維蛋白：,將動(dòng)物細(xì)胞和血纖維蛋白原混合，然后加入凝血酶。凝血酶將血纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為不溶性的血纖維蛋白，將動(dòng)物細(xì)胞固定在其中。血纖維
3、蛋白可以促進(jìn)細(xì)胞貼壁，因此兩種類型的細(xì)胞都適于培養(yǎng)。而且基質(zhì)高度多孔，允許大分子物質(zhì)自由擴(kuò)散，但機(jī)械強(qiáng)度差，對(duì)剪切力很敏感。,7,血管內(nèi)皮細(xì)胞的三維培養(yǎng)：,在三維培養(yǎng)的情況下，內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)空間增殖、遷移和錨定，可形成管狀結(jié)構(gòu)， 比二維平面培養(yǎng)更適合用于血管新生的研究。不同的立體培養(yǎng)模型可用于不同目的的研究。,8,三維培養(yǎng)模型因能用于觀察血管新生過(guò)程的更多方面，例如內(nèi)皮細(xì)胞的出芽等，因而比二維培養(yǎng)有更多優(yōu)點(diǎn)。在三維培養(yǎng)模型中使用合適的三維基質(zhì)，可使激活的內(nèi)皮細(xì)胞長(zhǎng)入三維基質(zhì),合適的三維基質(zhì)包括膠原膠(col lagen gel)、血凝塊(pla sma clot)、纖維蛋白膠(fibrin ge
4、l)、基底膜基質(zhì)復(fù)合物(matrigel)， 或者以上幾種蛋白質(zhì)的混合物。型膠原在三維培養(yǎng)基質(zhì)中使用最廣泛。型膠原是體內(nèi)含量最多的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，其酸性可溶成分被中和后，能在體外37 溫度下形成凝膠。將細(xì)胞接種于其表面或其內(nèi)部，可觀察到細(xì)胞形態(tài)的變化和管狀結(jié)構(gòu)的形成過(guò)程。因此這樣的培養(yǎng)能模擬體內(nèi)的血管新生過(guò)程。,9,三維立體培養(yǎng)的方法有多種，常用的有膠內(nèi)培養(yǎng)模式(細(xì)胞與膠原膠混合)、膠上培養(yǎng)模式(細(xì)胞生長(zhǎng)于膠原膠表面)和三明治培養(yǎng)模式(細(xì)胞生長(zhǎng)于兩層膠原中間)。膠內(nèi)培養(yǎng)模式可用于觀察血管生成(vasculogenesis)過(guò)程， 即模擬體內(nèi)血管從無(wú)到有的過(guò)程。在膠上培養(yǎng)模式和三明治培養(yǎng)模式中，內(nèi)皮細(xì)胞出芽并形成管腔，與血管新生相仿，可模擬體內(nèi)從原有血管處發(fā)芽生成新血管的過(guò)程。除了形態(tài)學(xué)觀察外，還可以用膠原酶消化膠原塊并收集細(xì)胞，進(jìn)行其他后續(xù)研究。,10,謝謝！,資料來(lái)源：,,百度百科,楊文清 11208120 2010.12.10,11,
細(xì)胞培養(yǎng)中的三維基質(zhì)楊文清
