《DNA的粗提取與鑒定》課件(新人教版選修1)

當(dāng) 氯 化 鈉 的 物 質(zhì) 的 量 濃 度 為 2 mol L時(shí) ， DNA的 溶 解 度 最大 ， 濃 度 為 0 14 mol L時(shí) ，DNA的 溶 解 度 最 低 。 利 用 這 一原 理 ， 可 以 使 DNA在 鹽 溶 液 中溶 解 或 析 出如 何 通 過(guò) 控 制 NaCl溶 液 的 濃 度 使 DNA在鹽 溶 液 中 溶 解 或 析 出 ？ 3、 合 適 的 材 料 ：原 因 ： 一 是 雞 血 細(xì) 胞 核 的 DNA含 量 豐 富 ， 材 料 易 得 ； 二 是 雞 血 細(xì) 胞 極 易 吸 水 漲 破 。 2、 植 物 細(xì) 胞 植 物 細(xì) 胞 需 要 先用 一 定 的 洗 滌 劑 和食 鹽 溶 解 細(xì) 胞 膜 實(shí) 例 ： 提 取 洋 蔥DNA時(shí) ， 在 切 碎 的 洋蔥 中 加 入 一 定 的 洗 滌劑 和 食 鹽 ， 進(jìn) 行 充 分的 攪 拌 和 研 磨 ， 過(guò) 濾后 收 集 研 磨 液 討 論 ： 如 果 研 磨 不 充 分 ， 會(huì) 對(duì)實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 產(chǎn) 生 怎 樣 的 影 響 ？具 體 做 法 ： 10mL雞 血 20mL蒸 餾 水 同方 向 攪 拌 3層 尼 龍 布 過(guò) 濾 濾 液 為 什 么 反 復(fù)地 溶 解 與 析出 DNA， 能 夠去 除 雜 質(zhì)方 案 一 、 在 濾 液 中 加 入 NaCl， 使 NaCl溶 液 濃 度為 2mol/L， 過(guò) 濾 除 去 不 溶 的 雜 質(zhì) ， 再 加 入 蒸 餾水 ， 調(diào) 節(jié) NaCl溶 液 濃 度 為 0.14mol/L， 析 出DNA， 過(guò) 濾 除 去 溶 液 中 的 雜 質(zhì) ， 再 用 2mol/L的NaCl溶 液 溶 解 DNA。 方 案 二 、 直 接 在 濾 液 中 加 入 嫩 肉 粉 ， 反 應(yīng) 10 15分 鐘 。方 案 三 、 將 濾 液 放 在 60 750C的 恒 溫 水 浴 箱 中 保 溫 10 15分 鐘 。為 了 純 化 提 取 的 DNA需 要 將 濾 液 作 進(jìn) 一 步 處 理討 論 ： 此 步 驟 獲 得 的 濾 液 中 可 能 含 有哪 些 細(xì) 胞 成 分 ？ 具 體 做 法 :方 案 一 ： 30mL濾 液 35gNaCl同 方 向 攪 拌 ，DNA溶 解 加 入 蒸 餾 水 DNA析 出 過(guò) 濾 得 到 過(guò)濾 物 放 到 2mol/LNaCl溶 液 中 溶 解 DNA-NaCl溶 解 液方 案 二 ： 30mL濾 液 嫩 肉 粉 （ 木 瓜 蛋 白 酶 ） 靜 置 10 15分 鐘 DNA濾 液方 案 三 ： 30mL濾 液 60 75 處 理 過(guò) 濾 獲 得DNA濾 液 在 沸 水 中 加 熱 的 目 的 ： 加 快 顏 色 反 應(yīng) 的 速 率沸 水 加 熱 ： 說(shuō) 明 DNA對(duì) 高 溫 具 有 較 強(qiáng) 的 耐 受 性 1 、 以 血 液 為 實(shí) 驗(yàn) 材 料 時(shí) ， 每 1 0 0 ml血 液 中 需 要 加 入 3 g檸 檬 酸 鈉 ， 防 止血 液 凝 固 。2 、 加 入 洗 滌 劑 后 ， 動(dòng) 作 要 輕 緩 、 柔和 ， 否 則 容 易 產(chǎn) 生 大 量 的 泡 沫 ， 不利 于 后 續(xù) 步 驟 的 操 作 。 加 入 酒 精 和玻 璃 棒 攪 拌 時(shí) ， 動(dòng) 作 要 輕 緩 ， 以 免加 劇 DNA分 子 的 斷 裂 ， 導(dǎo) 致 DNA分子 不 能 形 成 絮 狀 沉 淀 。3 、 二 苯 胺 試 劑 要 現(xiàn) 配 現(xiàn) 用 ， 否 則 會(huì)影 響 鑒 定 的 效 果 。 制 備 雞 血 細(xì) 胞 液 加 檸 檬 酸 鈉 ， 靜 置 或 離 心破 碎 細(xì) 胞 ， 釋 放 DNA 加 蒸 餾 水 ， 同 一 方 向 攪 拌過(guò) 濾 ， 除 去 細(xì) 胞 壁 、 細(xì) 胞 膜 等 。溶 解 核 內(nèi) DNA加 入 NaCl至 2mol/L， 同 一 方 向 緩 慢 攪 拌DNA析 出 加 蒸 餾 水 至 0.14mol/L， 過(guò) 濾 ， 在 溶 解 到 2mol/L 溶 液 中除 去 細(xì) 胞 質(zhì) 中 的 大 部 分 物 質(zhì) 。DNA初 步 純 化 與 等 體 積 95 冷 卻 酒 精 混 合 ， 析 出 白 色 絲 狀 物除 去 核 蛋 白 、 RNA、 多 糖 等 。DNA鑒 定 二 苯 胺 ， 沸 水 浴 ， 呈 現(xiàn) 藍(lán) 色 2.實(shí) 驗(yàn) 中 NaCl的 物 質(zhì) 的 量 濃 度 為 2 mol L和0.14 mol L對(duì) DNA有 何 影 響 ?1.在 DNA的 粗 提 取 實(shí) 驗(yàn) 過(guò) 程 中 ， 兩 次 向 燒 杯中 加 入 蒸 餾 水 的 作 用 是 ( )。A.稀 釋 血 液 、 沖 洗 樣 品B.使 血 細(xì) 胞 破 裂 、 降 低 NaCl濃 度 使 DNA析 出C.使 血 細(xì) 胞 破 裂 、 增 大 DNA溶 解 量 D.使 血 細(xì) 胞 破 裂 、 提 取 含 雜 質(zhì) 較 少 的 DNA答 ： B答 ： 前 者 是 溶 解 DNA， 后 者 是 使 DNA析 出 3.DNA遇 二 苯 胺 (沸 水 浴 )會(huì) 染 成 ( ) A.磚 紅 色 B.橘 黃 色 C.紫 色 D.藍(lán) 色4.提 取 雞 血 中 的 DNA時(shí) ， 為 什 么 要 除 去 血 液中 的 上 清 液 ?答 ： DNA的 提 取 ， 關(guān) 鍵 是 對(duì) 雜 質(zhì) 的 去 除 ， 由 于上 清 液 是 血 液 中 的 血 漿 部 分 ， 不 含 DNA， 所 以要 除 去 上 清 液 (含 有 蛋 白 質(zhì) )。答 ： D