初中生物競賽輔導教程 第十三章生物實驗的基本技術

第十三章  生物實驗的基本技術第一節(jié)  細胞學實驗技術【知識概要】一、玻片標本的制作技術制作玻片標本對認識生物體的形態(tài)結構具有重要意義。玻片標本有臨時玻片標本（如涂片、壓片、臨時裝片）和永久玻片標本（如永久裝片、切片）。1涂片法涂片法是將材料均勻地涂布在載玻片上的一種制片方法。涂片材料有單細胞生物、小型藻類、血液、細菌培養(yǎng)液、動植物的疏松組織、精巢、花藥等。涂片時應注意：（1）載玻片必須清潔。（2）載玻片要持平。（3）涂層須均勻。涂抹液滴在載玻片中間偏右，用解剖刀刃或牙簽等涂勻。（4）涂層要薄。用另一載玻片作推片，沿滴有涂抹液的載玻片面（二載玻片夾角應為30°45°）由右向左輕輕推動，涂成均勻一薄層。（5）固定。如需固定可用化學固定劑或干燥法（細菌）固定。（6）染色。細菌用亞甲基藍，血液用瑞氏染液。染色液要蓋住全部涂面。（7）沖洗。用吸水紙吸干或烤干。（8）封片。長期保存用加拿大的樹膠片片。2壓片法壓片法是將生物材料置于載玻片和蓋片之間，施加一定壓力，將組織細胞壓散的一種制片方法。壓片法的一般過程：（1）取材。觀察細胞分裂，應選取細胞分裂旺盛、新鮮的組織細胞為材料。如根尖、莖尖分生組織、骨髓細胞、花藥（花粉母細胞）。精巢（精母細胞）等。（2）固定。材料固定可根據(jù)需要而定，取材后立即壓片觀察，可不作單獨固定處理（與染色同步進行）；取材后不立即視察，可將材料用固定液（一般用醋酸酒精固定液）固定。固定224小時（因材料而異）后用95乙醇清洗，保存于70乙醇中，備用。（3）離析。對細胞不易散開材料用水解分離液（如1N HCl或鹽酸一酒精液）處理，一般處理620min，解離后經(jīng)水漂洗后方能染色。（4）染色。染色劑種類很多。觀察染色體常用醋酸洋紅染色液染色。（5）壓片。將材料放在載玻片上，加一滴清水或染液，蓋上蓋玻片用拇指輕輕壓片。（6）觀察。壓片后，即可在顯微鏡下觀察。3裝片法裝片法是將生物材料采取整體封固制成玻片標本的方法，用此法可制成臨時或永久裝片。裝片材料有：微小生物如衣藻、水綿、變形蟲、水螅，植物的葉表皮；昆蟲的翅、足、口器，人的口腔上皮細胞等。裝片法制作時應注意：（1）手持載玻片時，應注意持平，或放在平臺上。滴水時水量要適當，以恰好被蓋玻片蓋滿為度。（2）應將材料用解剖針或鑷子展開不使重疊，展平在同一平面上。（3）放蓋玻片時，從一側慢慢蓋在水滴上，防止出現(xiàn)氣泡。（4）染色時，將一滴染色液滴在蓋玻片的一側，用吸水紙從另一側吸引，使蓋玻片下的標本均勻著色。著色后，用同樣的方法，滴一滴清水，把染色液吸出后，在顯微鏡下觀察。二、顯微鏡基本實驗技術1低倍鏡（4X、10X）的使用方法顯微鏡操作主要包括兩個方面：（1）光度調(diào)節(jié)。正確對光是能否成功地觀察到物象的首要條件。對光時，先把聚光器上提，打開可變闌，轉(zhuǎn)動反光鏡，這時一邊看鏡內(nèi)視野，一邊調(diào)節(jié)聚光器螺旋，直至視野內(nèi)得到均勻而明亮的光線。（2）焦距的調(diào)節(jié)。調(diào)焦時，先把觀察的切片，用推進器對正通光孔中央。然后分兩步調(diào)焦。先用粗調(diào)器定焦，用左眼看目鏡，使粗調(diào)器慢慢上升，直到能清楚地看到標本為止。隨后調(diào)節(jié)細調(diào)器，使鏡筒微微升降，至物象更清晰為止。2高倍鏡（40X）的使用方法（1）將在低倍鏡中找到的物象欲放大部分移到視野中央。（2）轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使40X物鏡對準通光孔，轉(zhuǎn)動時從側面注視物鏡，以防鏡頭緊壓玻片。（3）調(diào)節(jié)細調(diào)螺旋，使物象清晰。3油鏡（100X）的使用方法（l）先用低倍鏡找到欲觀察細微結構，將其結構移至視野中央換高倍鏡。（2）下降鏡臺，在玻片標本上滴一滴香柏油，轉(zhuǎn)換油鏡。從側面注視油鏡，把鏡臺上升，使油鏡頭浸在香柏油滴中。（3）轉(zhuǎn)動細調(diào)螺旋，使物象清晰，進行觀察。（4）觀察完畢，用鏡頭紙擦去油鏡頭和玻片上的香柏油，再用少許二甲苯或乙醚 / 無水乙醇把鏡頭擦干凈。4安裝指針的簡易方法將目鏡的上蓋（一片透鏡）旋下，剪取一小段頭發(fā)（其長度約等于目鏡的半徑），用鑷子夾住一端，將另一端蘸少許中性膠，將其粘在目鏡內(nèi)壁的金屬光欄（一鐵圈）上。稍干后，旋緊上蓋，即可使用。三、單細胞的計數(shù)方法在細菌培養(yǎng)和體外細胞培養(yǎng)，以及環(huán)境監(jiān)測血液檢查中常常需要統(tǒng)計細菌、細胞、單細胞藻類、原生動物、血細胞、花粉等數(shù)量。細胞計數(shù)方法的原理是把一定體積的細胞液體，在顯微鏡下直接計算其個數(shù)，利用所得結果推算出每毫升水體中的單細胞數(shù)。具體方法如下：1水滴計數(shù)法用管口圓而平滑、大小適宜的吸管，吸取1mL水，然后測定這一吸管1rnL水可滴出多少滴水（反復測定，直到準確為止）。這樣可以計算出該吸管滴出的每一滴水的體積。用吸管取樣時，如果單細胞是活動的要用碘殺死后，再計數(shù)；如果樣品濃度太大，計數(shù)困難，按倍數(shù)稀釋到適宜的濃度；另外，取樣前必須攪拌，攪拌后，立即取樣。取樣后，在顯微鏡下計數(shù)，得到一滴水中細胞數(shù)的平均值后，可依下列公式求出1mL水體中所含細胞的數(shù)目。1mL水體中含細胞數(shù)計數(shù)平均值×定量吸管每毫升的滴數(shù)×稀釋倍數(shù)2血球計數(shù)板計數(shù)法血球計數(shù)板是由一塊厚玻片特制而成，其中央有兩個計數(shù)室。每個計數(shù)室劃分出9個大方格（見下圖），每格面積1mm2，加蓋玻片后的深度為0.1mm。因此，每大方格容積為0.1mm。另外，中央大方格以雙線等分為25個中方格。每個中方格又分16個小方格，供細胞計數(shù)用。    1                               2       3                                 4血球計數(shù)板的構造l頂面觀  2側面觀  3放大后的網(wǎng)格  4放大后的計數(shù)室計數(shù)方法：首先用吸管吸取少許稀釋倍數(shù)的單細胞懸液，從蓋片端滴一小滴（不宜過多），液體自行向內(nèi)滲入，靜置數(shù)分鐘后，再放在微鏡下觀察計數(shù)。一般選取計數(shù)室內(nèi)四個角及中央五個中方格（80小方格）計數(shù)，若細胞位于小方格的線上，應遵循“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則，以減少誤差。計數(shù)應重復3次，取其平均值。數(shù)完畢后，依下式計算：每1mL懸液細胞數(shù)或每克細胞數(shù)80個小方格細胞總數(shù) / 80×400×10000×稀釋倍數(shù)四、顯微測微尺的應用方法顯微測微尺是在顯微鏡下測量生物細微結構的測微工具，用它測量細胞各部分的厚薄和大小。顯微測微尺（見下圖）包括目鏡測微尺（目尺）和物鏡測微尺（臺尺），測量時須將其配合使用方可達到測量目的。目鏡測微尺為一圓形玻片，玻片中央有一橫線刻有大小格的等距離線。物鏡測微尺有一特制的玻片，中央圓圈內(nèi)有一1mm長分為100個等距小格的刻線，每一小格即10m。目鏡測微尺           物鏡測微尺顯微測微尺測量方法：首先須算出目鏡測微尺的每一格在不同倍物鏡下各為多少m。即取下接目鏡卸下透鏡，裝上目鏡測微尺。然后將物鏡測微尺放在鏡臺中央，眼觀目鏡，調(diào)好焦距，使兩種測微尺上的刻度平行并重疊在一起。按下面公式計算出目鏡測微尺每格的實際長度。目鏡測微尺每格的長度（m）物鏡測微尺的格數(shù) / 目鏡測微尺的格數(shù)×10計算出目鏡測微尺每格的實際長度后，再在鏡臺上放上需要測量的物體標本或玻片標本，即可用目鏡測微尺測出它們的長度。五、顯微結構圖的繪制技巧生物繪圖是科學記錄的一種方法。繪圖時應注意：（1）繪科學圖以精確為主，不能藝術加工渲染。（2）只在紙的一面繪圖。繪圖時要用2H以上繪圖鉛筆，紙面力求整潔。（3）繪圖大小適宜，布局合理。一般要求圖畫在紙的稍偏左側，留出圖注的位置。（4）圖的各部分的位置和比例，應與顯微鏡中實際觀察的一致，而要注意突出顯微結構的每個特征。（5）顯微構造圖的點線不要重復描繪。以實線表示輪廓，虛線表示被遮蔽但需表現(xiàn)的輪廓，用圓點的疏密來表示明暗、凹凸等層次。點點時筆尖直立。點的大小、疏密要均勻、整齊、渾圓。（6）繪圖時，一般先草擬輪廓圖，經(jīng)檢查無誤后，再以準確、清晰的線作最后的描繪。第二節(jié)   物理學和化學分析技術【知識概要】、分離技術分離技術主要是利用物理學和化學的原理建立起來的各種分離、純化方法。常用的分離技術有以下幾種：1紙層析法層析技術是從一個混合物中分離和純化一種或幾種生物化合物的最簡便的方法，用濾紙為支持物的層析法，叫紙層析法。紙層析用的展層溶劑大多由水和有機溶劑組成。濾紙纖維與水的親和力強，與有機溶劑的親和力弱，因此在展層時，水是靜止相，紙是靜止相的支持物，有機溶劑是流動相，它沿著濾紙流動。若將生物樣品（提取液）點在濾紙上（此點稱為原點）進行展層，樣品中的各種溶質(zhì)（如葉綠體中的四種色素，各種氨基酸等）即在兩相溶劑中不斷進行分配。由于它們的分配系數(shù)不同，不同溶質(zhì)隨流動相移動的速率不等，于是就將這些溶質(zhì)分離開來，形成距原點不等的層析點。紙層析的具體方法：（1）制樣。將樣品經(jīng)研磨、過濾制備成提取液；（2）制備濾紙條。將濾紙剪成長10cm、寬1cm的紙條。在一端用鉛筆畫一橫線（點樣線）；（3）點樣。用毛細吸管將濾液沿點樣線畫一直的濾液細線；（4）層析：將層析液（石油醚、丙酮、苯的混合液）倒入燒杯，然后將濾紙條靠燒杯內(nèi)壁輕輕插入層析液中。（5）結果。幾分鐘后，出現(xiàn)層析現(xiàn)象。2電泳法電泳技術主要是根據(jù)不同物質(zhì)所帶的電荷的數(shù)量和性質(zhì)不同，因而在電場移動中的速度和方向就不同。生物分子如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶和核酸等都具有可電離的集團，在溶劑中能形成帶電荷的分子，由于在不同的溶劑介質(zhì)中所帶的電荷的數(shù)量和性質(zhì)的差別，在電場中泳動的速度（遷移率）不同，由此可以分離各種物質(zhì)成分。電泳的方法很多，有紙電泳、瓊脂平板電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等，其中較簡單的是紙上電泳法，它是用濾紙作為電泳載體的一種電泳方法。紙上電泳一般操作過程（以分離血清蛋白為例）：（1）儀器準備。電泳設備主要是電泳儀和電泳槽（見下圖）。電泳槽是供兩極電泳分離和盛裝緩沖液之用。電泳儀提供可控電源。一般采用電壓在100500V，電流在0mA50mA或100mA。（2）配制緩沖液。緩沖液的種類很多，可用0.5M、pH5.6巴比妥緩沖液或 Ph8.6硼酸緩沖液。緩沖液配好后直接加入兩側電泳槽中。（3）裁剪濾紙。取電泳濾紙，按2×20cm剪裁，于一端約1/3處用鉛筆劃點樣線，將紙用緩沖液浸濕。（4）點樣。在點樣線上，用50L微量注射器點樣，一般為10mL。點樣后，將濾紙放在電泳槽兩極隔板上，兩端浸入緩沖液中。（5）電泳。接上電源，按濾紙長和寬選用電壓（8Vcm）和電流（0.4mAcm），以點樣線一側為負極，向正極泳行。（6）烘干。取下電泳紙條在烤箱（90105）迅速烘干。（7）染色。將烘干濾紙條浸入溴酚蘭染液10min，取出以0.5醋酸溶液脫色，逐漸顯出電泳帶。（8）比色。將各條區(qū)帶濾紙剪下，以電泳空白濾紙為對照，在分光光比色計上比色。（9）計算。按光密度值計算出各部分蛋白質(zhì)的百分數(shù)。水平電泳槽裝置3離心法離心法是一種利用物質(zhì)在溶液中的密度、大小和形狀的不同，以及它們沉降系數(shù)、質(zhì)量、浮力因子等方面的差別，通過強離心力的作用使其分離、濃縮、提純的技術，并可用于分子量的測定。在生物學研究中，常用離心方法從組織勻漿中分離各種細胞器及各種蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子。離心的設備主要是離心機，它是利用離心力對混合液進行分離和沉淀的專門儀器。離心機的種類很多，有低速離心機（4000/ min以下）、高速離心機（4000/ min以上，20000/ min以下）和超速高心機（20000/ min以上）。離心分離方法很多，常用的是差速離心機，是指低速和高速離心交替進行，用不同強度的離心力使不同質(zhì)量的物質(zhì)分批分離的方法。例如，利用離心機的不同轉(zhuǎn)數(shù)（rpm，即/ min）和時間，從鼠肝勻漿中分離各種亞細胞組分的過程（下圖）：大白鼠肝臟勻裝分級分離各種亞細胞組分圖解二、測定技術1定性測定比色法生物材料化學成分的測定技術很多，在生物學實驗中最常用的簡便方法是比色法。比色法是利用生物組織中的有機物與某些化學試劑相互作用，能產(chǎn)生顏色反應的原理，可以根據(jù)顏色反應鑒定生物組織中某種有機物的存在。從細胞組織中，鑒定有機物的常用比色法，參見下表。成分試劑作用顏色反應還原糖斐林（Fehling）試劑使自由醛或酮基的糖氧化產(chǎn)生棕紅色Cu2O沉淀蛋白質(zhì)雙縮脲試劑肽錠在堿性環(huán)境中與CuSO4結合產(chǎn)生紅紫色的絡合物淀粉碘液淀粉與碘結合藍色反應脂肪蘇丹酒精溶液脂肪與蘇丹結合紅色反應維生素A三氯化銻一氯仿溶液與SbCl3作用藍色反應維生素B1重氮化氨基苯磺酸溶液在堿性溶液中發(fā)生作用紅色反應核酸亞硫酸復紅溶液與DNA發(fā)生作用呈紅色或紫色2定量測定滴定法滴定法是將一定濃度的標準溶液滴入被測物質(zhì)溶液中，當反應到終點后，根據(jù)所用標準溶液的體積計算被測物質(zhì)的含量，這是一種常用的容量分析法。滴定法常用的儀器是滴定管。它是帶有刻度和活栓的玻璃管，用它放送已知體積的溶液。滴定法的一般操作技術（以維生素C定量測定為例）：（1）樣品制備。將樣品（洗凈蔬菜）20g，加2草酸100g，置組織攪拌機中打成漿狀。稱取5g漿狀物倒入50mL容量瓶中以2草酸溶液稀釋至刻度。靜置10min，過濾備用。（2）滴定。標準液滴定：準確吸取標準抗壞血酸（Vc）溶液 1mL（含0.1mgVc）置100mL錐形瓶中，加9Ml1草酸，微量滴定管以0.12，6-二氯酚靛酚滴至淡紅色，并保持15sec即為終點。由所用染料的體積計算出1mL染料相當于多少mg抗壞血酸。樣液滴定：準確吸取濾液兩份，每份10mL分別放入兩個100mL錐形瓶內(nèi)，測定方法同前。計算：V×T / W×100100g樣品中含抗壞血酸（Vc）mg數(shù)式中：V滴定時所用去染料毫升數(shù)。T1mL染料能氧化Vc毫克數(shù)。W10mL樣液相當于含樣品之克數(shù)。第三節(jié)  微生物培養(yǎng)技術【知識概要】一、培養(yǎng)基的制作技術制作培養(yǎng)基是微生物實驗的基礎。培養(yǎng)基的制作有以下幾個環(huán)節(jié)：1玻璃器皿的清潔在制作培養(yǎng)基前，首先應準備好合乎要求的清潔玻璃器皿。一般用肥皂液煮沸30min，或浸入用重鉻酸鉀和濃硫酸配制的洗液數(shù)10min，然后用清水沖洗，晾干后保存?zhèn)溆谩?培養(yǎng)基的制作過程（1）配制液體培養(yǎng)基  根據(jù)需要配制培養(yǎng)基的數(shù)量，先在大杯中注入部分蒸餾水；按培養(yǎng)基配方稱量各種成分的原料，依次加入使之溶解；補足需水量；如用肉膏等配制時，需加熱溶解；加熱后，補足因加熱所蒸發(fā)的水分，即成液體培養(yǎng)基。（2）配制固定培養(yǎng)基  在液體培養(yǎng)基里加凝固材料（瓊脂），加入后繼續(xù)加熱使之融化，即成固體培養(yǎng)基。（3）調(diào)整 pH值  配好培養(yǎng)基后用pH試紙測試，用10% HCl或10NaOH調(diào)到所需的pH。（4）過濾分裝  用濾紙或紗布趁熱過濾，將過濾液分裝于試管中，其量約為試管的1/41/3（不要沾污管壁），塞上棉塞。（5）滅菌  將分裝好的培養(yǎng)基，經(jīng)高壓蒸汽滅菌30min，保存?zhèn)溆谩?制平面或斜面培養(yǎng)基在分裝時，如裝入培養(yǎng)皿則成平面培養(yǎng)基。欲制成斜面培養(yǎng)基，則將滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基，趁熱倒入試管，蓋上棉塞，并將試管擺放在小木條支架上，呈適當斜度（見下圖），凝固后即成斜面培養(yǎng)基，可保存?zhèn)溆?。培養(yǎng)基的斜面擺法4細菌培養(yǎng)基的制法培養(yǎng)不同的微生物需制備不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)細菌主要用牛肉膏培養(yǎng)基（牛肉膏0.5g；蛋白胨1g；食鹽0.5g；瓊脂1.5g；水100mL）。制法是：按照配方先配好各種成分的培養(yǎng)液，加熱使之充分溶解，并補足所失水分。調(diào)pH為7.47.8（滅菌后的pH為 7.27.6）。分裝后滅菌，制成斜面，即成肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。二、分病菌技術分離菌技術主要包括接種和稀釋技術。微生物的各項實驗操作均應在無菌條件下進行。1接種技術（1）接種設備  接種時可在無菌操作箱（見下圖）或超凈工作臺上操作。無此設備條件也可直接在酒精燈上操作。接種工具有接種環(huán)、接種針和接種鉤。無菌操作箱1通氣孔；2移動門；3手孔（2）接種的方法步驟  用品的消毒滅菌。接種箱和接種用品用紫外燈滅菌。雙手用75乙醇消毒。采種。菌種由窗門放入，兩手從袖套伸進接種箱，點燃酒精燈，用左手并排拿起有菌種的試管和培養(yǎng)試管，試管口靠近酒精燈火焰，旋松棉塞；右手的拇指和食指拿起接種環(huán)，放在火焰上燒紅滅菌。接種。用右手的中指、無名指和小指夾下兩個棉塞，把兩個試管口放在火焰上燎一下。把滅菌的接種環(huán)伸進菌種試管，挑取一點菌落，再插入培養(yǎng)基試管里，在培養(yǎng)基斜面上由管底向管口連續(xù)輕輕地劃幾道曲線，使菌落涂在培養(yǎng)基上。然后抽出接種環(huán)，將試管口再在火焰上燎一燎，塞上棉塞，連續(xù)操作使所有培養(yǎng)基試管都涂上菌落。（參看下圖接種方法示意圖）保溫培養(yǎng)。接種后，將試管放保溫箱37恒溫培養(yǎng)，34天后，在培養(yǎng)基上可以看到正在發(fā)育的菌落。接種方法示意圖1接種環(huán)滅菌；2采種；3接種；4試管口滅菌；5裝好棉塞2稀釋技術在自然界，微生物都是混雜生活在一起的，要想研究某種細菌，必須從混雜的細菌群體中分離得到一種細菌。這種純培養(yǎng)分離菌種的方法很多，較簡單的有稀釋倒平皿法。這種方法是將待分離的材料作一系列稀釋（如110、1100、11000、110000等），取不同稀釋液各少許與已溶化并冷卻至45的瓊脂培養(yǎng)基相混合，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基凝固后，保溫培養(yǎng)一定時間，即有菌落出現(xiàn)（如下圖）。如果稀釋得當，平皿中出現(xiàn)分散的單個菌落便可能由一個細菌繁殖而成，挑取此單個菌落或再重復以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)的菌株。稀釋倒平皿分離法三、染色技術鑒別細菌主要采用革蘭氏染色法。按照細菌對這種染色反應的不同，分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌兩大類。染色方法要點是：細菌先經(jīng)草酸結晶紫染色處理，用媒染劑（碘液）處理后，再用酒精脫色，最后番紅或沙黃復染。如果細菌不脫色不復染，呈紫色，稱為革蘭氏陽性細菌（用G表示），如芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和多數(shù)球菌呈陽性反應；如果細菌被酒精脫色而被番紅或沙黃復染成紅色的稱為革蘭氏陰性細菌（用G表示），如大多數(shù)無芽孢桿菌和某些球菌、螺旋菌，呈陰性反應。第四節(jié)  植物解剖與生理測定技術【知識概要】一、植物解剖技術（見下表）植物各種器官解剖與觀察方法名稱材料解剖方法觀察順序總結根洋蔥或小麥根尖壓片法（縱剖面）、徒手切片法（橫切面），顯微鏡下觀察表皮外皮層內(nèi)皮層中柱（中柱鞘、維管束）根結構特點莖1新生楊樹枝條2玉米幼莖1取枝條插在紅墨水中，葉片顯紅色后，用解剖刀橫切和縱切，直接觀察2徒手切片法，顯微鏡下觀察1樹皮表皮皮層韌皮部（篩管）木質(zhì)部（導管）髓2表皮機械組織維管束（導管、韌皮部）雙子葉木質(zhì)莖構造特點單子葉草質(zhì)莖構造特點葉蠶豆葉或青菜葉徒手切片法，顯微鏡下觀察上表皮氣孔葉肉（柵欄組織、海綿組織）葉脈下表皮氣孔葉結構特點花桃花玉米雌、雄花用鑷子分層解剖，將花的各部分擺在白紙上直接觀察花萼（萼片數(shù)）花冠（花瓣數(shù)）雄蕊（花絲、花藥）雌蕊（柱頭、花柱、子房）花托單性花和兩性花結構特點，花圖式果實桃（核果）番茄（漿果）蠶豆（角果）蘋果（梨果）用解剖刀將果實縱剖或橫剖后，直接觀察莢殼果皮（外果皮、內(nèi)果皮）果肉子房壁種子胎座不同果實的結構特點二、徒手切片技術徒手切片是將要觀察的材料切成極薄的片，以達到了解其形態(tài)結構的一種方法。徒手切片步驟如下：1選擇材料和夾持物可作徒手切片的材料有各種植物的葉片、較軟的嫩莖等。由于能作徒手切片的材料較柔軟，切片時須有夾持物輔助。夾持物一般用胡蘿卜或白蘿卜的圓錐根、馬鈴薯的塊莖等。對于較薄的葉可直接夾在夾持物的劈口中；對于較厚的材料，則須按材料大小先在夾持物的劈口上挖成合適的凹穴，把材料加進去，再開始切片。2正確手持材料和持刀方法應用左手持材料，夾在拇指和食指（或其他四指）之間，材料略高于拇指和食指。拇指略低于食指，以免切時刀刃傷手。右手持刀（剃刀或刮臉刀片），刀身要放平，刀口向著切片材料（見右圖）。3切片技術先將材料和刀口蘸些水，切去材料上端不整齊的一段，然后再正式切，切時要保持在同一水平面上，由左前外方向右內(nèi)方（即向著自己）迅速拉動，動作要快。切時用力靠臂，才能平穩(wěn)。切下的片，棄去較厚不適用的，對合乎要求的立即侵入有水的培養(yǎng)血內(nèi)。4選片和裝片徒手切片往往厚薄不一，可放在載玻片上，在顯微鏡下檢查，選出合適的切片。切片選好后，進行染色，蓋上蓋玻片，即可作為臨時裝片，在顯微鏡下觀察。三、光合作用強度的測定方法1干重法的實驗原理植物的木質(zhì)部輸送水分，韌皮部輸送營養(yǎng)物質(zhì)。如果用化學或物理的方法破壞植物葉片基柄的韌皮部而保留木質(zhì)部，就可以阻斷葉片中光合產(chǎn)物輸出，而同時保持葉片中正常水分的供應。在這樣條件下，用干重法比較：留在植株上進行一定時間光合作用后的半張葉片，與處理前取下并在暗中保存的半張葉片的單位面積干重差，就可以測得植物葉片的光合作用強度。2操作技術（1）選擇測定用的樣品  在麥田或棉田選擇有代表性植株的葉片（葉片在植株上的部位、葉齡、受光條件應一致），用小紙牌編號掛好。一般每個處理選用1020張葉片。（2）葉片基部（或葉柄）的處理  為了破壞葉的輸導系統(tǒng)的韌皮部，可根據(jù)測定植物的不同而采取不同處理方法。如測棉花等雙子葉植物的葉片，可用刀片將葉柄的外皮環(huán)割掉1cm左右，然后用橡皮膏包好套上塑料套管；如測小麥等單子葉植物的葉片，可采用石蠟燙傷葉片基部的辦法，即用酒精燈，在燈上外加鐵絲圈，可將裝有石蠟的小燒杯放在燈上加熱，一般在90左右，用毛筆蘸蠟在葉基部燙一下。燙后要不影響葉片的自然生長角度。（3）剪取樣品  葉基部處理完畢即可剪取樣品，一般用打孔器取樣，也可用剪刀剪取。取樣同時記錄時間，開始進行光合作用測定。剪取樣品時應按實驗編號次序分別剪下對稱葉片的一半（主脈不剪下）。取下的半張葉片按編號次序放入鋁制樣品盒中或夾在濕紗布中并貯于暗處。45h后再剪取另外半張葉片，同樣放在鋁盒或濕紗布中。（4）稱量比較  將上述葉片按光暗兩張半葉的對應部分重疊起并壓上模板，用單面刀片割下等面積的葉片，如用打孔器取樣時，應出取樣面積大小，然后分別存放在稱量皿或短的玻璃管內(nèi)，也可放在鋁盒中，在8090烘箱中烘至恒重（約5h），然后在分析天平上稱重并做好記錄，計算出平均值和誤差。（5）計算結果  將上面的實驗數(shù)據(jù)代入下面公式即可算出作物光合作用強度。光合作用強度（mg干物質(zhì)dm2·h）（光暗）葉片干重差（mg）/ 單位葉面積（dm2）/ 照光時間（h）四、蒸騰作用的測定方法1氯化鈷檢驗法原理植物通過蒸騰作用散失水分。氯化鈷紙干燥時呈藍色，受潮吸水后逐漸變成粉紅色。由此，可通過氯化鈷紙檢驗葉的蒸騰作用。2操作技術（1）裁取兩張邊都是3cm正方形的藍色的5氯化鈷紙。在盆栽天竺葵上選擇一片葉，把一氯化鈷紙覆在葉的表皮上，取另一張氯化鈷紙覆在葉的下表皮上。然后兩面覆褶一張大于氯化鈷紙的玻璃紙，用回形針或夾子夾住玻璃紙和葉片（見右圖）。（2）也可以用玻璃膠把氯化鈷紙固定在葉的上、下表面，外包玻璃紙并夾住。（3）觀察氯化鈷紙顏色的變化，比較上、下表面氯化鈷紙變化的速度和變色的程度。（4）實驗結果，下表面氯化鈷變成粉紅色的時間比上表面快，且表面程度大。因葉下表皮氣孔分布多，蒸騰出的水蒸氣也多，氯化鈷易受第五節(jié)  動物解剖與生理測定技術【知識概要】一、小型無脊椎動物的解剖技術1蚯蚓的解剖（1）取材  最好取活蚯蚓經(jīng)過麻醉或加溫水的方法，然后解剖，可以見到心臟的活動。（2）解剖  解剖時要腹側向下，背側向上，前端向外，后端向著解剖者。先以大頭針將前端固定解剖盤上，再以大頭針固定后端，使蚯蚓平直，然后用解剖剪在背中線（這是解剖蚯蚓的特點）從后端向前端剪背壁。（3）展平體壁  先用鑷子夾著一側體壁，用解剖刀割斷節(jié)間的膜，再割斷另一側隔膜，最后向左右展平體壁，為了便于觀察內(nèi)部器所在節(jié)的位置，每隔5節(jié)體節(jié)在左右各插上一個大頭針（針要斜插），插至30節(jié)以后，便可不按節(jié)插，插的較能固定即可。（4）注清水  為了觀察清楚，解剖盤內(nèi)應放些清水，浸泡蚯蚓。（5）觀察  先觀察各器官的自然位置，辨認各器官的形狀、顏色位置等，然后再按各器官系統(tǒng)逐步觀察。2蝗蟲的解剖（1）取材  已浸制保存的蝗蟲（包括雌性和雄性）。（2）外部觀察  取蝗蟲放在解剖盤上，先觀察外形，觀察順序是先整體，再從頭、胸、腹各部從前至后分別觀察。（3）解剖  解剖蝗蟲的方式不同于一般左右對稱的動物。解剖蝗蟲要先沿左側氣門上方，由腹部末端向前剪開，直至前端；再沿右側同樣剪開，背壁除掉即可觀察內(nèi)部構造。（4）固定蝗蟲  用大頭針固定蝗蟲材料于解剖盤上，并注入清水浸泡蟲體。（5）觀察  先按各器官的自然位置從前至后辨認其形態(tài)、特點、顏色和位置等，再就各器官系統(tǒng)分別觀察。二、雙筒解剖鏡的使用技術1解剖鏡的構造雙筒解剖鏡的構造基本上與顯微鏡相似，也分為機械裝置和光學系統(tǒng)兩部分，不過它的構造比較簡單。機械裝置有鏡座、鏡臺、鏡筒、支柱（立柱）和調(diào)節(jié)手輪等部分：光學系統(tǒng)有接目鏡、接物鏡和反光鏡等部分（見右圖）。雙筒解剖鏡具有兩個鏡筒、兩個目鏡和物鏡，因此，使用時兩眼可以同時觀察。在鏡筒的其中一個附有調(diào)整目鏡筒（目鏡調(diào)節(jié)圈），用以校正觀察者的兩眼間距離。雙筒解剖鏡只設有一對粗調(diào)焦手輪，進行焦距調(diào)節(jié)。按目鏡和接物鏡也有各種不同的放大率，一般雙筒解剖鏡的放大倍數(shù)，從幾十倍至一百倍左右。在雙筒解剖鏡上有的有反光鏡，有的缺反光鏡；有的在鏡身上附有照明燈。鏡臺上有一塊厚玻璃板和一塊一面白色一面黑色的瓷板，根據(jù)觀察物的顏色和透明度可以調(diào)換使用。2解剖鏡的使用方法把解剖鏡放在面向光源的位置，調(diào)節(jié)兩鏡筒間的距離，使適合自己的兩眼間的寬度。如觀察透明的標本，鏡臺選用玻璃板，光源由反光鏡底下照射。如觀察不透明的標本，鏡臺選用瓷板，深色標本用白色一面，淺色標本用黑色一面，光源以強光或燈光從上面直接照在標本上，標本要觀察的部位應轉(zhuǎn)向光源。在解剖鏡下，觀察到的物象為一正立像，而且標本移動方向和物像的移動方向完全一致。三、小型動物整體裝片的制備技術整體裝片的制作，可以用于封固小形動、植物的整個身體，或個別組織和器官，制成永久裝片后能長期保存?，F(xiàn)以水螅整體裝片為例說明制作技術，其步驟如下：1配制固定液固定液用波因（Bouin）氏固定液，即用75mL苦味酸飽和水溶液中加入25mL甲醛，在臨用時再加入5mL冰乙酸。2固定與去色固定水螅時，先在表面皿里放入少量水，用吸管把水螅從培養(yǎng)缸中吸出，放在表面皿內(nèi)。等水螅身體和觸手慢慢伸展后，用加熱的波因氏液（3040）固定。固定液要多些，傾倒時要迅速，倒在水螅身上，使水螅不收縮。在固定液中固定48h。然后浸入70乙醇中，每天更換一次乙醇，直至洗去標本上因固定液而染上苦味酸的黃色為止。3染色與褪色將標本浸入硼砂洋紅染液中，染24h。然后用1鹽酸乙醇褪色，時間為0.51min，褪色到內(nèi)部器官能看清楚為止。4脫水和透明依次將標本浸入70、80、95乙醇及無水乙醇脫水。用二甲苯透明。5封片用樹膠封片。四、呼吸的測量技術1人體肺活量的測定方法測定肺活量有助于了解肺通氣的情況，是肺功能的指標之一。肺容量是指肺容納的氣體量，它是肺活量同余氣量之和。肺活量則是潮氣量、補呼氣量和補吸氣量的總和。測定肺活量需用肺活量計，測定方法如下：（1）校正肺活量計。測前筒內(nèi)裝水，調(diào)整指標到“0”位，吹嘴用70乙醇消毒。（2）測定潮氣量。受試者平靜吸氣后，捏住鼻子，向肺活量計內(nèi)呼氣，指針的讀數(shù)，即為潮氣量。（3）測定補呼氣量。受試者平靜呼氣后，捏住鼻子，向肺活量計作最大呼氣，指針的讀數(shù)，即為補呼氣量。（4）測定補吸氣量，先讓肺活量計內(nèi)氣體排出，提高浮筒，使筒內(nèi)存3000mL新鮮空氣。受試者平靜吸氣后，對準吹嘴作最大量吸氣。肺活量計減少的氣量即為補吸氣量。（5）測定肺活量。將肺活量計內(nèi)的氣體排空，指針到“0”位，受試者盡量吸氣，迅速捏鼻，向肺活量計吹嘴作最大限度呼氣。指針的讀數(shù)，即為肺活量。一般要求測三次，取其中最大值作為受測者的肺活量。2人體呼出氣體中含較多CO2的測定方法根據(jù)石灰水遇CO2生成乳白色CaCO3沉淀的原理，可進行CO2含量的測定，其方法如下：（1）取甲、乙兩個試管，向各管內(nèi)注入10mL15mL澄清的石灰水。（2）在甲試管內(nèi)插進一根玻璃管或麥管，露出一端用70乙醇消毒。然后作深呼吸后，立即用玻璃管向試管中盡量呼氣，可以觀察到呼出氣體遇到石灰水后，變成渾濁狀的現(xiàn)象。（3）用橡皮球朝乙試管內(nèi)的石灰水打氣，可觀察到石灰水依舊澄清，不發(fā)生變化。第六節(jié)  遺傳分析技術【知識概要】一、孟德爾性狀的遺傳分析技術1果蠅的單因子實驗方法選取具有一對相對性狀的果蠅（長翅與殘翅或灰身與黑身）進行雜交和測交，觀察雜種后代相對性狀的遺傳表現(xiàn)，從而驗證孟德爾分離規(guī)律。（1）實驗用具及材料  培養(yǎng)瓶（帶培養(yǎng)基和棉塞）、麻醉瓶、放大鏡、毛筆或解剖針、白瓷板（或白紙）、標簽紙、乙酸及記錄本等。雜交親本：純系野生型長翅果蠅（父本）及殘翅果蠅（母本）。（2）實驗步驟  繁殖雜交親本。分別在培養(yǎng)瓶中繁殖純系果蠅親本的后代。果蠅雜交實驗需用雌性處女蠅交配。因此在雜交實驗前一天晚上8時以后，將已孵化出的母本果蠅從培養(yǎng)瓶中移出，第二天早上8時收集到的雌蠅均為處女蠅，可作雜交親本。選親雜交。用麻醉瓶麻醉剛孵化出的母體幼蠅，在白瓷板上，用放大鏡挑取處女蠅，移入新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；再以同法引入父本雄蠅。在一個培養(yǎng)瓶內(nèi)共移入3對蟲體。引入后在瓶上貼上標簽，注明雜交組合和雜交日期，放在溫暖（25）處培養(yǎng)。移去親本。雜交后57天，親本已雜交產(chǎn)卵。在雜種幼蟲化蛹羽化前，移去親本，以免跟F1成蟲混雜。觀察雜種一代（F1）。培養(yǎng)瓶中羽化出的果蠅是子一代（F1），先把F1傾入麻醉瓶中麻醉，在白瓷板上觀察，統(tǒng)計后記錄不同性狀的表現(xiàn)及個體數(shù)。這時會發(fā)現(xiàn)F1全是正常翅（長翅）。 培養(yǎng)雜種二代（F2）。在白瓷板上選擇麻醉的3對F1果蠅，移到新的培養(yǎng)瓶中，讓它們自交。另選擇3個F1處女蠅和隱性系代（殘翅）雄蠅移到培養(yǎng)瓶中進行回交，放在溫暖處培養(yǎng)。待自交瓶內(nèi)F2果蠅羽化成蟲后，統(tǒng)計和記錄不同性狀的表現(xiàn)及個體數(shù)，計算長翅和殘翅的比例應接近31。用相同方法，再計算回交瓶內(nèi)的后代，兩種性狀表現(xiàn)型的比例接近11。由此，證明長翅和殘翅的遺傳符合基因的分離規(guī)律。2性狀分離比的模擬實驗方法孟德爾的遺傳規(guī)律符合概率的基本原理。通過人工模擬形成配子時等位基因的分離，以及受精時雌雄配子的隨機結合過程，便可驗證基因的分離規(guī)律，實驗方法如下：（1）材料用具：小塑料桶（或布袋）1個；4種顏色的小球各10個。（2）方法步驟：取兩種色彩的球代表雌配子，分別標上字母D和d，表示攜帶的基因符號；另取兩種色彩的球代表雄配子，也分別標上基因符號D和d。將代表雌配子的兩種彩球各10個放入小桶（或布袋）中，搖動小桶，使桶內(nèi)小球充分混合，然后從桶中隨機抓取1個小球，記下這個小球的字母，重復做50100次，統(tǒng)計出D或d小球出現(xiàn)的數(shù)量。然后按同樣方法，統(tǒng)計雄配子的兩種彩球出現(xiàn)D或d小球的數(shù)量。通過計算便可以說明等位基因在雌雄配子中分離的幾率是多少。將4種色彩的球各10個都放入小桶內(nèi)，讓他們充分混合后，然后從桶內(nèi)隨機抓取2個小球，每次記下這兩個小球的字母，重復做50100次，統(tǒng)計出現(xiàn)DD、Dd、dd小球的數(shù)量。通過計算便可說明受精時雌雄配子的隨機結合后不同基因型雜種出現(xiàn)的幾率。二、數(shù)量性狀的遺傳分析技術數(shù)量性狀大都由許多基因支配，容易受環(huán)境的影響，所以它們的表現(xiàn)型呈連續(xù)分布。在這種情況下，應用統(tǒng)計遺傳學方法進行分析?，F(xiàn)以玉米果穗長度的遺傳實例說明數(shù)量性狀的統(tǒng)計分析方法。（l）雜交親本：P1為短穗親本；P2為長穗親本。（2）P1×P2雜種后代F1的果穗長度（cm），分別求出平均穗長（ ）、標準差（Sx）和標準差的機誤（SE）。標準差的機誤計算公式：通過分析可以看出，玉米果穗的數(shù)量性狀，F(xiàn)1介于兩親本的中間，F(xiàn)2的平均長度與  F1相近，但變異較大。（3）利用P1、P2、F1、F2世代群體所測數(shù)值可以進行控制數(shù)量性狀基因數(shù)目的估計： 式中：n為最低基因?qū)?shù)； P1為P1的平均值； P2為P2的平均值；S2F2為F2的標準差的平方（方差）；S2F1為F1的標準差的平方（方差）。三、符合度的測定方法卡方（X2）測驗是使研究工作者能用來確定實驗所得的一組數(shù)值與一定的理論期待值之間的符合程度的統(tǒng)計方法?？ǚ綔y驗的公式為：式中：O是實測值；e是理論值， 是總和的符號，是許多上述的比值的總和。從以上公式表明，所謂X2值即是平均偏差的總和。從公式中可看出這樣的關系：（1）實際值偏離理論值越大，產(chǎn)值也愈大，產(chǎn)值（誤差概率值）就越小，說明由于偶然誤差造成的既定差異可能性越小。（2）實驗值偏離理論值越小，X2也越小，P值則大，說明偶然誤差造成既定差異的可能性就大。在統(tǒng)計學中，產(chǎn)值常以5（0.05）為標準，P 0.05說明“差異不顯著”，P0.05說明“差異顯著”，如果P0.01說明“差異極顯著”。有了X2值和自由度（用df表示，dfk1，k為類型數(shù)），就可以通過下表查出P值，確定實驗結果是否與理論預期值相符合。不同X2值和不同自由度的P值第七節(jié)  生態(tài)和環(huán)境考察技術【知識概要】一、種群密度的測定技術種群密度是指單位空間內(nèi)某種群的個體數(shù)量。在對動植物種群密度的調(diào)查中，一般采用樣方法，即在被調(diào)查種群的生存環(huán)境內(nèi)，隨機選取若干樣方，通過計數(shù)每個樣方的個體數(shù)，求得每個樣方的種群密度，以所有樣方種群密度的平均值作為該種群密度。1雙子葉草本植物種群密度的測定方法（1）確定調(diào)查對象。根據(jù)當?shù)貙嶋H情況確定某一地段中的某種雙子葉植物的種群（如苦賣菜、蒲公英、薺等）為調(diào)查對象。（2）選取樣方。選擇一個該種群分布較均勻的長方形地塊，將該地塊按長度劃成10等份，在每份的中央劃一個長和寬各為1m的正方形樣方。（3）計數(shù)。計數(shù)各個樣方內(nèi)該種群的數(shù)量，做好記錄。（4）計算種群密度。計算各樣方內(nèi)種群數(shù)量的平均值和標準差，這個數(shù)值就可以作為該種群的群密度的估計值（單位為株 / m2）。2昆蟲種群密度的測定方法（1）選擇樣方。選擇一塊幾十至幾百m2的野外隔離空地，如菜田或草坪。（2）取樣。從地塊邊上某一點出發(fā)，由一名操作者手拿捕蟲網(wǎng)按蛇形取樣法左右掃網(wǎng)捕蟲，分類到目，記錄數(shù)目，最后處死昆蟲。每走一遍捕得的昆蟲總數(shù)即為一次捕獲數(shù)。（3）重復取樣。每間隔5分鐘，按原取樣路線，以相同掃網(wǎng)次數(shù)進行捕蟲，記錄數(shù)目。當捕獲數(shù)量呈連續(xù)下降趨勢時，即可以停止。（4）計數(shù)。把上述每次捕獲數(shù)填入下表，并計算捕獲積累數(shù)。捕獲次數(shù)每次捕獲數(shù)（y）捕獲積累數(shù)（x）123···（5）作圖。以捕獲積累數(shù)為x軸，每次捕獲數(shù)為y軸，根據(jù)上述數(shù)據(jù)描點作直線向右延伸跟x軸交點即為種群估計數(shù)。（6）測算。測量田塊面積，種群大小除以面積即為種群平均密度。二、測量水污染DO值的方法水是生物的生存條件，水體潔凈程度如何，關系生物的生存和發(fā)展。水污染的因素很多，溶解氧（DO）是衡量其污染程度的重要指標之一，也是維護水體生態(tài)平衡的關鍵因素。溶解氧含量越低，有機物污染愈嚴重，水的質(zhì)量愈差。測定DO值的方法一般采用碘量法。1溶解氧（DO）測定的原理水中溶解氧的測定，首先在水樣中加入硫酸錳（MnSO4）及堿性碘化鉀溶液使之生成氫氧化錳Mn(OH)2沉淀。此時Mn(OH)2性質(zhì)極不穩(wěn)定，迅速與水中溶解氧化合生成錳酸錳（MnMnO3）。然后再加入濃硫酸使已化合的溶解氧（以MnMnO3的形式存在）與溶液中所加入的碘化鉀發(fā)生反應而析出碘。溶解氧越多，析出的碘也越多，溶液的顏色也就越深。用移液管取一定量反應完畢的水樣，以淀粉做指示劑，用硫代硫酸鈉溶液滴定碘含量（碘量與溶解氧量成比例關系），計算出水樣溶解氧的含量。2碘量法的測定步驟（1）水樣采集。用250mL磨口瓶（具磨口塞）取樣。將虹吸管插入瓶底，使瓶內(nèi)空氣從底部由水替換出來，當水逐漸滿時將虹吸管上提，水注滿后讓溶解水溢出一部分，蓋緊瓶塞，準備定氧。（2）定氧。取下瓶塞，用吸管插入瓶內(nèi)液面以下，加入1mL硫酸錳溶液，再按此法加入1mL堿性碘化鉀溶液，蓋緊瓶塞，把水樣瓶顛倒3次，使瓶內(nèi)沉淀物均勻再靜置使之下沉，待沉淀物下降至半途，再混合一次，靜置數(shù)分鐘使沉淀物重新下降至半途。用吸液管沿瓶口加入1mL濃硫酸，蓋緊瓶塞，顛倒混合靜置5min。（3）滴定。取固定氧的水樣品50mL，置于三角瓶內(nèi)，用0.01N硫代硫酸鈉滴定，至變成淡黃色時，加入數(shù)滴淀粉溶液，繼續(xù)滴定至藍色剛褪去為止，記錄用量。（4）計算。依下式計算水中溶解氧量：O2（mg / L）V1×0.01×16/2000×1000×1000式中：V1為硫代硫酸鈉用量的體積。三、空氣中塵埃污染的測定方法大氣是指圍繞著地球周圍的混合氣體，通常稱為大氣圈，又稱大氣環(huán)境，是自然環(huán)境的組成要素之一，是一切生物賴以生存的物質(zhì)基礎。大氣污染物種類繁多，以下只介紹空氣中塵埃污染的測定方法：用兩塊載玻片夾著一張方格紙，再用橡皮筋緊扎兩玻片（見下圖）。在玻片的一面，涂上一薄層凡士林（盡量涂得薄而勻）。同樣的裝置準備4套，把其中3套分別放到校園內(nèi)不同的地方，另一套放在培養(yǎng)皿內(nèi)，蓋好作為對照。24小時后取回玻片，用高倍解剖鏡觀察，并把結果填入表內(nèi)。測定塵埃微粒污染放置地點平均一小方格內(nèi)約有微粒數(shù)通過在高倍解剖鏡下觀察到的載玻片上粘有的塵埃微粒數(shù)，便可進行不同地點空氣中塵埃污染狀況的比較。四、生態(tài)考察技術1選好生態(tài)考察點（1）選點標準：非生物因素和生物因素、生物對環(huán)境的適應等要適于考察活動；各種類型的生態(tài)系統(tǒng)相距較近，便于考察和記載；最好選擇具有對比性的點作為考察對象。（2）生態(tài)考察點的確定。按選點標準確定某個生態(tài)系統(tǒng)的考察點后，可以幾個人分為一組，每組根據(jù)考察內(nèi)容選擇一個典型的考察點，進行考察。2確定重點考察樣方，點面結合每組在生態(tài)考察點上，劃定3m210m2的范圍作重點考察樣方，仔細按要求調(diào)查，其他地點作一般性考察。3考察時的記錄考察時要認真記錄考察時間、地點、天氣、生態(tài)系統(tǒng)類型、生態(tài)環(huán)境和動植物類群的特點（動物包括：種類、體色、形態(tài)特征、運動方式、捕食方法、逃避敵害、繁殖行為、棲息巢穴、筑巢材料和方式、活動時間等；植物包括：種類、分布、數(shù)量、生態(tài)特征、生態(tài)環(huán)境等）。4填寫生態(tài)考察結果表在考察過程中，要及時整理原始材料，將所考察的生態(tài)環(huán)境和動植物情況，分別填入預先設計的生態(tài)考察結果表中。5繪制地形圖或動植物群落分布圖考察結束后，要將考察的有些生態(tài)系統(tǒng)（如湖泊生態(tài)系統(tǒng)、森林生態(tài)系統(tǒng)）繪制成剖面草圖，并在草圖中標明動植物群落的各個層次，如森林生態(tài)系統(tǒng)可分為喬木層、灌木層、草本層等。另外，也可繪制某一生態(tài)系統(tǒng)的生物群落分布圖。6搜集有關樣品，制作標本各考察組根據(jù)分析問題的需要，在考察地點可搜集土樣或水樣；同時在考察的生物群落中，選擇一些有代表性的動植物作成標本。7總結生態(tài)考察結果，寫出考察報告。第八節(jié)  動植物分類技術【知識概要】一、二歧檢索表的編制和使用方法1分類檢索表的編制原則分類檢索表是以區(qū)分生物為目的編制的表。目前，常用的是二歧分類檢索表。這種檢索表把同一類別的動植物，根據(jù)一對或幾對相對性狀的區(qū)別，分成相對應的兩個分支。接著，再根據(jù)另一對或幾對相對性狀，把上面的每個分支再分成相對應的兩個分支，好像二歧式分枝一樣，如此，逐級排列下去，直到編制出包括全部生物類群的分類檢索表。2檢索表的類型（1）定距式檢索表  這種形式也叫退格式檢索表。在編排時每兩個相對應的分支的開頭，都編在離左端同等距離的地方，每一個分支的下面，相對應的兩個分支的開頭，比原分支向右移一個字格，這樣編排下去，直到編制的終點為止。例如，定距式植物界分門檢索表：1植物體無根、莖、葉的分化，無胚。2植物體不為藻類和菌類所組成的共生體。   3植物體內(nèi)有葉綠素和其他色素，為自養(yǎng)生活方式藻類植物門   3植物體內(nèi)無葉綠素和其他色素，為異養(yǎng)生活方式菌類植物門2植物體為藻類和菌類所組成的共生體地衣植物門1植物體有根、莖、葉的分化，有胚。   4植物體有莖、葉而無真根苔蔡植物門4植物體有莖、葉面有真根 5產(chǎn)生孢子蕨類植物門       5產(chǎn)生種子種子植物門（2）平行式檢索表  這種形式也叫雙項式檢索表，每一項兩個相對性狀的敘述內(nèi)容都寫在相鄰的兩行中，兩兩平行；數(shù)字號碼均寫在左側第一格中。例如，平行式植物界分門檢索表：1植物體無根、莖、葉的分化，無胚21植物體有根、莖、葉的分化，有胚42由藻類和菌類所組成的共生體地衣植物門2非藻類和菌類所組成的共生體菌類植物門3植物體有葉綠素或其他色素，為自養(yǎng)生活方式藻類植物門3植物體無葉綠素或其他色素，為異養(yǎng)生活方式菌類植物門4植物體有莖、葉，而無真根苔蘚植物門4植物體有莖、葉，而有真根55產(chǎn)生孢子蕨類植物門5產(chǎn)生種子種子植物門3檢索表的使用方法當遇到一種不知名的植物或動物時，應當根據(jù)動植物的形態(tài)特征，按檢索表的順序，逐一尋找該動植物所處的分類地位。首先確定是屬于哪個門、哪個綱和目的動植物，然后再繼續(xù)查其分科、分屬以及分種的動植物檢索表。在運用動植物檢索表時，應該詳細觀察或解剖動植物標本，了解各種器官按檢索表一項一項的仔細查對。對于完全符合的項目，繼續(xù)往下查找，直至檢索到終點為止。二、怎樣編制簡單的二歧檢索表在編制檢索表時，首先將所要編制在檢索中的植物或動物，進行全面細致地研究，而后對其各種形態(tài)特征進行比較分析，找出各種形態(tài)的相對性狀（注意一定要選擇醒目特征），然后再根據(jù)所擬采用的檢索表形式，按先后順序，分清主次，逐項排列起來加以敘述，并在各項文字描述之前用數(shù)字編排。最后到檢索出某一等級的名稱時，應寫出具體名稱（科名、屬名和種名）。在名稱之前與文字描述之間要用“”連接。例如，在被子植物這一大類群中，有些胚是兩片子葉，有些胚只是一片子葉，于是可以根據(jù)這一對立特征及其他一些特征將被子植物分為二大類。按平行式排列編出檢索表：1胚有兩片子葉；葉片多具網(wǎng)狀脈；花各部分的基數(shù)常是5或4雙子葉植物綱1胚有一片子葉；葉片多具平行脈；花各部分的基數(shù)常是3單子葉植物綱三、昆蟲綱常見目的分類鑒定方法當采到一只昆蟲進行分類鑒定時，首先要仔細觀察它是否具有昆蟲綱的特征：如成蟲身體分頭、胸、腹三部分；頭部有觸角一對、復眼一對，口器一個；胸部有分節(jié)足3對，翅2對（或1對或全缺）。在確認該昆蟲是屬于昆蟲綱動物后，再按昆蟲的翅、觸角、口器、足及變態(tài)類型和特點，逐項查昆蟲綱成蟲分自檢索表，確定該昆蟲的分類地位，屬于什么目的昆蟲。四、有花植物常見科的分類鑒定方法1花公式與花圖式有花植物常以花和果實的結構為分類依據(jù)。（1）花公式的編寫方法  花公式和花程式是把花的形態(tài)結構用符號書寫成類似數(shù)學方程式的表示方法。一般花公式可以表明花各部分的組成，數(shù)目、排列、位置，以及它們彼此間的關系。花公式的書寫方法；把花的各部分用一定的字母來代表，通常用K代表花萼（Kelch），用C代表花冠（Corolla），用A代表雄蕊群（Androeciurn），用G代表雌蕊群（Gynoecium），用P代表花被（Perianth）?；ǜ鞑糠值臄?shù)目可用數(shù)字來表示，如該部分缺少時就用“0”表示，數(shù)目很多就用“”來表示，并把它們寫于代表各部分字母的右下角處。如果某部分在一輪以上時就用“”來表示，如果某一部分其個體相互連合就用“（ ）”表示。子房的位置可以在雌蕊的字母下邊加一道橫線表示上位子房（ ），在上面加一道橫線表示下位子房（ ），上下各加一道橫錢表示半下位子房（ ）。同時在心皮數(shù)目的后面用“：”號隔開的數(shù)字表示子房室的數(shù)目。輻射對稱花（整齊花）用“*”表示；兩側對稱花（不整齊花）用“”表示；表示雌花，表示雄花， 表示兩性花，書寫在花程式的前邊。例如：百合花：*P33，A33，G（33）  表示百合花為輻射對稱花，花被兩輪，每輪3瓣，雄蕊兩輪，每輪3個，雌蕊3個，心皮合生，3室，子房上位。豌豆花：K（5），C5，A（9）1，G（11）  表示豌豆花為不整齊花（兩側對稱花），萼片5個連合，5個花瓣離生，雄蕊10個，9個連合，雌蕊一心皮，一室，子房上位。柳：K0，C0A2；，K0，C0，G（21）  柳樹的雌花和雄花都缺少花被，雄花的雄蕊兩枚，雌花的雌蕊合生，兩個心皮，一室，子房上位。（2）花圖式的繪制方法  把花的各部分用橫切面的簡圖表示其數(shù)目、離合、排列等（見下圖）。用一黑圈表示花著生的花軸，用空心的弧線表示苞片，帶有線條的弧線表示花萼。由于花草的中脈明顯，故弧線的中央部分向外隆起突出。實心的弧線表示花冠，雌蕊和雄蕊就用子房或花藥的切面形狀表示。并注意各部分的位置分離或連合。A百合科的花與花圖式；B豆科的花與花圖式被子植物常見科的分類鑒定方法對被子植物進行分類鑒定，一般以花和果實的形態(tài)特點為依據(jù)。例如，單子葉植物綱3個科的分科檢索：l胚有一片子葉；葉片多具平行脈；花各部分的基數(shù)常是3  2花的外面有外稃、內(nèi)稃各一片；果實是穎果禾本科  2花的外面無外稃和內(nèi)稃；果實不是穎果    3下位子房；花序下面有一個膜質(zhì)的總苞石蒜科    3上位子房；花序下面一般無膜質(zhì)的總苞百合科注此表系被子植物分科檢索表的一部分。第十三章  生物實驗的基本技術第一節(jié)  細胞學實驗技術【解題指導】例1  用顯微鏡觀察洋蔥根尖細胞的有絲分裂，要看清各時期細胞內(nèi)染色體的變化情況，目鏡、物鏡的合理搭配應該是     A  目鏡（24X）、物鏡（10X，N·A0.25）B  目鏡（ 5X）、物鏡（40X，N·A0.65）C  目鏡（10X）、物鏡（40X，N·A0.65）D  目鏡（24X）、物鏡（40X，N·A0.65）析  此題屬鏡像亮度問題。鏡像亮度與物鏡鏡口率（N·A）平方成正比，與總放大倍數(shù)成反比。由此，在總放大倍數(shù)相同情況下，要使物像亮度增加，應該使用高鏡口率（N·A）的物鏡與低倍目鏡配合，根據(jù)這一原理應選擇C。例2  在觀察顯微鏡時，經(jīng)常遇到以下5種現(xiàn)象：（1