（浙江專版）2017-2018學(xué)年高中生物 第一章 實(shí)驗(yàn)二 分離以尿素為氮源的微生物教學(xué)案 浙科版選修1

實(shí)驗(yàn)二 分離以尿素為氮源的微生物1.有一些細(xì)菌含有脲酶，它們可以通過(guò)降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。利用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基即可分離出此類微生物。2在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。3以尿素為氮源的微生物能分解尿素產(chǎn)生氨，氨為堿性，酚紅指示劑在堿性下為紅色，紅色區(qū)域大小代表脲酶活性強(qiáng)弱和含量的多少。1尿素又稱脲，是蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物。在人和其他哺乳動(dòng)物如家畜的尿中都含有尿素，大量尿素的存在會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染。2以尿素為氮源的微生物的特點(diǎn)含有脲酶，通過(guò)降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。其利用尿素的反應(yīng)式為：(NH2)2COH2O脲酶,2NH3CO2。3分離以尿素為氮源的微生物(1)實(shí)驗(yàn)原理：在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上生存的微生物能以尿素為氮源。細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚紅指示劑變紅。(2)培養(yǎng)基的對(duì)照：制備LB全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基和尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)土壤中的微生物，并對(duì)菌落觀察并計(jì)數(shù)。(3)實(shí)驗(yàn)步驟：1分離以尿素為氮源的微生物所采用的分離方法是()A涂布分離法B劃線分離法C稀釋分離法 D選擇分離法解析：選A微生物的分離方法多種多樣，本實(shí)驗(yàn)使用了涂布分離法。2用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實(shí)際值相比()A比實(shí)際值高 B比實(shí)際值低C和實(shí)際值一致 D比實(shí)際值可能高也可能低解析：選B培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落也可能由相連的兩個(gè)或多個(gè)菌體繁殖而來(lái)，并且該方法測(cè)得的是活菌的菌落數(shù)目，未包括死菌數(shù)，因此統(tǒng)計(jì)的活菌數(shù)要少于菌體實(shí)際值。3下列有關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是()A在尿素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)含有脲酶的微生物會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基呈酸性B地表土壤中含有一定量的脲C以尿素為氮源的細(xì)菌含有脲酶D脲是一種有機(jī)化合物，含有氮元素解析：選A根據(jù)反應(yīng)式：(NH2)2COH2O2NH3CO2，在尿素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)含有脲酶的微生物會(huì)產(chǎn)生NH3，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基呈堿性。4用以尿素為唯一氮源加入酚紅指示劑的培養(yǎng)基，培養(yǎng)尿素分解菌后，指示劑將()A變藍(lán)色 B變紅色C變黑色 D變棕色解析：選B尿素分解菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，加入酚紅指示劑將變紅色。5在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，生成物中除CO2外還有()AN2 BNOCNO DNH3解析：選D以尿素為氮源的微生物中含有脲酶，它能降解尿素并產(chǎn)生NH3，為其生長(zhǎng)提供氮源，其反應(yīng)如下：(NH2)2C=OH2O2NH3CO2。1篩選菌株的原理(1)原理：根據(jù)不同微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性不同而制備培養(yǎng)基。(2)方法：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分。例如，缺乏氮源時(shí)可以分離固氮微生物；石油作為唯一碳源時(shí)，可以分離出能消除石油污染的微生物；用含無(wú)機(jī)碳源的培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物。改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物；用普通培養(yǎng)基在無(wú)氧條件下分離厭氧型和兼性厭氧型微生物。特別提醒能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的不一定是目的菌原則上選擇培養(yǎng)基只能允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，但實(shí)際上，微生物的培養(yǎng)是一個(gè)非常復(fù)雜的問(wèn)題，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)繁殖，因此能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物不一定都是所需的微生物，還需進(jìn)一步的鑒定。2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，但是一般使用計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)法可分為直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。二者的比較如下表所示：項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法原理利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板培養(yǎng)基計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)菌體本身培養(yǎng)基上菌落數(shù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的是活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較復(fù)雜，有一定誤差題組沖關(guān)1下列有關(guān)尿素培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是()A根據(jù)物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基B培養(yǎng)基中的唯一氮源為尿素，用以篩選以尿素為氮源的微生物C培養(yǎng)基中的酚紅，用以鑒別以尿素為氮源的微生物D培養(yǎng)基中加入G6玻璃漏斗過(guò)濾的尿素后，要用500 g/cm2壓力(90以上)滅菌30 min解析：選D因?yàn)槟蛩丶訜釙?huì)分解，所以應(yīng)先將培養(yǎng)基經(jīng)500 g/cm2壓力滅菌30 min(為防止葡萄糖分解碳化)，再添加經(jīng)過(guò)G6玻璃漏斗過(guò)濾后的尿素。2下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，錯(cuò)誤的是()A利用涂布分離法既能分離微生物也能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)B接種時(shí)連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步分散獲得單個(gè)菌落C以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌D選擇培養(yǎng)基作用的原理都是顯現(xiàn)某微生物的特征，以區(qū)別于其他微生物解析：選D涂布分離法能分離純化微生物也能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)；連續(xù)劃線是將聚集的菌種逐步分散，以獲得單個(gè)菌落；尿素分解菌的分離和鑒別可以選用以尿素為唯一氮源，且含酚紅的培養(yǎng)基；選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某一化學(xué)物質(zhì)或改變某一理化性質(zhì)，使某一微生物正常生長(zhǎng)，而其他微生物則被殺滅或生長(zhǎng)受到抑制，從而選出所需要的微生物。3土壤中有些微生物能利用尿素是因?yàn)?)A其體內(nèi)含有脲酶B其體內(nèi)含有氨(NH3)酶C它能將CO2合成為有機(jī)物D它們不需要氮源解析：選A能利用尿素的微生物就是因?yàn)轶w內(nèi)含有脲酶，可降解尿素為其生長(zhǎng)繁殖提供氮源。1樣品稀釋的問(wèn)題(1)稀釋原因：樣品的稀釋程度直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。因此，恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。(2)稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，保證獲得菌落數(shù)在30300之間，便于計(jì)數(shù)。2與涂布平板有關(guān)的問(wèn)題(1)防止培養(yǎng)基外濺：在倒平板的過(guò)程中，不能將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。(2)涂布器的滅菌：玻璃刮刀用70%酒精消毒，取出時(shí)，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的玻璃刮刀在酒精燈火焰上引燃。(3)設(shè)置對(duì)照：可排除實(shí)驗(yàn)中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。題組沖關(guān)4(2012·浙江高考)幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：配制培養(yǎng)基滅菌、倒平板X培養(yǎng)觀察請(qǐng)回答：(1)在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有_，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會(huì)出現(xiàn)_色環(huán)帶。(2)下列對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是_滅菌。A高壓蒸汽B紫外燈照射C70%酒精浸泡 D過(guò)濾(3)步驟X表示_。在無(wú)菌條件下操作時(shí)，先將菌液稀釋，然后將菌液_到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得_菌落。(4)在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置并放在_中。若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致_。(5)臨床上用14C呼氣實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標(biāo)記的_分解為NH3和14CO2。解析：(1)幽門螺桿菌中含有脲酶，能將尿素分解成為NH3和CO2，故尿素為氮源。NH3為堿性，能使酚紅呈紅色，故菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。(2)尿素在高溫下分解，故不能用高溫滅菌法，只能采取過(guò)濾的方法。(3)由細(xì)菌和真菌培養(yǎng)操作步驟可知，X為接種。接種時(shí)，應(yīng)將菌種均勻涂布在培養(yǎng)基上。為了獲得單菌落，接種前應(yīng)該稀釋菌液。(4)為了形成單菌落還應(yīng)該將培養(yǎng)皿倒置在恒溫箱中。(5)用14C標(biāo)記尿素，分解后標(biāo)記物全部在CO2中。答案：(1)脲酶紅(2)D(3)接種涂布單(4)恒溫培養(yǎng)箱無(wú)法形成單菌落(5)尿素隨堂基礎(chǔ)鞏固1篩選、鑒別尿素分解菌的培養(yǎng)基氮源為()A蛋白胨B尿素C酚紅 D硝酸鹽解析：選B分離尿素分解菌的培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源。2要從多種細(xì)菌中分離某種細(xì)菌，培養(yǎng)基要用()A加入青霉素的培養(yǎng)基B固體培養(yǎng)基C液體培養(yǎng)基D加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基解析：選B將聚集的菌種逐步稀釋分散到固體培養(yǎng)基的表面，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的一定形態(tài)的菌落，即分離出某種細(xì)菌。3產(chǎn)生每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是()A一個(gè)細(xì)菌，液體培養(yǎng)基B許多細(xì)菌，液體培養(yǎng)基C一個(gè)細(xì)菌，固體培養(yǎng)基D許多細(xì)菌，固體培養(yǎng)基解析：選C在微生物的培養(yǎng)中產(chǎn)生每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目是一個(gè)細(xì)菌，使用的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。4平板冷凝后，要將平板倒置，其原因是()A接種時(shí)拿起來(lái)方便B防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染C正著放置容易破碎D方便在皿底上標(biāo)記日期等內(nèi)容解析：選B平板倒置主要是防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。5用涂布分離法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中的活菌數(shù)。原因是()A平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌B菌落中的細(xì)菌數(shù)是固定的C此時(shí)的一個(gè)菌落一般來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌D此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)一定與活菌的實(shí)際數(shù)相同解析：選C當(dāng)稀釋倍數(shù)適宜時(shí)，培養(yǎng)基上的一個(gè)菌落一般來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，但也可能由兩個(gè)或兩個(gè)以上活菌生長(zhǎng)而成，因此菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)低。6能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)著色環(huán)帶的原因是()A外泌的脲酶將尿素水解成氨，氨為堿性，使酚紅變?yōu)榧t色B外泌的脲酶呈堿性使酚紅變?yōu)榧t色C外泌的脲酶將酚紅分解成呈紅色的物質(zhì)D酚紅與脲酶反應(yīng)后生成了呈紅色的物質(zhì)解析：選A能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌將脲酶分泌到細(xì)菌外，隨后脲酶將培養(yǎng)基中的尿素水解成氨，氨為堿性，遇酚紅變紅色。7分離以尿素為氮源的微生物的土樣最好取自()A有大量植物生長(zhǎng)的地方B臨水的地方C有哺乳動(dòng)物排泄物的地方D干燥、空曠的地方解析：選C由于人和其他哺乳動(dòng)物如家畜的尿中都含有尿素，因此含有哺乳動(dòng)物排泄物的土壤中就可能存在以尿素為氮源的微生物。課時(shí)跟蹤檢測(cè)1從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌，實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖所示：(1)圖中物質(zhì)A為_，若要統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中以尿素為氮源的細(xì)菌的活菌數(shù)目，宜采用_法接種到尿素培養(yǎng)基上，對(duì)照組配制的培養(yǎng)基為_培養(yǎng)基，若用同濃度的土壤稀釋液接種，實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)皿中菌落數(shù)_(填“大于”“等于”或“小于”)對(duì)照組。在能利用尿素的細(xì)菌菌落周圍，有紅色環(huán)帶出現(xiàn)的原因是_。(2)下列培養(yǎng)基中，能分離出分解尿素的細(xì)菌的是()A葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖、水B葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖、水、尿素CNaCl、瓊脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素D葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物(3)欲將分離得到的以尿素為氮源的細(xì)菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，應(yīng)使用_培養(yǎng)基。答案：(1)無(wú)菌水涂布分離LB全營(yíng)養(yǎng)小于能利用尿素的細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶，將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的氨使指示劑呈紅色(2)B(3)LB液體2苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，為土壤樣品。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入_作為碳源，中不同濃度碳源的培養(yǎng)基_(填“影響”或“不影響”)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測(cè)定中活細(xì)菌數(shù)量，常采用_法。(2)為對(duì)照，微生物在中不生長(zhǎng)，在中生長(zhǎng)，與培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于_；使用_法可以在上獲得單菌落。(3)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如何防止其他微生物的污染？_。解析：根據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求，在培養(yǎng)基中加入或不加某些物質(zhì)以達(dá)到促進(jìn)目的菌生長(zhǎng)，抑制或阻止其他雜菌生長(zhǎng)的目的，然后再用涂布分離法、劃線分離法或其他方法篩選出單個(gè)目的菌落，再接種培養(yǎng)即可獲得純目的菌。在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)中要注意單一變量原則和對(duì)照原則，操作中要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。答案：(1)苯酚影響涂布分離(2)的培養(yǎng)基沒(méi)有加入苯酚作為碳源，的培養(yǎng)基加入了苯酚作為碳源涂布分離法或劃線分離(3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過(guò)程進(jìn)行無(wú)菌操作3圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以_為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加_作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周圍的指示劑將變成_色。(2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過(guò)程采取的接種方法是_，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為_×108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較_。(3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為_，突變基因表達(dá)的蛋白含_個(gè)氨基酸。解析：(1)脲酶能夠催化尿素水解釋放出氨和二氧化碳，因此選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以尿素為唯一氮源。挑取單菌落接種到加有酚紅指示劑的鑒別培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，菌落周圍的氨增加，pH升高，酚紅指示劑將變紅色。(2)該過(guò)程采取的接種方法為涂布分離法。利用涂布分離法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30300的平板，因此平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落平均數(shù)為(156178191)÷3175個(gè)。每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為175÷0.1×1051.75×108個(gè)。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法會(huì)將死細(xì)胞計(jì)算在內(nèi)，而稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法只能計(jì)數(shù)活細(xì)胞(只有活細(xì)胞才能在平板上生長(zhǎng))，故一般血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法所得結(jié)果要比涂布分離法所得結(jié)果大。(3)箭頭處插入70個(gè)核苷酸，箭頭后密碼子的解讀方式為*AG，UGA，GAA對(duì)比3種終止密碼可發(fā)現(xiàn)，此處的終止密碼為UGA。從起始密碼到終止密碼之前共有27372個(gè)堿基，因此突變基因表達(dá)的蛋白含115個(gè)氨基酸。答案：(1)尿素酚紅紅(2)涂布分離法1.75少(3)UGA1154生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，某同學(xué)為探究土壤中微生物對(duì)尿素是否具有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培養(yǎng)基成分如表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問(wèn)題：KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO4·7H2O0.2 g葡萄糖10 g尿素1 g瓊脂糖15 g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL(1)培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選_，因此這種培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。(2)目的菌生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來(lái)自培養(yǎng)基中的_，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中振蕩培養(yǎng)的主要目的是_。(3)轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時(shí)，常采用_的方法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。(4)下列材料或用具：培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿，玻璃棒、試管、三角瓶和移液管，實(shí)驗(yàn)操作者的雙手。其中需要滅菌的是_；需要消毒的是_。(填序號(hào))(5)簡(jiǎn)述土壤中可分解尿素的細(xì)菌的鑒定方法及原理：_。解析：(1)加入尿素的培養(yǎng)基能夠篩選出降解尿素的細(xì)菌，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)目的菌生長(zhǎng)所需的碳源和氮源來(lái)源于培養(yǎng)基中的含碳和含氮物質(zhì)，目的菌的生長(zhǎng)過(guò)程需要氧，培養(yǎng)時(shí)補(bǔ)充氧氣常用振蕩方法。(3)在固體培養(yǎng)基上篩選細(xì)菌時(shí)，常用劃線分離法或涂布分離法進(jìn)行接種。(4)實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)基及器具需滅菌處理，操作者的雙手則需消毒處理。(5)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，細(xì)菌合成的脲酶催化尿素分解為氨，pH升高，使酚紅指示劑變紅，從而選擇出能降解尿素的細(xì)菌。答案：(1)目的菌(分解尿素的細(xì)菌)選擇(2)尿素、葡萄糖為目的菌提供氧氣(3)涂布分離(4)(5)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑；細(xì)菌合成的脲酶催化尿素分解為氨，pH升高，使酚紅指示劑變紅5(2016·浙江10月選考，32題節(jié)選)請(qǐng)回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細(xì)菌實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問(wèn)題：(1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加_，滅菌備用。(2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用_滅菌過(guò)的G6玻璃砂漏斗過(guò)濾，因?yàn)镚6玻璃砂漏斗_，故用于過(guò)濾除菌。然后將尿素溶液加入到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。(3)取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的104,105兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測(cè)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)量最少的是_(A.105稀釋液尿素固體培養(yǎng)基B.105稀釋液LB固體培養(yǎng)基C104稀釋液尿素固體培養(yǎng)基D104稀釋液LB固體培養(yǎng)基)。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)_，其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生_所致。解析：(1)本實(shí)驗(yàn)中的LB培養(yǎng)基是要與尿素培養(yǎng)基作對(duì)比的，所以要用瓊脂糖替換瓊脂。(2)尿素培養(yǎng)基的滅菌要分開進(jìn)行，除尿素外的其他成分仍用高壓蒸汽滅菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾除菌，再將除菌的尿素加到已滅菌的其他成分中。G6玻璃砂漏斗由于孔徑小，細(xì)菌不能濾過(guò)，可用于過(guò)濾除菌，但需要在使用前進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。(3)由于在土壤中產(chǎn)脲酶的細(xì)菌遠(yuǎn)少于普通細(xì)菌，所以在尿素培養(yǎng)基上的菌落數(shù)相對(duì)少得多，另外稀釋倍數(shù)高的土壤稀釋液中細(xì)菌數(shù)量更少，在培養(yǎng)基上菌落數(shù)也更少。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是因?yàn)殡迕复呋蛩胤纸猱a(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑在堿性下呈紅色。答案：(1)瓊脂糖(2)高壓蒸汽孔徑小、細(xì)菌不能濾過(guò)(3)A紅色環(huán)帶氨(或NH3)- 11 -