蟾蜍離體坐骨神經(jīng)–腓腸肌標(biāo)本制備.ppt

蟾蜍離體坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,Sciatic-gastrocnemiusPreparationofToad,蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似之處，而且其離體組織的生活條件比較簡單，易于控制和掌握，來源也較豐富，因此在生理學(xué)實驗，常用蛙或蟾蜍的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本來觀察神經(jīng)肌肉的興奮性、刺激與反應(yīng)的規(guī)律及肌肉收縮的特點等。制備具有正常興奮收縮功能的蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本是生理學(xué)實驗的基本操作技術(shù)之一。,【目的要求】,1.學(xué)習(xí)蛙類動物單毀髓和雙毀髓的方法。2.掌握坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備方法。,【基本原理】,兩棲類動物生存環(huán)境較簡單，離體組織或器官所要求的條件也較簡單。坐骨神經(jīng)和腓腸肌屬于可興奮組織，把它們置于人工配制的任氏液中，其興奮性在幾個小時內(nèi)保持不變。若給坐骨神經(jīng)一個適宜的刺激，可在神經(jīng)和肌肉上產(chǎn)生一個可傳導(dǎo)的動作電位，肉眼可以看到一次肌肉的收縮和舒張，表明神經(jīng)和肌肉興奮了一次。,【動物和器材】,蟾蜍或蛙；任氏液；常規(guī)手術(shù)器械；毀髓針、鋅銅弓、解剖盤、玻璃分針、培養(yǎng)皿、燒杯、滴管、蛙板、蛙釘?shù)取?【步驟】,雙毀髓剝制后肢標(biāo)本分離兩后肢分離坐骨神經(jīng),分離股骨游離腓腸肌檢驗標(biāo)本,1、雙毀髓,左手握蟾蜍，背部向上。用食指按壓其頭部前端，拇指壓住軀干的背部，使頭向前俯；右手持毀髓針，由兩眼之間中線向后方劃觸，觸及兩耳后腺之間的凹陷處即是枕骨大孔的位置。將毀髓針由凹陷處垂直刺入枕骨大孔（進(jìn)針深度約2mm，有脫空感即到達(dá)椎管），然后針尖向前刺入顱腔，在顱腔內(nèi)攪動，以毀腦組織。再將毀髓針退至枕骨大孔，針尖轉(zhuǎn)向后方，與脊柱平行刺入椎管，以搗毀脊髓。脊髓徹底搗毀時，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后癱軟，此時的動物為雙毀髓動物（pithedtoad）。,2、剝制后肢標(biāo)本,剪除軀干上部及內(nèi)臟：左手持手術(shù)鑷提起兩前肢之間背部的皮膚，右手持手術(shù)剪橫向剪斷皮膚，然后往后肢方向撕剝皮膚。用金冠剪在顱骨后方剪斷脊柱。左手握住蟾蜍下肢，大拇指抵住脊柱尾骨，右手用粗剪刀沿脊柱兩側(cè)（避開坐骨神經(jīng)）剪開腹壁。此時軀干上部及內(nèi)臟即全部下垂。剪除全部軀干上部及內(nèi)臟組織，棄于燒杯內(nèi)。,剝皮：避開神經(jīng)，左手持鑷子夾住脊柱，右手捏住皮膚邊緣，向下牽拉剝離皮膚。拉至大腿時，如阻力較大，可先剝下一側(cè)，再剝另一側(cè)。將全部皮膚剝除后，將標(biāo)本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。然后洗凈雙手和用過的全部手術(shù)器械，再進(jìn)行下列步驟。,3、分離兩后肢,將去皮的后肢腹面向上置于解剖盤上，右手持金冠剪縱向剪開脊柱，再剪開恥骨聯(lián)合，使兩后肢完全分離。,4、分離坐骨神經(jīng),將一側(cè)后肢的脊柱端腹面向上，用大頭針將標(biāo)本背位固定于蛙板上。用玻璃分針沿脊神經(jīng)向后分離坐骨神經(jīng)。股部沿腓腸肌正前方的股二頭肌和半膜肌之間的裂縫，縱向分離暴露坐骨神經(jīng)的大腿部分，直至分離至腘窩脛神經(jīng)分叉處。剪斷蓋在坐骨神經(jīng)上方的梨狀肌，完全暴露坐骨神經(jīng)，剪去支配腓腸肌之外的分支，再剪去脊柱及肌肉，只保留坐骨神經(jīng)發(fā)出部位的一小塊脊柱骨。將已游離的坐骨神經(jīng)搭在腓腸肌上。,5、分離股骨,沿膝關(guān)節(jié)剪除并刮凈股骨周圍的肌肉，保留股骨的后2/3，剪斷股骨。注意：勿剪斷坐骨神經(jīng)。,6、游離腓腸肌,在腓腸肌跟腱下穿線并結(jié)扎，提起結(jié)扎線，剪斷肌腱與脛腓骨的聯(lián)系，游離腓腸肌，剪去膝關(guān)節(jié)下部的后肢，保留腓腸肌與股骨的聯(lián)系，制備出完整的坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本。標(biāo)本應(yīng)包括：坐骨神經(jīng)、腓腸肌、股骨頭和一段脊柱骨四部分。,7、檢驗標(biāo)本,將制備好的標(biāo)本浸泡到任氏液中5-10min，待其功能穩(wěn)定后，用任氏液沾濕的鋅銅弓的兩極接觸神經(jīng)，如腓腸肌迅速發(fā)生收縮，則標(biāo)本機(jī)能正常。依次用溫?zé)岬牟ＡО艉褪雏}的接觸和洗脫檢驗肌肉收縮的變化。,【注意事項】,1）雙毀髓時應(yīng)注意捻動探針并使蟾蜍頭部前俯，防止耳后腺分泌物射入實驗者眼內(nèi)，如被射入，應(yīng)立即用生理鹽水沖洗眼睛。2）標(biāo)本制備過程中應(yīng)經(jīng)常滴加任氏液，防止標(biāo)本干燥，以保持正常生理活性。3）避免污染、過度牽拉或用器械夾傷坐骨神經(jīng)和腓腸肌。,思考與討論,（1）用鋅銅弓刺激坐骨神經(jīng)如何引起腓腸肌收縮？（2）如何保持離體標(biāo)本的機(jī)能正常？（3）剝?nèi)テつw的后肢標(biāo)本能用自來水沖洗嗎？,探索性問題,1該標(biāo)本可以進(jìn)行哪些實驗研究？試設(shè)計實驗內(nèi)容。2你認(rèn)為該標(biāo)本的制作方法有哪些需要改進(jìn)的地方？請說出你的想法。,