《2020版中國(guó)藥典微生物變更細(xì)則》解讀（PPT）

《《2020版中國(guó)藥典微生物變更細(xì)則》解讀（PPT）》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《《2020版中國(guó)藥典微生物變更細(xì)則》解讀（PPT）（96頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、-1- 新版藥典變更解讀新版藥典變更解讀 微生物相關(guān)微生物相關(guān) 分析質(zhì)檢中心微生物組分析質(zhì)檢中心微生物組 20202020年年0505月月 涉及內(nèi)容涉及內(nèi)容 藥典三部： 生物制品通則：生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程 總論：微生態(tài)活菌制品總論（變更） 通則 1101 無(wú)菌檢查法（變更） 1105 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法 1106 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法 1107 非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn) 3605 細(xì)菌生化反應(yīng)培養(yǎng)基 1421 滅菌法 9202 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查指導(dǎo)原則 9203 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則 9204 微生物鑒定指導(dǎo)原則（變更） 9

2、205 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則（變更） 通則 新增新增 滅菌用生物指示劑指導(dǎo)原則（新增） 生物指示劑耐受性檢查法指導(dǎo)原則（新增） 細(xì)菌 DNA 特征序列鑒定法（新增） 一、生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程一、生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程 菌毒種，系指直接用于制造和檢定生物制品的細(xì)菌、支原體、立克次體或病毒等 生產(chǎn)和檢定用菌毒種，來(lái)源途徑應(yīng)合法，并經(jīng)國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn)。 微生物檢測(cè)用菌來(lái)源： CMCC:中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心 CICC:中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心 ATCC:美國(guó)微生物菌株保藏中心 生物制品生產(chǎn)用菌毒種應(yīng)采用種子批系統(tǒng)。每批主種子批和工作種子批均應(yīng)

3、按各論要求保管、檢定和使用。 菌毒種的傳代及檢定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合國(guó)家生物安全的相關(guān)規(guī)定。 各生產(chǎn)單位質(zhì)量管理部門(mén)對(duì)本單位的菌毒種施行統(tǒng)一管理。 保管菌毒種應(yīng)有嚴(yán)格的登記制度，建立詳細(xì)的總賬及分類(lèi)賬。收到菌毒種后應(yīng)立即進(jìn)行編號(hào)登記，詳細(xì)記錄菌毒種的學(xué)名、株名、歷史、來(lái)源、特性、用途、批號(hào)、傳代凍干日期和數(shù)量。在保管過(guò)程中，凡傳代、凍干及分發(fā)，記錄均應(yīng)清晰，可追溯，并定期核對(duì)庫(kù)存數(shù)量。 收到菌毒種后一般應(yīng)及時(shí)進(jìn)行檢定。用培養(yǎng)基保存的菌種應(yīng)立即檢定 生產(chǎn)用菌毒種應(yīng)按各論要求進(jìn)行檢定 銷(xiāo)毀四類(lèi)菌毒種須經(jīng)單位領(lǐng)導(dǎo)批準(zhǔn)。銷(xiāo)毀后應(yīng)在賬上注銷(xiāo)，作出專(zhuān)項(xiàng)記錄，寫(xiě)明銷(xiāo)毀原因、方式和日期。 二、微生態(tài)活菌制品總論二、微

4、生態(tài)活菌制品總論 微生態(tài)活菌制品必須由非致病的活細(xì)菌組成，無(wú)論在生產(chǎn)過(guò)程、制品貯存和使用期間均應(yīng)保持穩(wěn)定的活菌狀態(tài)。它可由一株、多株或幾種細(xì)菌制成單價(jià)或多價(jià)聯(lián)合制劑。根據(jù)其不同的使用途徑和方法可制備成片劑、膠囊顆粒劑或散劑等多種劑型。 基本要求基本要求： 微生態(tài)活菌制品的制備方法、工藝應(yīng)能保證成品含有足夠的活菌數(shù)量，保持其穩(wěn)定性，同時(shí)應(yīng)防止外源因子的污染。生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原材料及輔料、水、器具、動(dòng)物等應(yīng)符合“凡例”的有關(guān)要求。 生產(chǎn)用菌種生產(chǎn)用菌種 生產(chǎn)用菌種應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”的有關(guān)規(guī)定 名稱(chēng)及來(lái)源； 種子批的建立：三級(jí)種子批應(yīng)分別凍干，置適宜溫度保存；種子批傳代應(yīng)限

5、定傳代次數(shù)，原始種子批和主種子批啟開(kāi)后傳代次數(shù)不得超過(guò)10代，工作種子批啟開(kāi)后至發(fā)酵培養(yǎng)傳代次數(shù)不得超過(guò)5代。 生產(chǎn)用菌種生產(chǎn)用菌種 種子批的檢定：應(yīng)依據(jù)最新版伯杰氏細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)和伯杰氏細(xì)菌命名手冊(cè)的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行，形態(tài)、生長(zhǎng)代謝特性檢查。原始種子或主種子還應(yīng)做遺傳特性和抗生素敏感性等檢查。 三級(jí)種子批常規(guī)檢查包括以下3 項(xiàng)： （1） 培養(yǎng)特性及染色鏡檢； （2） 生化反應(yīng)； （3） 毒性試驗(yàn) 原始種子或主種子批還需進(jìn)行以下檢查 （1） 細(xì)菌代謝產(chǎn)物脂肪酸測(cè)定 （2） 遺傳特性分析 （3） 抗生素敏感性試驗(yàn) （4） 穩(wěn)定性試驗(yàn) 生產(chǎn)用菌種生產(chǎn)用菌種 原始種子和主種子應(yīng)凍干保存于8以下，工作種

6、子應(yīng)置于適宜溫度保存 檢定檢定 微生態(tài)活菌制品質(zhì)量檢定應(yīng)包括菌粉檢定、半成品檢定和成品檢定 菌粉檢定菌粉檢定 1. 外觀 2. 目的菌檢查 取少量菌粉加入適量滅菌生理氯化鈉溶液或其他適宜稀釋液后，涂布在適宜瓊脂平皿上，在適宜條件下培養(yǎng)，其培養(yǎng)物的生長(zhǎng)特性和染色鏡檢的特征應(yīng)符合生產(chǎn)用菌種特征 。 3. 雜菌檢查 方法和結(jié)果判斷見(jiàn)本總論附錄3。如不符合規(guī)定應(yīng)廢棄。 4. 干燥失重 5. 活菌數(shù)測(cè)定 測(cè)定每克菌粉中含有的活菌數(shù)量。方法見(jiàn)本總論附錄2。 半成品的檢定半成品的檢定 半成品須做雜菌檢查，根據(jù)用藥途徑確定雜菌檢查的質(zhì)控指標(biāo)。方法和結(jié)果判斷見(jiàn)本總論附錄3。 成品檢定成品檢定 1. 鑒別試驗(yàn) 檢

7、查成品中所含的目的菌是否符合生產(chǎn)用菌種的特性。即按上述“種子批的檢定”方法進(jìn)行生長(zhǎng)特性、染色鏡檢和生化反應(yīng)檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 2. 理化檢查 3. 活菌數(shù)測(cè)定 按本總論附錄2方法測(cè)定每克制品中的活菌數(shù)，應(yīng)符合規(guī)定。多價(jià)制品應(yīng)分別測(cè)定各單價(jià)活菌數(shù)。 4. 雜菌檢查 方法和結(jié)果判斷與半成品的“雜菌檢查”項(xiàng)相同。 5. 安全試驗(yàn)（新版已刪除新版已刪除） 附錄附錄2 微生態(tài)活菌制品活菌數(shù)測(cè)定法微生態(tài)活菌制品活菌數(shù)測(cè)定法 無(wú)菌稱(chēng)取3.0g制品或菌粉（膠囊取內(nèi)容物），加入27.0ml稀釋液中，充分搖勻，做10倍系列稀釋?zhuān)ㄗ罱K稀釋度根據(jù)不同的指標(biāo)要求而定）。取最終稀釋度的菌液100l，滴入選擇性瓊脂培養(yǎng)基平

8、皿上，共做3個(gè)平皿，并以玻棒涂布均勻，置適宜條件下培養(yǎng)，到期觀察每個(gè)平皿菌落生長(zhǎng)情況，并計(jì)數(shù)。當(dāng)平皿菌落數(shù)小于10或大于300時(shí)，應(yīng)調(diào)整最終稀釋度，重新測(cè)定。 活菌數(shù)（CFU/g）=3個(gè)平皿菌落數(shù)之和/3*10*最終稀釋度 附錄附錄3 微生態(tài)活菌制品雜菌檢查法微生態(tài)活菌制品雜菌檢查法 微生態(tài)活菌制品雜菌檢查法系檢查微生態(tài)活菌制品的菌粉、半成品及成品受外源微生物污染程度的方法。檢查項(xiàng)目包括控制菌檢查，非致病性雜菌、真菌計(jì)數(shù)。 變更變更： 項(xiàng)目項(xiàng)目 2015版藥典版藥典 2020版藥典版藥典 雜菌檢查環(huán)境要求 10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí) 不低于D級(jí)背景下的B級(jí) 細(xì)菌培養(yǎng)溫度 30-37 3

9、0-35 真菌培養(yǎng)溫度 20-28 20-25 附錄附錄3 微生態(tài)活菌制品雜菌檢查法微生態(tài)活菌制品雜菌檢查法 新增： 由于供試品本身含有大量活菌，可能在雜菌檢查所用的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，干擾雜菌回收或結(jié)果判斷，在建立或修訂方法時(shí)應(yīng)考慮其適用性，充分了解供試品活菌在雜菌檢查培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特性。除本附錄收載的雜菌檢查用培養(yǎng)基之外，亦可采用其他經(jīng)驗(yàn)證的培養(yǎng)基。 附錄附錄3 微生態(tài)活菌制品雜菌檢查法微生態(tài)活菌制品雜菌檢查法 新增： 如果供試品本身對(duì)某些試驗(yàn)菌具有較強(qiáng)的抑菌性能，影響試驗(yàn)菌的回收。在此情況下，應(yīng)根據(jù)原輔料的雜菌負(fù)載、生產(chǎn)工藝及產(chǎn)品特性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，保證檢驗(yàn)方法的可靠性；在藥品生產(chǎn)、貯藏各個(gè)環(huán)節(jié)

10、中，應(yīng)嚴(yán)格遵循GMP的指導(dǎo)原則，以降低產(chǎn)品受雜菌污染的風(fēng)險(xiǎn)。 附錄附錄3 微生態(tài)活菌制品雜菌檢查法微生態(tài)活菌制品雜菌檢查法 新增： 控制菌檢查法檢出意思致病菌時(shí)，可參考“微生物鑒定指導(dǎo)原則（通則9204）”的提示進(jìn)行后續(xù)確證，確證的方法應(yīng)選擇已被認(rèn)可的菌種鑒定方法。 檢驗(yàn)量及供試品的準(zhǔn)備檢驗(yàn)量及供試品的準(zhǔn)備 檢驗(yàn)量，即一次試驗(yàn)所用的供試品量（g）。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2個(gè)以上最小包裝單位中隨機(jī)抽取不少于3倍檢驗(yàn)用量的供試品。 菌粉、半成品以及成品為散劑和顆粒劑的可直接稱(chēng)取備用；成品為片劑、膠囊劑的需研碎后備用。 供試品檢查 陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn) 供試品進(jìn)行控制菌檢查時(shí)，應(yīng)做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。取陽(yáng)性對(duì)照菌于相應(yīng)選擇

11、性培養(yǎng)基平皿上劃線接種，按供試品的控制菌檢查方法培養(yǎng)，觀察菌落生長(zhǎng)情況。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。 陰性對(duì)照試驗(yàn) 取增菌液0.1ml，照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。 控制菌檢查控制菌檢查 100l 大腸埃希氏菌； 志賀菌、沙門(mén)菌； 銅綠假單胞菌； 金黃色葡萄球菌； 梭菌； 白色念珠菌； 變更： 項(xiàng)目項(xiàng)目 2015版藥典版藥典 2020版藥典版藥典 增菌培養(yǎng) 稱(chēng)取供試品1g，加到9ml滅菌增菌液中 稱(chēng)取供試品1g，加到至少9ml滅菌增菌液中 特異培養(yǎng) 0.1ml 100ul 大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌 項(xiàng)目項(xiàng)目 2015版藥典版藥典 2020版藥典版藥典 供試品檢

12、查中大腸埃希氏菌結(jié)果判定及下一步鑒定指導(dǎo) 供試品平皿上若未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與陽(yáng)性對(duì)照的菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出大腸埃希菌；若生長(zhǎng)的菌落與陽(yáng)性對(duì)照的菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)做革蘭氏染色鏡檢等適宜的鑒定試驗(yàn)，鑒別是否為制品中的目的菌或大腸埃希菌。 供試品平皿上若有疑似菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為大腸埃希菌或制品中的目的菌；若平皿上未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為非控制菌，判供試品未檢出大腸埃希菌 志賀菌、沙門(mén)菌志賀菌、沙門(mén)菌 項(xiàng)目項(xiàng)目 2015版藥典版藥典 2020版藥典版藥典 供試品檢查中志賀菌、沙門(mén)菌結(jié)果判定及下一步鑒定指導(dǎo) 供試品平皿培養(yǎng)24

13、小時(shí)、48小時(shí)各觀察結(jié)果1次，若未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，判供試品未檢出志賀菌、沙門(mén)菌；若有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)與陽(yáng)性對(duì)照的菌落比較，并做革蘭氏染色鏡檢等適宜的鑒定試驗(yàn)，鑒別是否為制品中的目的菌或志賀菌、沙門(mén)菌。 若有疑似菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為志賀菌、沙門(mén)菌或制品中的目的菌；若平皿上未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為非控制菌，判供試品未檢出志賀菌、沙門(mén)菌 銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌 項(xiàng)目項(xiàng)目 2015版藥典版藥典 2020版藥典版藥典 供試品檢查中銅綠假單胞菌結(jié)果判定及下一步鑒定指導(dǎo) 如平皿上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與陽(yáng)性對(duì)照菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出銅綠假單胞菌；如平皿生

14、長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)挑選2-3個(gè)菌落，分別放在接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)18-24小時(shí)。取斜面培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢及氧化酶試驗(yàn)，鑒別是否為制品中的目的菌或銅綠假單胞菌 供試品平皿上若有疑似菌落生長(zhǎng)，取菌落分離、純化后采用氧化酶試驗(yàn)及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為制品中的目的菌或銅綠假單胞菌 增加： 若平皿上未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為非控制菌，判供試品未檢出銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌 項(xiàng)目項(xiàng)目 2015版藥典版藥典 2020版藥典版藥典 銅綠假單胞菌檢測(cè)中氧化酶試驗(yàn) 斜面培養(yǎng)物 分離純化培養(yǎng)物 應(yīng)進(jìn)行綠膿菌素試驗(yàn) 應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)，確

15、認(rèn)是否為銅綠假單胞菌 刪除：綠膿菌素試驗(yàn) 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌 項(xiàng)目項(xiàng)目 2015版藥典版藥典 2020版藥典版藥典 供試品檢查中金黃色葡萄球菌結(jié)果判定及下一步鑒定指導(dǎo) 供試品平皿上若未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與陽(yáng)性對(duì)照菌落形態(tài)特征不符，判未檢出金黃色葡萄球菌；若平皿上生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)挑選2-3個(gè)菌落，分別放在接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)18-24小時(shí)。取營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色，并接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18-24小時(shí)，做血漿凝固酶試驗(yàn)。 供試品平皿上若有疑似菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為金黃色葡萄球菌或制品中的目的

16、菌；若平皿上未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為非控制菌，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌 刪除：血漿凝固酶試驗(yàn) 控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查 變更: 項(xiàng)目項(xiàng)目 2015版藥典版藥典 2020版藥典版藥典 細(xì)菌增菌培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 真菌增菌培養(yǎng)基 改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 白色念珠菌涉及檢驗(yàn)培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 試驗(yàn)菌用量 0.1ml 100l 固體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查 每種培養(yǎng)基平行制備2個(gè)平皿 每種培養(yǎng)基每一試驗(yàn)菌株平行制備2個(gè)平皿 非致病

17、性雜菌、真菌計(jì)數(shù)非致病性雜菌、真菌計(jì)數(shù) 陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照 除另有規(guī)定外，真菌以白色念珠菌為對(duì)照菌，其他以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌 變更為：當(dāng)采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅納瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行檢查時(shí)，真菌計(jì)數(shù)以白色念珠菌為對(duì)照菌，非致病雜菌計(jì)數(shù)以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌 因供試品為活菌制品，應(yīng)選用能抑制目的菌生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行檢查。除另有規(guī)定外，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于非致病性雜菌的計(jì)數(shù)，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于真菌計(jì)數(shù)。 排除目的菌干擾的 也可采用其它經(jīng)驗(yàn)證的培養(yǎng)基 真菌計(jì)數(shù)真菌計(jì)數(shù) 稱(chēng)取供試品1g，加到9ml 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液或其他適宜稀釋液中，混勻，做10倍系列稀釋?zhuān)∵m宜稀釋度供試品溶液0.1ml

18、加到已備好的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上，以玻棒涂勻，一式3份，倒置，于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96小時(shí)，每天觀察結(jié)果，記錄平皿上生長(zhǎng)的真菌菌落數(shù). 結(jié)果計(jì)算：以3個(gè)平皿上生長(zhǎng)的菌落平均數(shù)計(jì)算。真菌數(shù)（真菌數(shù)（CFU/g）=3個(gè)平皿菌落數(shù)之和個(gè)平皿菌落數(shù)之和/3*10*稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查 變更: 項(xiàng)目項(xiàng)目 2015版藥典版藥典 2020版藥典版藥典 細(xì)菌增菌培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 真菌增菌培養(yǎng)基 改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 細(xì)菌培養(yǎng)溫度 30-37 30-35 真菌培養(yǎng)溫度 2

19、0-28 20-25 試驗(yàn)菌用量 0.1ml 100l 結(jié)果判定 被檢培養(yǎng)基的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基的菌落平均數(shù)相比大于70% 被檢培養(yǎng)基的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍 增加：營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基（BL）、曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB）、沙門(mén)、志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基（SS） 三、三、9204 微生物鑒定指導(dǎo)原則微生物鑒定指導(dǎo)原則（變更）（變更） 本指導(dǎo)原則為非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度控制菌檢查中疑似菌的鑒定，以及藥物原料、輔料、制藥用水、中間體中間產(chǎn)品、終產(chǎn)品和環(huán)境等中檢出微生物的鑒定提供指導(dǎo)。當(dāng)微生物的鑒定結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí)，以伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)現(xiàn)行

20、版的鑒定結(jié)果為準(zhǔn)。 微生物鑒定需達(dá)到的水平視情況而定，包括種、屬鑒定和菌株分型。大多數(shù)非無(wú)菌藥品生產(chǎn)過(guò)程和部分無(wú)菌生產(chǎn)環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中，對(duì)所檢出微生物的常規(guī)特征包括菌落形態(tài)學(xué)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)（桿狀、球狀、細(xì)胞群、孢子形成模式等）、革蘭染色或其它染色法、及某些能夠給出鑒定結(jié)論的關(guān)鍵生化反應(yīng)（如氧化酶、過(guò)氧化氫酶和凝固酶反應(yīng)）進(jìn)行分析，一般即可滿足需要；非無(wú)菌產(chǎn)品的控制菌檢查一般應(yīng)達(dá)到種屬藥典規(guī)定的水平；無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性和、無(wú)菌生產(chǎn)模擬工藝（如培養(yǎng)基灌裝）失敗、環(huán)境嚴(yán)重異常事件時(shí)，對(duì)檢出的微生物鑒定至少達(dá)到種屬水平，必要時(shí)需達(dá)到菌株水平 微生物鑒定的基本程序包括分離純化和鑒定，鑒定時(shí)，一般先將待檢菌進(jìn)

21、行初步的分類(lèi)。鑒定的方法有表型微生物鑒定和基因型微生物鑒定，根據(jù)所需達(dá)到的鑒定水平選擇鑒定方法。 未知菌鑒定時(shí)通過(guò)與微生物鑒定系統(tǒng)中的標(biāo)準(zhǔn)參考微生物（模式菌株、標(biāo)準(zhǔn)菌株或經(jīng)確認(rèn)的菌株等）的特征（基因型和/或表型）相匹配來(lái)完成 在日常的微生物鑒定試驗(yàn)中，用戶應(yīng)明確所采用鑒定系統(tǒng)的局限性及所要達(dá)到的鑒定水平（屬、種、菌株），選用最適合要求的鑒定技術(shù)，必要時(shí)采用多種鑒定方法確定。 待檢菌的分離純化待檢菌的分離純化 最常用的分離純化方法是挑取待檢菌在適宜的固體培養(yǎng)基上連續(xù)劃線分離純化，以獲取待檢菌的純培養(yǎng)物（單個(gè)菌落）,必要時(shí)可進(jìn)一步進(jìn)行純培養(yǎng)，為表型鑒定和隨后的鑒定程序提供足夠量菌體。 初篩試驗(yàn)初篩

22、試驗(yàn) 常見(jiàn)的初篩試驗(yàn)包括形態(tài)觀察、革蘭染色、芽孢染色、鏡檢（或氫氧化鉀拉絲試驗(yàn)）、觀察染色結(jié)果和細(xì)胞形態(tài)、重要的生化反應(yīng)等。 氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn) 用于區(qū)分不發(fā)酵的革蘭陰性桿菌（氧化酶陽(yáng)性）和腸道菌（氧化酶陰性）。 過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 用于區(qū)分葡萄球菌（過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性）和鏈球菌（過(guò)氧化氫酶陰性）。 凝固酶試驗(yàn)?zāi)堂冈囼?yàn) 用于區(qū)分凝固酶陰性葡萄球菌（可推測(cè)為非致病性）和凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌（很可能為致病性）。 表型微生物鑒定表型微生物鑒定 表型微生物鑒定表型微生物鑒定 除受其遺傳基因的控制外，還與微生物的分離環(huán)境、培養(yǎng)基和生長(zhǎng)條件等因素有關(guān) 在表型鑒定時(shí)應(yīng)注意采用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間和傳代

23、次數(shù)對(duì)鑒定結(jié)果的影響 四、四、3605 細(xì)菌生化反應(yīng)培養(yǎng)基細(xì)菌生化反應(yīng)培養(yǎng)基 測(cè)定細(xì)菌的糖類(lèi)代謝試驗(yàn)、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)、碳源和氮源利用試驗(yàn)等生化反應(yīng) 糖、醇發(fā)酵培養(yǎng)基 七葉苷培養(yǎng)基 磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基（MR-VP反應(yīng)） 蛋白胨水培養(yǎng)基（靛基質(zhì)試驗(yàn)） 三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基 克氏雙糖鐵瓊脂培養(yǎng)基 脲（尿素）培養(yǎng)基 苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基 明膠培養(yǎng)基 丙二酸鈉培養(yǎng)基 枸櫞酸鹽培養(yǎng)基 硝酸鹽胨水培養(yǎng)基 石蕊牛奶培養(yǎng)基 半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 五、細(xì)菌五、細(xì)菌 DNA 特征序列鑒定法（新增）特征序列鑒定法（新增） 細(xì)菌 DNA 特征序列鑒定法系以特征核酸序列作為目標(biāo)檢測(cè)物，用于藥

24、用原料、輔料、制藥用水、中間產(chǎn)品、終產(chǎn)品、包裝材料和環(huán)境等藥品全生命周期質(zhì)量控制中細(xì)菌的鑒定。 開(kāi)展細(xì)菌鑒定試驗(yàn)的環(huán)境應(yīng)具備分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基本條件，并符合相應(yīng)級(jí)別的生物安全要求。 六、六、1101 無(wú)菌檢查法（變更）無(wú)菌檢查法（變更） 培養(yǎng)基的變更： 制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在 225、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在 3 周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。 在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/53，否則，須經(jīng)100水浴加熱至粉紅色消失（不超過(guò) 20 分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。 培養(yǎng)基的適用性檢查培養(yǎng)基的適用性檢查 無(wú)菌性檢查無(wú)

25、菌性檢查 每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于 5 支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng) 14 天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。 靈敏度檢查靈敏度檢查 菌液制備： 金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng) 1824 小時(shí)； 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，2025培養(yǎng) 23 天 2448 小時(shí)， 接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，2025培養(yǎng) 57 天，加入 35ml 含 0.05（ml/ml）聚山梨酯 80 的 pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋

26、白胨緩沖液或 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。 培養(yǎng)接種培養(yǎng)接種 取每管裝量為 12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 7 支，分別接種小于不大于 100cfu 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各 2 支，另 1 支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)不超過(guò) 3 天； 取每管裝量為 9ml 的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 7 支,分別接種小于不大于 100cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各 2 支，另 1 支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)不超過(guò) 5 天。逐日觀察結(jié)果。 結(jié)果判定結(jié)果判定 空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定 薄膜過(guò)濾法薄膜過(guò)濾法 薄膜過(guò)濾法一般

27、應(yīng)采用封閉式薄膜過(guò)濾器，根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。無(wú)菌檢查用的濾膜孔徑應(yīng)不大于 0.45m。濾膜直徑約為 50mm，若使用其他尺寸的濾膜，應(yīng)對(duì)稀釋液和沖洗液體積進(jìn)行調(diào)整,并重新驗(yàn)證。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。 水溶性液體供試品水溶性液體供試品 水溶性供試液過(guò)濾前應(yīng)先將少量的沖洗液過(guò)濾，以潤(rùn)濕濾膜。 取規(guī)定量，直接過(guò)濾，或混合至含不少于 100ml 適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，混勻，立即過(guò)濾。 七、七、9202 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查指非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查指導(dǎo)原則導(dǎo)原則 為更好應(yīng)用非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法（通則1105）、非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢

28、查法（通則1106）及非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（通則1107），特制定本指導(dǎo)原則 供試液制備方法、抑菌成分的消除方法及需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法應(yīng)盡量選擇微生物計(jì)數(shù)方法中操作簡(jiǎn)便、快速的方法，同時(shí)，所選用的方法應(yīng)避免損傷供試品中污染的微生物。 對(duì)照培養(yǎng)基由中國(guó)食品藥品檢定研究院研制及分發(fā)。 控制菌檢查法沒(méi)有規(guī)定進(jìn)一步確證疑似致病菌的方法。若供試品檢出疑似致病菌，確證的方法應(yīng)選擇已被認(rèn)可的菌種鑒定方法，如細(xì)菌鑒定一般依據(jù)伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)。 藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中，藥用原料、輔料及中藥提取物僅規(guī)定檢查需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)。因此，在制定其微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)根據(jù)原輔料的微生物污染

29、特性、用途、相應(yīng)制劑的生產(chǎn)工藝及特性等因素，還需控制具有潛在危害的致病菌。 八、八、1105 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 微生物計(jì)數(shù)法微生物計(jì)數(shù)法 微生物計(jì)數(shù)法系用于能在有氧條件有氧條件下生長(zhǎng)的嗜溫細(xì)菌和真菌的計(jì)數(shù)。 當(dāng)本法用于檢查非無(wú)菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限非無(wú)菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)按下述規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，包括樣品的取樣量和結(jié)果的判斷等。除另有規(guī)定外，本法不適用于活菌制劑的檢查。 微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單

30、向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)。 如供試品有抗菌活性，應(yīng)盡可能去除或中和。供試品檢查時(shí)，若使用了中和劑或滅活劑，應(yīng)確認(rèn)其有效性及對(duì)微生物無(wú)毒性。 供試液制備時(shí)如果使用了表面活性劑，應(yīng)確認(rèn)其對(duì)微生物無(wú)毒性以及與所使用中和劑或滅活劑的相容性。 計(jì)數(shù)方法計(jì)數(shù)方法 計(jì)數(shù)方法包括平皿法、薄膜過(guò)濾法和最可能數(shù)法（Most-Probable-Number Method，簡(jiǎn)稱(chēng)MPN法。MPN法用于微生物計(jì)數(shù)時(shí)精確度較差，但對(duì)于某些微生物污染量很小的供試品，MPN法可能是更適合的方法。 供試品微生物計(jì)數(shù)中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行適用性檢查。 供試品微生物計(jì)數(shù)方法應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適

31、合于該產(chǎn)品的微生物計(jì)數(shù)。 若檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新進(jìn)行適用性試驗(yàn)。 供試品檢查供試品檢查 檢驗(yàn)量： 一般應(yīng)隨機(jī)抽取不少于2個(gè)最小包裝的供試品，混合，取規(guī)定量供試品進(jìn)行檢驗(yàn)。 一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml；膜劑為100cm2 按計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品中需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測(cè)定。 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測(cè)定需氧菌總數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測(cè)定霉菌和酵母菌總數(shù)。 陰性對(duì)照試驗(yàn) 以稀釋液代替供試液進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。如果陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。 結(jié)果判斷結(jié)果判斷 需氧菌總

32、數(shù)需氧菌總數(shù)是指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)（包括真菌菌落數(shù)）； 霉菌和酵母菌總數(shù)霉菌和酵母菌總數(shù)是指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)（包括細(xì)菌菌落數(shù)）。 若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌使霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)結(jié)果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、慶大霉素）的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基（如玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)測(cè)定。 九、九、1106 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 控制菌檢查法控制菌檢查法 控制菌檢查法系用于在規(guī)定的試驗(yàn)條件下，檢查檢查供試品中是否存在特定的微生物供試品中是否存在特定的微生物。 當(dāng)本法用于檢查非無(wú)

33、菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)按下列規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，包括樣品取樣量和結(jié)果判斷等。 供試品檢出控制菌或其他致病菌時(shí)，按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不再?gòu)?fù)試。 供試品檢查供試品檢查 供試品的控制菌檢查應(yīng)按經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行。 陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn) 陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)方法同供試品的控制菌檢查，對(duì)照菌的加量應(yīng)不大于100cfu。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。 陰性對(duì)照試驗(yàn)陰性對(duì)照試驗(yàn) 以稀釋劑代替供試液照相應(yīng)控制菌檢查法檢查，陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。如果陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)査。 檢驗(yàn)項(xiàng)目檢驗(yàn)項(xiàng)目 耐膽鹽革蘭陰性菌（Bile-Tblerant Gram-Negative

34、 Bacteria） 大腸埃希菌（Escherichia coli） 沙門(mén)菌（Salmonella） 銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 梭菌（Clostridia） 白色念珠菌（Candida albicans） 十、十、1107 非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn) 十一、1421 滅菌法 滅菌法系指用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去，從而使物品殘存活微生物的概率下降至預(yù)期的無(wú)菌保證水平的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的滅菌。 對(duì)于任何一批滅菌物品而言，絕對(duì)

35、無(wú)菌既無(wú)法保證也無(wú)法用試驗(yàn)來(lái)證實(shí)。一批物品的無(wú)菌特性只能相對(duì)地通過(guò)物品中活微生物的概率低至某個(gè)可接受的水平來(lái)表述，即無(wú)菌無(wú)菌保證水平保證水平（sterility assurance level，簡(jiǎn)稱(chēng) SAL）。實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，滅菌是指將物品中污染微生物的概率下降至預(yù)期的無(wú)菌保證水平。最終滅菌的物品微生物存活概率，即無(wú)菌保證水平不得高于10-6。 滅菌物品的無(wú)菌保證不能依賴于最終產(chǎn)品的無(wú)菌檢驗(yàn)，而是取決于生產(chǎn)過(guò)程中采用合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的無(wú)菌保證體系 濕熱滅菌法濕熱滅菌法 該法滅菌能力強(qiáng)，為熱力滅菌中最有效、應(yīng)用最廣泛的滅菌方法。 濕熱滅菌條件的選擇應(yīng)考慮被滅菌物品的熱穩(wěn)定性

36、、熱穿透力、微生物污染程度等因素。濕熱滅菌條件通常采用12115min、12130min或11640min的程序，也可采用其他溫度和時(shí)間參數(shù)，但無(wú)論采用何種滅菌溫度和時(shí)間參數(shù)，都必須證明所采用的滅菌工藝和監(jiān)控措施在日常運(yùn)行過(guò)程中能確保物品滅菌后的SAL10-6。 對(duì)熱穩(wěn)定的物品，滅菌工藝可首選過(guò)度殺滅法，以保證被滅菌物品獲得足夠的無(wú)菌保證值。 采用濕熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)难b載方式，不能排列過(guò)密，以保證滅菌的有效性和均一性。 濕熱滅菌法應(yīng)確認(rèn)滅菌柜在不同裝載時(shí)可能存在的冷點(diǎn)。當(dāng)用生物指示劑進(jìn)一步確認(rèn)滅菌效果時(shí)，應(yīng)將其置于冷點(diǎn)處。本法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子 濕熱滅菌法濕熱滅

37、菌法 干熱滅菌法干熱滅菌法 干熱滅菌條件一般為（160170）120min以上、（170180）60min以上或25045min以上，也可采用其他溫度和時(shí)間參數(shù)。無(wú)論采用何種滅菌條件，均應(yīng)保證滅菌后的物品的SAL10-6。采用干熱過(guò)度殺滅后的物品一般無(wú)需進(jìn)行滅菌前污染微生物的測(cè)定。25045min的干熱滅菌也可除去無(wú)菌產(chǎn)品包裝容器及有關(guān)生產(chǎn)灌裝用具中的熱原物質(zhì)。 常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子 十二、滅菌用生物指示劑指導(dǎo)原則（新增）十二、滅菌用生物指示劑指導(dǎo)原則（新增） 生物指示劑是一種對(duì)特定滅菌程序有確定及穩(wěn)定的耐受性的特殊微生物制成品，可用于滅菌設(shè)備的性能確認(rèn)、特定物品的滅菌工藝研發(fā)及

38、建立、產(chǎn)品滅菌程序的驗(yàn)證、生產(chǎn)過(guò)程滅菌效果的監(jiān)控、滅菌程序的定期再驗(yàn)證、隔離器和無(wú)菌潔凈室滅菌效果的驗(yàn)證評(píng)估等。 生物指示劑的分類(lèi)生物指示劑的分類(lèi) 生物指示劑用微生物的基本要求生物指示劑用微生物的基本要求 不同滅菌工藝使用不同的生物指示劑，制備生物指示劑所選用的微生物應(yīng)具備以下特征： （1） 菌種的耐受性應(yīng)大于需滅菌物品中所有可能污染菌的耐受性。 （2） 菌種應(yīng)無(wú)致病性。 （3） 菌株應(yīng)穩(wěn)定，存活期長(zhǎng)，易于保存。 （4） 易于培養(yǎng)。生物指示劑的芽胞含量要在 90%以上 生物指示劑的制備生物指示劑的制備 生物指示劑的應(yīng)用生物指示劑的應(yīng)用 生物指示劑的性能評(píng)估 接收商品化生物指示劑時(shí)，應(yīng)進(jìn)行微生物

39、純度和形態(tài)的鑒定及測(cè)定微生物數(shù)量。生物指示劑應(yīng)在有效期內(nèi)使用，必要時(shí)應(yīng)重新進(jìn)行耐受性檢查。 芽胞數(shù)范圍在 1.0 106至 5.0 106。 芽胞數(shù)范圍在 1.0 106至 5.0 107。 芽胞數(shù)范圍在 1.0 105至 5.0 106 用戶應(yīng)科學(xué)的選擇和使用生物指示劑.在滅菌程序的建立、確定、驗(yàn)證和日常監(jiān)控中,需對(duì)滅菌產(chǎn)品（包括其材料和包裝）進(jìn)行全面了解,確保滅菌參數(shù)能達(dá)到所需的 SAL 水平。生物指示劑的初始微生物的數(shù)量、耐受性（菌體耐受性）和放置的位置、方式等情況都會(huì)影響其滅活效果。需通過(guò)實(shí)驗(yàn)室研究確定產(chǎn)品各組成部分是否比產(chǎn)品內(nèi)的溶液或藥品更難滅菌。根據(jù)產(chǎn)品中最難滅菌的部位，制定不同的

40、工藝參數(shù)以確保無(wú)菌保證水平小于 106。 十三、生物指示劑耐受性檢查法指導(dǎo)原則（十三、生物指示劑耐受性檢查法指導(dǎo)原則（新增）新增） 本指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)生物指示劑的耐受性以及相關(guān)質(zhì)量參數(shù)的測(cè)定，也可用于生產(chǎn)過(guò)程污染微生物的耐受性測(cè)定。 總芽胞計(jì)數(shù): 培養(yǎng)基：胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（芽孢懸液制備）、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（芽孢計(jì)數(shù)） 熱激活 培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 生物指示劑的總芽胞數(shù)一般為標(biāo)示值的 50%300%。 十四、十四、9203 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則原則 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制 藥品微生物的檢驗(yàn)結(jié)果受很多因素的影響，

41、如樣品中微生物可能分布不均勻、微生物檢驗(yàn)方法的誤差較大等。因此，在藥品微生物檢驗(yàn)中，為保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性，必須使用經(jīng)驗(yàn)證的檢測(cè)方法并嚴(yán)格按照藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則要求進(jìn)行檢驗(yàn)。 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則包括以下幾個(gè)方面：人員、培養(yǎng)基、試劑、菌種、環(huán)境、設(shè)備、樣品、檢驗(yàn)方法、污染廢棄物處理、檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證和檢測(cè)過(guò)程質(zhì)量控制、實(shí)驗(yàn)記錄、結(jié)果的判斷和檢測(cè)報(bào)告、文件等。 1、人員、人員 從事藥品微生物試驗(yàn)工作的人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專(zhuān)業(yè)知識(shí)的教育背景 2、培養(yǎng)基、培養(yǎng)基 微生物實(shí)驗(yàn)室使用的培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。 結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培

42、養(yǎng)基不得使用。 脫水培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中，再行分裝與滅菌。 應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值（冷卻至室溫25測(cè)定）。若培養(yǎng)基處方中未列出pH值的范圍，除非經(jīng)驗(yàn)證表明培養(yǎng)基的pH值允許的變化范圍很寬，否則，pH值的范圍不能超過(guò)規(guī)定值0.2。 自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱(chēng)、批號(hào)、配制日期、制備人等信息，并在已驗(yàn)證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱(chēng)、批號(hào)、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性。 培養(yǎng)基滅菌后不得貯藏在高壓滅菌器中，瓊脂培養(yǎng)基不得在0或0以下存放。 2、培養(yǎng)基、培養(yǎng)基 使用過(guò)的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國(guó)家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行 實(shí)驗(yàn)室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于

43、其制備過(guò)程，常規(guī)監(jiān)控項(xiàng)目是pH值、適用性檢查試驗(yàn)，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期 除藥典附錄另有規(guī)定外，在實(shí)驗(yàn)室中，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過(guò)程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行1次。如果培養(yǎng)基的制備過(guò)程未經(jīng)驗(yàn)證，那么每一滅菌批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)。 用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。 3、試劑、試劑 微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有試劑接收、檢查和貯藏的程序。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)標(biāo)明所有試劑、試液及溶液的名稱(chēng)、制備依據(jù)、適用性、濃度、效價(jià)、貯藏

44、條件、制備日期、有效期及制備人。 4、菌種、菌種 藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來(lái)自認(rèn)可的國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株 5、環(huán)境、環(huán)境 微生物限度檢查應(yīng)在不低于D級(jí)背景下的B級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行 環(huán)境監(jiān)測(cè)按藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則（通則9205）進(jìn)行 所用的消毒劑種類(lèi)應(yīng)滿足潔凈實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求并定期更換。 6、設(shè)備、設(shè)備 儀器設(shè)備應(yīng)有合格證書(shū)，實(shí)驗(yàn)室在儀器設(shè)備完成相應(yīng)的檢定、校準(zhǔn)、驗(yàn)證、確認(rèn)其性能，并形成相應(yīng)的操作、維護(hù)和保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程后方可正式使用，儀器設(shè)備使用和日常監(jiān)控要有記錄。 7、樣品、樣品 試驗(yàn)樣品的采集，應(yīng)

45、遵循隨機(jī)抽樣的原則，并在受控條件下進(jìn)行抽樣，須采用無(wú)菌操作技術(shù)進(jìn)行取樣，防止樣品受到微生物污染而導(dǎo)致假陽(yáng)性的結(jié)果 抽樣容器應(yīng)貼有唯一性的標(biāo)識(shí)，注明樣品名稱(chēng)、批號(hào)、抽樣日期、采樣容器、抽樣人等 如果樣品存在數(shù)量不足、包裝破損、標(biāo)簽缺失、溫度不適等，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在決定是否檢測(cè)或拒絕接受樣品之前與相關(guān)人員溝通。 8、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)方法 藥典方法或標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的，當(dāng)進(jìn)行樣品檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法適用性確認(rèn)。 如果檢驗(yàn)方法不是藥典或標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法，使用前應(yīng)進(jìn)行替代方法的驗(yàn)證，確認(rèn)其應(yīng)用效果優(yōu)于或等同于藥典方法。替代方法的驗(yàn)證按藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則（通則9201）進(jìn)行。 9、結(jié)果的判

46、斷和檢測(cè)報(bào)告、結(jié)果的判斷和檢測(cè)報(bào)告 引起微生物污染結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)的原因主要有兩個(gè)：試驗(yàn)操作錯(cuò)誤或產(chǎn)生無(wú)效結(jié)果的試驗(yàn)環(huán)境條件；產(chǎn)品本身的微生物污染總數(shù)超過(guò)規(guī)定的限度或檢出控制菌。 異常結(jié)果出現(xiàn)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。偏差調(diào)查時(shí)應(yīng)考慮實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、抽樣區(qū)的防護(hù)條件、樣品在該檢驗(yàn)條件下以往檢驗(yàn)的情況、樣品本身具有使微生物存活或繁殖的特性等情況。 如果試驗(yàn)操作被確認(rèn)是引起實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符合的原因，那么應(yīng)制定糾正和預(yù)防措施，按照正確的操作方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 十五、十五、9205 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則（變更）和控制指導(dǎo)原則（變更） 本指導(dǎo)原則是用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗(yàn)用的潔凈室等受

47、控環(huán)境微生物污染情況的監(jiān)測(cè)和控制。 本指導(dǎo)原則包括人員要求、初次使用的潔凈實(shí)驗(yàn)室參數(shù)確認(rèn)、微生物監(jiān)測(cè)方法、監(jiān)測(cè)頻次及監(jiān)測(cè)項(xiàng)目、監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)、警戒限和糾偏限、數(shù)據(jù)分析及偏差處理、微生物鑒定和微生物控制。 確認(rèn)確認(rèn) 初次使用的潔凈實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行參數(shù)確認(rèn)，確認(rèn)參數(shù)包括物理參數(shù)、空氣懸浮粒子和微生物。 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室物理參數(shù)的測(cè)試應(yīng)當(dāng)在微生物監(jiān)測(cè)方案實(shí)施之前進(jìn)行。 主要的物理參數(shù)包括高效空氣過(guò)濾器完整性、氣流組織、空氣流速（平均風(fēng)速），換氣次數(shù)、壓差、溫度和相對(duì)濕度等。一般首先在靜態(tài)下測(cè)試，符合要求后再在模擬正常檢測(cè)條件下進(jìn)行測(cè)試 物理參數(shù)測(cè)試方法參照潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中附錄 D3 高效空氣

48、過(guò)濾器現(xiàn)場(chǎng)掃描檢漏方法、附錄 E12 氣流的檢測(cè)、附錄 E1 風(fēng)量和風(fēng)速的檢測(cè)、附錄 E2 靜壓差的檢測(cè)、附錄 E5 溫濕度的檢測(cè)進(jìn)行。 初次使用的潔凈實(shí)驗(yàn)室其空氣懸浮粒子和微生物的確認(rèn)及監(jiān)測(cè)照以下“監(jiān)測(cè)”進(jìn)行。 監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè) 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期進(jìn)行日常監(jiān)測(cè)和定期微生物監(jiān)測(cè)，日常監(jiān)測(cè)一般包括壓差、溫度、相對(duì)濕度等；定期監(jiān)測(cè)應(yīng)在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)上建立潔凈環(huán)境監(jiān)測(cè)計(jì)劃。定期監(jiān)測(cè)內(nèi)容包括物理參數(shù)、非生物活性的空氣懸浮粒子和有生物活性的微生物監(jiān)測(cè)，其中微生物監(jiān)測(cè)包括環(huán)境浮游菌和沉降菌監(jiān)測(cè)，及關(guān)鍵的檢測(cè)臺(tái)面、人員操作服表面及 5 指手套等的微生物檢測(cè)。 當(dāng)微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果或樣品測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生偏離，經(jīng)評(píng)估潔凈區(qū)可

49、能存在被污染的風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行清潔消毒后重新進(jìn)行監(jiān)測(cè) 懸浮粒子監(jiān)測(cè)懸浮粒子監(jiān)測(cè) 增加：懸浮粒子監(jiān)測(cè)方法 除取樣點(diǎn)的選擇和數(shù)量、取樣量和取樣時(shí)間外，藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室懸浮粒子的監(jiān)測(cè)參考醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮粒子的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。 微生物監(jiān)測(cè)微生物監(jiān)測(cè) 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室沉降菌的監(jiān)測(cè)照醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行；浮游菌的監(jiān)測(cè)照醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,浮游菌采樣器可選擇撞擊式采樣器或?yàn)V膜式采樣器等 表面微生物測(cè)定是對(duì)環(huán)境、設(shè)備和人員的表面微生物進(jìn)行監(jiān)測(cè)，方法包括接觸碟法和擦拭法 環(huán)境浮游菌、沉降菌及表面微生物監(jiān)測(cè)用培養(yǎng)基一般采用胰

50、酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA），培養(yǎng)溫度為 3035，時(shí)間為 35 天，必要時(shí)可加入適宜的中和劑，。當(dāng)監(jiān)測(cè)結(jié)果有疑似真菌或考慮季節(jié)因素影響時(shí)，可增加沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)，培養(yǎng)溫度為 2025，時(shí)間為 57 天。如需要，應(yīng)根據(jù)環(huán)境污染微生物種群特性選擇特定的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)時(shí)間。 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)頻次及監(jiān)測(cè)項(xiàng)目藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)頻次及監(jiān)測(cè)項(xiàng)目 注：每月一次。注：每月一次。 工作臺(tái)面沉降菌的日常監(jiān)測(cè)采樣點(diǎn)數(shù)不少于工作臺(tái)面沉降菌的日常監(jiān)測(cè)采樣點(diǎn)數(shù)不少于 3 個(gè)，且個(gè)，且每個(gè)采樣點(diǎn)的平皿數(shù)應(yīng)不小于每個(gè)采樣點(diǎn)的平皿數(shù)應(yīng)不小于 1 個(gè)。個(gè)。 每季度一次。每季度一次。 每半年一次每半年一次。 各

51、潔凈級(jí)別環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn) 警戒限和糾偏限警戒限和糾偏限 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)歷史數(shù)據(jù)，結(jié)合不同潔凈區(qū)域的標(biāo)準(zhǔn)，采用適宜的方法，制定適當(dāng)?shù)奈⑸锉O(jiān)測(cè)警戒限和糾偏限。 微生物鑒定微生物鑒定 微生物鑒定參照微生物鑒定指導(dǎo)原則（通則 9204）進(jìn)行 微生物控制微生物控制 為了保證藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室環(huán)境維持適當(dāng)?shù)乃剑瑧?yīng)保持空調(diào)系統(tǒng)的良好運(yùn)行狀態(tài)，對(duì)設(shè)施進(jìn)行良好維護(hù)，潔凈室內(nèi)人員應(yīng)嚴(yán)格遵守良好的行為規(guī)范，并定期進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)。 微生物控制措施還包括良好的清潔和衛(wèi)生處理，應(yīng)定期對(duì)藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒，應(yīng)監(jiān)測(cè)消毒劑和清潔劑的微生物污染狀況，并在規(guī)定的有效期內(nèi)使用，A/B 級(jí)潔凈區(qū)應(yīng)使用無(wú)菌的或經(jīng)無(wú)菌處理的消毒劑和清潔劑。所采用的化學(xué)消毒劑應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證或有證據(jù)表明其消毒效果，其種類(lèi)應(yīng)當(dāng)多于一種，并定期進(jìn)行更換以防止產(chǎn)生耐受菌株。不得用紫外線消毒代替化學(xué)消毒。必要時(shí)，可采用氣體、熏蒸等適宜的方法降低潔凈區(qū)的衛(wèi)生死角的微生物污染，并對(duì)熏蒸劑消毒劑的殘留水平進(jìn)行驗(yàn)證 謝 謝！ 溫馨提示： 本PPT課件下載后，即可編輯修改， 也可直接使用。 （希望本課件對(duì)您有所幫助）