免疫凝集反應(yīng)及臨床應(yīng)用課件

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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,精選ppt,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,二級,三級,四級,五級,*,免疫凝集反應(yīng)及臨床應(yīng)用,劉 靜,2014.11.26,1,精選ppt,細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞或細(xì)胞性抗原等,顆粒性,抗原，或,可溶性,抗原（或抗體）與,載體顆粒,結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在,一定條件,下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,凝集反應(yīng)定義,2,精選ppt,反應(yīng)階段：,抗原抗體的特異性結(jié)合階段,出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象

2、,凝集反應(yīng),反應(yīng)特點：,IgM,的作用比,IgG,大數(shù)百倍,IgG,與抗原結(jié)合后，常不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，稱不完全抗體,3,精選ppt,可見反應(yīng)形成,4,精選ppt,電解質(zhì)：,稀釋液或緩沖液（,8.5g/L NaCl,）,pH,：,pH6,pH9,（,pH3,為細(xì)菌抗原的等電點）,溫度：,15,40,，,37,最適（,4,特例,）,反應(yīng)時間：,不同反應(yīng)時間不同,外力：,震蕩或攪拌,環(huán)境因素,5,精選ppt,分類：直接與間接凝集反應(yīng),6,精選ppt,顆粒性抗原,直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,包括：,玻片凝集試驗,試管凝集試驗,直接凝集反應(yīng),direct agglutina

3、tion,7,精選ppt,玻片,凝集試驗：,定性,已知抗體檢測抗原,簡便,、,快速,菌種,的診斷或分,型,ABO,血型的,鑒定,8,精選ppt,試管凝集試驗：,半定量,已知抗原檢測抗體,易引起,抗原的非特異性,凝集,肥達(dá)試驗,9,精選ppt,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,棄掉,0.5,試管凝集試驗原理,結(jié)果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,10,精選ppt,+,很小的凝集顆粒,混濁,-,無凝集現(xiàn)象,與對照相同,+,小、部分凝集塊,中等混濁,+,大多凝集管底,輕度混濁,+,大的凝集塊,清亮,凝集程度,沉淀,上清,試管凝集試驗結(jié)果判斷,11,精選ppt,管底沉淀,凝集程度,最高稀釋比例

4、,待測血清的滴度,試管凝集試驗,結(jié)果判斷,12,精選ppt,將,可溶性抗原或抗體,吸附于,顆粒性載體,表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象,間接凝集反應(yīng),indirect agglutination,13,精選ppt,RBC,、白陶土、活性炭、某些細(xì)菌、聚苯乙烯膠乳顆粒,良好載體有如下幾點基本要求：在生理鹽水或緩沖液無自凝傾向；大小均勻；比重與介質(zhì)相似，短時間內(nèi)不能沉淀；無化學(xué)或血清學(xué)活性；吸附抗原（或抗體）后，不影響其活性。,目前應(yīng)用最廣的是人的,O,型紅細(xì)胞和綿羊紅細(xì)胞。而后者應(yīng)用更廣，因為其來源方便。另外綿羊紅細(xì)胞的表面有大量的（約,1 000,個以

5、上）糖蛋白受體，極易吸附某些抗原物質(zhì)，吸附性能好。,載體種類,14,精選ppt,正向間接凝集試驗,反向間接凝集試驗,間接凝集抑制試驗,協(xié)同凝集試驗,間接凝集反應(yīng),15,精選ppt,用抗原致敏載體-檢測抗體,正向間接凝集反應(yīng),16,精選ppt,反向間接凝集反應(yīng),用抗體致敏載體-檢測抗原,17,精選ppt,間接凝集抑制反應(yīng),用抗原致敏載體-檢測抗原,有凝集顆粒為,陰性,18,精選ppt,反向間接凝集試驗，載體為金黃色葡萄球菌,金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁成分,A,蛋白，和,IgG,的,Fc,段結(jié)合，使,Fab,段暴露在菌體表面，,Fab,段仍然保持正常的抗體活性。,利用這種特性可以將特異性,IgG,結(jié)合

6、在菌體上，形成致敏顆粒，檢測特異性抗原。,協(xié)同凝集反應(yīng),19,精選ppt,原理圖,IgG,SPA,SPA-IgG,待測抗原,SPA-IgG-,待測抗原凝集顆粒,混合,加入,20,精選ppt,間接血凝試驗,膠乳凝集試驗,明膠凝集試驗,按載體分類間接凝集試驗,21,精選ppt,以紅細(xì)胞為載體的間接凝集試驗。,將已知抗原,(,或抗體）致敏紅細(xì)胞，與相應(yīng)抗體（或抗原）特異結(jié)合，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。,間接血凝試驗,22,精選ppt,紅細(xì)胞,抗原,致敏,致敏紅細(xì)胞,紅細(xì)胞凝集,間接血凝試驗,待測抗體,間接血凝試驗原理,23,精選ppt,-,：紅細(xì)胞沉積于孔底,+,：紅細(xì)胞沉積于孔底，周圍有散在少量凝集,+

7、,：紅細(xì)胞形成凝集，面積較小，邊緣較松散,+,：紅細(xì)胞形成片層凝集，面積略多于,+,+,：紅細(xì)胞形成片層凝集，均勻布滿孔底，或邊緣皺縮如花邊狀,血凝試驗強(qiáng)度,24,精選ppt,與一般間接血凝試驗不同之處為反應(yīng)中的,紅細(xì)胞是未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞,主要試劑材料為,抗紅細(xì)胞單克隆抗體,，能與紅細(xì)胞結(jié)合，但不引起凝集反應(yīng),這種抗體與另一特異性抗體連接成的,雙功能抗體,可用于檢測標(biāo)本中的抗原,如與特異性抗原連接，則可用于檢測標(biāo)本中的抗體,反應(yīng)中的,標(biāo)本為受檢者的全,血,HIV,抗體、,HBV,抗原檢測,自身紅細(xì)胞凝集試驗,25,精選ppt,膠乳凝集試驗,以聚苯乙烯膠乳為載體顆粒的間接凝集反應(yīng),膠乳

8、為人工合成的載體，性能比紅細(xì)胞穩(wěn)定，均一性好,但與蛋白質(zhì)結(jié)合能力以及聚集性能不如紅細(xì)胞,因此作為間接凝集反應(yīng)，膠乳凝集的敏感度不及血凝試驗,26,精選ppt,明膠凝集試驗,以明膠為載體顆粒的間接凝集反應(yīng),用粉紅色明膠顆粒吸附病毒抗原或重組抗原,當(dāng)致敏明膠顆粒與樣品血清作用時，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集,常用于抗,HIV-1,抗體和抗精子抗體的檢測,梅毒,螺旋體明膠顆粒凝集試驗,(TPPA),27,精選ppt,抗球蛋白參與的血凝試驗,28,精選ppt,抗球蛋白參與的血凝試驗,又稱,Coombs,試驗，利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異性抗體，使紅細(xì)

9、胞凝集,用于檢測抗紅細(xì)胞不完全抗體,不完全抗體：能與顆粒抗原牢固結(jié)合，但一般不出現(xiàn)可見反應(yīng)，多為,7S,的,IgG,診斷免疫性溶血性貧血的主要方法,29,精選ppt,抗球蛋白參與的血凝試驗,分為兩種方法：,直接,Coombs,試驗,間接,Coombs,試驗,30,精選ppt,直接,Coombs,試驗,檢測紅細(xì)胞上的不完全抗體,31,精選ppt,新生兒溶血癥,自身免疫性溶血癥,特發(fā)性自身免疫性貧血,醫(yī)源性溶血,臨床應(yīng)用,32,精選ppt,間接,Coombs,試驗,檢測血清中游離的不完全抗體,33,精選ppt,檢測母體,Rh(D),抗體,檢測紅細(xì)胞不相容的輸血所產(chǎn)生的血型抗體,臨床應(yīng)用,34,精選ppt,35,精選ppt,感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，,如有侵權(quán)請及時聯(lián)系我們刪除，謝謝配合！,