實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)詳解和總結(jié)

實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù),目錄,實(shí)時(shí)定量PCR基本原理 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果,實(shí)時(shí)定量PCR基本原理,實(shí)時(shí)定量PCR的定義 實(shí)時(shí)定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,定量PCR技術(shù)：利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，最終精確的對(duì)起始模板的定量分析,實(shí)時(shí)定量PCR的定義,定量PCR三個(gè)基本概念,擴(kuò)增曲線,指數(shù)增長(zhǎng)期,平臺(tái)期,線性增長(zhǎng)期,背景期,閾值與C(t)值,閾值：是循環(huán)開始315個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍，設(shè)定在擴(kuò)增曲線指數(shù)增長(zhǎng)期 C(t)值：熒光信號(hào)（擴(kuò)增產(chǎn)物）到達(dá)閾值時(shí)所經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù),定量PCR的數(shù)學(xué)原理,理想的PCR反應(yīng)： Xn=X02n 非理想的PCR反應(yīng)： Xn=X0(1+Ex)n 方程式兩邊同時(shí)取對(duì)數(shù)得: log Xn=log (X0 (1+Ex)n) 整理方程式得: log X0= (- log(1+Ex) )n+ log Xn 將C(t)和達(dá)到C(t)值時(shí)終產(chǎn)物的量Xc(t)帶入上式得： log X0= (- log(1+Ex) ) C(t)+ log Xc(t) 初始濃度的對(duì)數(shù)與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系,n：擴(kuò)增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù) Xn：第n次循環(huán)后的產(chǎn)物量 X0：初始模板量 Ex：擴(kuò)增效率,初始模板量越多，C(t)值越小 C(t)與初始模板濃度的對(duì)數(shù)值成線性關(guān)系,實(shí)時(shí)定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,定量原理,濃度的對(duì)數(shù)值與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系，根據(jù)樣品擴(kuò)增達(dá)到域值的循環(huán)數(shù)（Ct值）就可分析樣品中起始模板量,定量PCR的實(shí)驗(yàn)步驟,標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA的提取 QPCR探針和引物的設(shè)計(jì) 陽性克隆質(zhì)粒的構(gòu)建 熒光定量PCR反應(yīng) 定量標(biāo)準(zhǔn)曲線 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 靈敏性實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)材料,