局部進展期散發(fā)性結(jié)直腸癌CpG島甲基子表型和預(yù)后的關(guān)系課件

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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,28/10/2006,第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,第 頁,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,局部進展期散發(fā)性結(jié)直腸癌,CpG,島甲基子表型,和預(yù)后的關(guān)系,蔡國響 博士,復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 大腸外科,復(fù)旦大學(xué)大腸癌診治中心,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會上海,2010,1,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響局部進展,結(jié)直腸癌發(fā)病率居上海市區(qū)惡性腫瘤第二位。,30,40,結(jié)直腸癌患者最終死于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。,TNM,分期是目前預(yù)測復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、指導(dǎo)輔助治療的最佳依據(jù)。,美國,SEER,數(shù)據(jù)顯示：部分,TNM

2、,期別和預(yù)后之間缺乏相關(guān)性（,A,期結(jié)直腸癌生存率反而高于,B,期）。,在,TNM,分期基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用新的分子生物學(xué)指標(biāo)提高預(yù)后判斷準確性是目前腫瘤研究熱點。然而，迄今尚未找到公認的具有臨床應(yīng)用價值的預(yù)后分子指標(biāo)。,研究背景,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,2,結(jié)直腸癌發(fā)病率居上海市區(qū)惡性腫瘤第二位。研究背景22/05/,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究背景,表遺傳學(xué),遺傳學(xué),非,DNA,序列變化引起的,可遺傳的基因表達改變,全基因組低甲基化,癌基因異常甲基化,抑癌基因過度甲基化,組蛋白異常修飾,3,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會

3、 蔡國響研究背景,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究背景,4,抑癌基因啟動子甲基化導(dǎo)致基因失表達,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響研究背景,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究背景,正常大腸粘膜,大腸癌組織,基因啟動子,CpG,島非甲基化,基因啟動子,CpG,島甲基化,大腸癌相關(guān)腫瘤特異性甲基化位點：,p14,、,hMLH1,、,p16,、,MGMT,、,MINT1,5,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響研究背景,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究背景,CpG,島甲基子表型（,CIMP,）被

4、認為是繼染色體不穩(wěn)定（,CIN,）和微衛(wèi)星不穩(wěn)定（,MSI,）之后發(fā)現(xiàn)的第三種基因組不穩(wěn)定機制。,CIMP,反映多個抑癌基因的同時過度甲基化狀態(tài)。,CIMP,（）判斷標(biāo)準：同時甲基化位點的數(shù)目達到,2/3,、,3/5,、,3/6,或,3/7,等及其以上。,結(jié)直腸癌,CIMP,的預(yù)后意義相關(guān)研究較少，存在一定的爭議。,文獻中未見同時研究三種基因組不穩(wěn)定機制（,CIMP,、,CIN,和,MSI,）的預(yù)后價值的研究。,6,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響研究背景,探討,各種臨床病理以及分子生物學(xué)指標(biāo)和,/,期散發(fā)性結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系。,探討結(jié)直腸癌多基因甲基化的預(yù)后意義。,22/0

5、5/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究目標(biāo),7,探討各種臨床病理以及分子生物學(xué)指標(biāo)和/期散發(fā)性結(jié)直腸癌預(yù),22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究對象,2004,年,7,月,11,月接受根治性手術(shù)切除的,50,例,/,期,散發(fā)性大腸癌患者的原發(fā)病灶,初治患者,明確的術(shù)后病理診斷,術(shù)前未行放化療,無任何腫瘤家族史,術(shù)后半小時內(nèi)新鮮取材,8,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響研究對象,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究方法免疫組化檢測（,IHC,）,檢測指標(biāo)：,k-ras,、,APC,、,p53,、,BAX,、,TGFR,IHC

6、,結(jié)果的判斷標(biāo)準,腫瘤細胞胞漿（,k-ras,、,APC,、,Bax,、,TGFR,）,或胞核（,p53,）染色陽性者所占比例,10,為陽性,腺癌，癌組織,APC,陽性表達，定位于細胞漿,9,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響研究方法,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究方法流式細胞儀檢測（,FCM,）,倍體分析的判斷標(biāo)準,DNA,指數(shù)（,DI,）腫瘤細胞的,G0/1,峰均道值,/,正常細胞的,G0/1,峰均道值,二倍體（,DI,1,）和異倍體（,DI1,）,異倍體者定義為,CIN,（）,二倍體,異倍體,10,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡

7、國響研究方法,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,檢測位點：,BAT25,、,BAT26,MSI,的判斷標(biāo)準,微衛(wèi)星位點陰性：主峰（單一峰型）,微衛(wèi)星位點陽性：主峰新生峰,MSI,（）：,2,個位點中任意一個出現(xiàn)陽性結(jié)果,MSI,（）,MSI,（）,研究方法 微衛(wèi)星不穩(wěn)定（,MSI,）檢測,11,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響檢測位點,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究方法,甲基化特異性,PCR,（,MSP,）,檢測位點：,p14,、,hMLH1,、,p16,、,MGMT,和,MINT1,MSP,反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準,未甲基化：,PC

8、R,產(chǎn)物電泳時只出現(xiàn)未甲基化條帶,甲基化：,PCR,產(chǎn)物電泳時出現(xiàn)甲基化條帶，無論是否出現(xiàn)未甲基化條帶,CIMP,（）：,3/5,個位點同時出現(xiàn)甲基化條帶,12,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響研究方法,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,SPSS11.5,軟件,生存分析：,壽命表法：計算無疾病生存（,DFS,）,單因素分析：,Kaplan-Meier法,多因素分析：,Cox回歸法,檢驗標(biāo)準：,P,0.05,統(tǒng)計學(xué)分析,13,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響SPSS,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,性別：男性,23,例

9、，女性,27,例。,年齡：平均,54.54 11.76,歲（,22-80,歲）。,部位：結(jié)腸癌,18,例，直腸癌,32,例。,腫瘤最大徑：平均,5.24 2.53 cm,（,2-16cm,）。,組織類型：腺癌,39,例，粘液腺癌,11,例。,分化程度：高中分化,36,例，低分化,14,例。,脈管或神經(jīng)侵犯：脈管侵犯（,+,）,6,例，神經(jīng)侵犯（,+,）,4,例。,TNM,分期：,A,期,11,例，,B,期,7,例，,期,32,例。,14,研究結(jié)果臨床病理信息,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響性別：男,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,輔助化療：,36,例患

10、者接受含,5Fu,方案的靜脈化療,3,月以上,隨訪時間：全部病例隨訪超過,3,年，平均隨訪時間,47.64 17.68,月。,生存情況：死亡,13,例。,5,年總生存率,62,。,復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移：局部復(fù)發(fā),3,例，遠處轉(zhuǎn)移,19,例，復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,20,例（其中,2,例為遠處轉(zhuǎn)移同時合并局部復(fù)發(fā)）。,5,年無疾病生存率（,DFS,）,58,。,15,研究結(jié)果隨訪情況,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響輔助化療,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,腫瘤抗原檢測,：,CEA,異常升高者,9,例（,10,ug/l,），,CA19.9,異常升高者,10,例（,37 U/ml,

11、）,IHC,檢測：,蛋白表達陽性者：,k-ras,（,21,例）、,APC,（,20,例）、,p53,（,21,例）、,BAX,（,34,例）、,TGFR,（,29,例）,倍體分析：,二倍體,16,例，異倍體,33,例，,1,例因,CV,值大于,8,從分析中剔除。,MSI,檢測：,MSI,（）者,6,例（,12,）,MSP,檢測：,單一基因高甲基化者：,hMLH1,（,7,例）,MGMT,（,14,例）,p16,（,13,例）,p14,（,15,例）,MINT1,（,27,例）。,CIMP,（）者,12,例（,24,）。,16,研究結(jié)果分子生物學(xué)檢測,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會

12、 蔡國響腫瘤抗原,指標(biāo),p,值,Kaplan-Meier,Cox Regression,年齡,（,60,歲，,60,歲）,0.815,/,性別,（男，女）,0.990,/,部位,（結(jié)腸，直腸）,0.111,/,腫瘤最大徑,(,3.0cm,3.0cm),0.620,/,組織類型（腺癌，粘液腺癌）,0.671,分化程度（高中分化，低分化）,0.681,/,脈管侵犯,(,陽性，陰性,),0.128,/,神經(jīng)侵犯（陽性，陰性）,0.723,/,TNM,分期（,期，,期）,0.049,0.175,輔助化療（是，否）,0.781,/,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究結(jié)果,DFS,

13、生存分析（臨床病理指標(biāo)）,17,p 值Kaplan-MeierCox Regression年,指標(biāo),P,值,Kaplan-Meier,Cox Regression,CEA,（正常，異常）,0.304,/,CA19.9,（正常，異常）,0.141,/,IHC-kras,(,陽性，陰性,),0.657,/,IHC-APC,(,陽性，陰性,),0.596,/,IHC-p53,(,陽性，陰性,),0.700,/,IHC-BAX,(,陽性，陰性,),0.577,/,IHC-TGF,R,(,陽性，陰性,),0.434,/,倍體（異倍體，二倍體）,0.997,/,MSI,（陽性，陰性）,0.988,/,22

14、/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究結(jié)果,DFS,生存分析（分子生物學(xué)指標(biāo)）,18,P 值Kaplan-MeierCox RegressionC,指標(biāo),P,值,Kaplan-Meier,Cox Regression,MSP-hMLH1,（陽性，陰性）,0.691,/,MSP-MGMT,（陽性，陰性）,0.885,/,MSP-p16,（陽性，陰性）,0.027,/,MSP-p14,（陽性，陰性）,0.422,/,MSP-MINT1,（陽性，陰性）,0.356,/,CIMP,0.014,0.019,HR,（,95,CI,）：,2.935,（,1.193-7.220,）,22/05

15、/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,研究結(jié)果,DFS,生存分析（分子生物學(xué)指標(biāo)）,19,P值Kaplan-MeierCox RegressionMS,/,期散發(fā)性結(jié)直腸癌無疾病生存分析（,Kaplan-Meier,法）,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,5y-DFS 66,5y-DFS 30,研究結(jié)果,DFS,生存分析（,CIMP,）,20,/期散發(fā)性結(jié)直腸癌無疾病生存分析（Kaplan-Meie,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,討論,CIMP,和結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系,文獻中關(guān)于,CIMP,和結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系存在一定的爭議。,多數(shù)研究,顯示,C

16、IMP陽性提示預(yù)后不良,，和本研究結(jié)果一致。,J Clin Oncol,（,2003,）,21:37293736,Clin Cancer Res,（,2007,）,13:60936098,Cancer Res,（,2008,）,68:8541-8546,少數(shù)研究顯示,CIMP陽性,者預(yù)后較好。,Gut,（,2009,）,58:9096,個別研究認為,CIMP沒有預(yù)后價值。,Virchows Arch(2009)455:485494,研究結(jié)果存在差異的可能原因：,甲基化基因,panel,不同。,CIMP,判斷標(biāo)準不同。,實驗方法不同：,MSP,、,MethyLight,、,Pyrosequencing,。,21,22/05/2010第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響討論C,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會 蔡國響,討論,-,單基因高甲基化和結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系,本研究顯示在,CIMP,的,5,個,panel,基因中，,p16,基因的高甲基化可能在結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移機制中扮演重要角色。,p16,是重要的細胞周期調(diào)控基因，其編碼產(chǎn)物可與,Cyclin D,競爭結(jié)合,CDK4/6,，抑制