《DNA的粗提取與鑒定》活動(dòng)單
優(yōu)選精品文檔歡迎下載選用DNA的粗提取和鑒定知識(shí)要點(diǎn):1.DNA的物理化學(xué)性質(zhì),尤其是DNA的溶解性;2.二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。一、DNA的粗提取的原理思考1:DNA存在于真核生物細(xì)胞的哪些部位?思考2:提取生物大分子的一般思路是什么?1、DNA的性質(zhì):DNA和蛋白質(zhì)的溶解性、對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性在NaCl溶液中的溶解度對(duì)蛋白酶的耐受性對(duì)高溫的耐受性對(duì)洗滌劑的耐受性DNA蛋白質(zhì)溶解度DNA粗提取的原理有些哪些?i、DNA在mol/LNaCl溶液中溶解度最小ii、DNA不溶于溶液,而蛋白質(zhì)等能夠溶解2、DNA鑒定的原理:在的條件下,DNA遇會(huì)被染成。二、DNA粗提取的主要步驟:1、材料選擇:適于作實(shí)驗(yàn)材的材料:選用的生物材料;如雞(紅)血,其適宜作為實(shí)驗(yàn)材料的原因:雞血(紅)細(xì)胞核的DNA含量豐富,材料易得;雞血細(xì)胞極易吸水脹破。哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞呢?2、主要實(shí)驗(yàn)步驟(以雞血紅細(xì)胞為例):方法:將510mL雞血細(xì)胞液加入20mL中;用玻棒同方1*向攪拌5min;用34紗布過濾,以除去顆粒較大的雜質(zhì)過濾;:破碎細(xì)胞,釋放J西徉;,收集°i*CNA.(格物質(zhì)?.*:目的:破壞細(xì)胞,釋放核物質(zhì)I注意:攪拌不能用力過大,以防止打碎DNA分子;方法:向?yàn)V液中加入2倍體積的mol/LNaCl溶液,攪拌1min;:溶解細(xì)胞核;過濾獲?。簝?nèi)DNAX目的:使與DNA結(jié)合的解聚,釋放出;DNA溶解于高溶液N"NaCl溶液中、注意:按同一方向攪拌方法:沿?zé)谙驗(yàn)V液中緩慢加入蒸儲(chǔ)水,并輕輕按同一方向攪拌,使DNA析 DNA :析出:出,直到;可以在玻棒上收集到黏稠物(或過濾或離心收集黏稠物)目的:降低NaCl溶液濃度達(dá)到mol/L左右,使DNA析出k注意:加入的蒸儲(chǔ)水不能過多,使NaCl溶液濃度過低,DN取會(huì)尸方法:向20mL2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物,并按同一方向攪拌3min,使DNA充分溶解;過濾,收集濾液;向?yàn)V液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的95%乙醇,并用玻棒按同一方向緩慢、均勻地?cái)嚢?,在玻棒上收集白色絲狀物(DNA)L原理:DNA不溶于中,而蛋白質(zhì)能溶于史二歸納:本實(shí)驗(yàn)中幾次過濾?過濾的目的是什么?過濾一:過濾二:過濾三:本實(shí)驗(yàn)中幾次加入蒸儲(chǔ)水的目的各是什么?第一次:向雞血細(xì)胞液中加入蒸儲(chǔ)水,目的:第二次:向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸儲(chǔ)水,目的:拓展:1、以菜花為材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),如何獲得核物質(zhì)?取材、剪碎一加入洗滌劑、食鹽一研磨、過濾加洗滌劑的目的:加入食鹽的目的:2、分析教材中方案一、二、三的原理。萬案一:萬案一:方案二:3、探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對(duì)DNA粗提取量的影響(說說實(shí)驗(yàn)思路)三、DNA的鑒定:1、方法:取甲、乙兩支試管,并向其中加入5mL(等量)的2mol/LNaCl溶液;向甲試管中加入粗提取的DNA,并攪拌使DNA溶解;向兩支試管中各加入4mL(等量)二苯胺試劑,混勻,沸水中加熱5min,待試管冷卻后,比較兩支試管的顏色(藍(lán)色)變化。2、注意點(diǎn):實(shí)驗(yàn)中需要對(duì)照,目的:證明四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià):是否提取到DNA?觀察提取的DNA顏色:如果不是白色絲狀物,說明DNA中的雜質(zhì)較多;二苯胺鑒定:出現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功,如果不呈現(xiàn)藍(lán)色,可能所提取的DNA含量低,或是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯(cuò)誤,需要重新制備。2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色?實(shí)驗(yàn)提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。3、影響絲狀物總量的因素有哪些?實(shí)驗(yàn)材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時(shí)的NaCl溶液濃度、實(shí)驗(yàn)方法、攪拌方法(攪拌不當(dāng)可能破壞DNA)五、案例:(快速閱讀、理解步驟原理)以菜花為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNA的粗提取【實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備】將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24h【提取DNA的具體步驟】1、取材稱取30g菜花,去梗取花,切碎。2、研磨將碎菜花放入研缽中,倒入10mL研磨液,充分研磨10min。教材中建議采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑,使植物細(xì)胞膜破碎,釋放DNA。學(xué)生可以設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn),比較哪一種方法可以提取到純度更高的DNA。一般實(shí)驗(yàn)室提取高純度的DNA都采用一種陽離子去污劑一十六烷三甲基澳化俊分離緩沖液,使細(xì)胞膜破碎,同時(shí)將DNA與植物中多糖等雜質(zhì)分開,再用氯仿一異丙醇混合液(體積比為24:1)抽提去除雜質(zhì)蛋白,得到高純度的DNA。3、過濾在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液過濾到燒杯中(有條件的學(xué)校可將濾液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心,用1000r/min的轉(zhuǎn)速,離心25min,取上清液放入燒杯中)。在4c冰箱中放置幾分鐘后,再取上清液。4、沉淀將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%的預(yù)冷乙醇溶液中,并用玻璃棒緩緩、輕輕地?cái)嚢枞芤海úAО舨灰辈宓綗撞浚?。沉?5min后,可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn),將絮狀物纏繞在玻璃棒上。六、訓(xùn)練題:1 .在DNA粗提取的過程中,兩次向燒杯中加入蒸儲(chǔ)水的作用分別是A.稀釋血液;沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂;降低氯化鈉的濃度C.使血細(xì)胞破裂;增大DNA的溶解度D.使血細(xì)胞破裂;沖洗樣品2 .下列實(shí)驗(yàn)中所用試劑錯(cuò)誤的是A.在觀察植物細(xì)胞有絲分裂實(shí)驗(yàn)中,使用醋酸洋紅溶液使染色體著色B.在提取葉綠體色素實(shí)驗(yàn)中,使用丙酮提取色素C.在DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中,使用氯化鈉溶液析出DNAD.在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中,使用蘇丹出染液鑒定蛋白質(zhì)3 .NaCl的物質(zhì)量為多少mol/L時(shí),DNA的溶解度最小A.0.12B.0.13C,0.14D,0.154 .在提取的細(xì)胞核物質(zhì)的溶液中,加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是A.溶解雜質(zhì)B.溶解蛋白質(zhì)C.析出DNAD.溶解DNA5 .從細(xì)胞核中提取DNA所用的提取溶液是A.NaCl溶液B.酒精C.蒸儲(chǔ)水D.檸檬酸鈉6 .提取含雜質(zhì)較少的DNA所用的溶液A.NaCl溶液B.冷卻90%的酒精C.加熱95%的酒精D.冷卻95%的酒精7 .DNA遇二苯胺(沸水浴)時(shí),會(huì)染成A.磚紅色B.紅色C.紫色D,藍(lán)色8 .可以鑒定DNA的物質(zhì)是A.斐林試劑B.95%的酒精C.甲基綠溶液D.二苯胺溶液9 .破譯生物基因組DNA的遺傳信息或進(jìn)行基因操作,首先要提取細(xì)胞核DNA。下列不適宜彳乍為DNA提取的實(shí)驗(yàn)材料是A.雞血細(xì)胞B.蛙的紅細(xì)胞C.人的成熟紅細(xì)胞D.菜花10 .(多選)下表是關(guān)于DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中所使用的材料、操作及其作用的表述.正確的是試齊操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸儲(chǔ)水與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)胞形狀C蒸儲(chǔ)水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后DNA的NaCl中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)11 .(多選)下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法不正確的是A.洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜,同時(shí)也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B.在探究洗滌劑對(duì)植物細(xì)胞DNA提取的影響實(shí)驗(yàn)中,需要控制的變量是洗滌劑和植物細(xì)胞C.常溫下,DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色D.將濾液放在6075c的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘能去除濾液中的雜質(zhì),其原理是利用了DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同12 .如圖所示是關(guān)于“DNA的粗提取和物理性狀觀察”實(shí)驗(yàn):(1)實(shí)驗(yàn)材料選用雞血球液,而不用雞全血,主要原因是雞血球液中含有較高含量的。(2)在圖A所示的實(shí)驗(yàn)步驟中加蒸儲(chǔ)水的目的是,通過圖B所示的步驟取得濾液,再在溶液;圖中燕中加入2mol/LNaCl溶液的目的是C所示實(shí)驗(yàn)步驟中加蒸儲(chǔ)水的目的是DNA ,可滴加成O(3)為鑒定實(shí)驗(yàn)所得絲狀物主要成分是果絲狀物被染優(yōu)選精品文檔歡迎下載選用