《DNA的粗提取與鑒定》活動(dòng)單

優(yōu)選精品文檔歡迎下載選用DNA的粗提取和鑒定知識(shí)要點(diǎn)：1.DNA的物理化學(xué)性質(zhì)，尤其是DNA的溶解性;2.二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。一、DNA的粗提取的原理思考1:DNA存在于真核生物細(xì)胞的哪些部位？思考2:提取生物大分子的一般思路是什么？1、DNA的性質(zhì):DNA和蛋白質(zhì)的溶解性、對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性在NaCl溶液中的溶解度對(duì)蛋白酶的耐受性對(duì)高溫的耐受性對(duì)洗滌劑的耐受性DNA蛋白質(zhì)溶解度DNA粗提取的原理有些哪些？i、DNA在mol/LNaCl溶液中溶解度最小ii、DNA不溶于溶液，而蛋白質(zhì)等能夠溶解2、DNA鑒定的原理：在的條件下，DNA遇會(huì)被染成。二、DNA粗提取的主要步驟：1、材料選擇：適于作實(shí)驗(yàn)材的材料：選用的生物材料；如雞（紅）血，其適宜作為實(shí)驗(yàn)材料的原因：雞血（紅）細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；雞血細(xì)胞極易吸水脹破。哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞呢？2、主要實(shí)驗(yàn)步驟（以雞血紅細(xì)胞為例）：方法：將510mL雞血細(xì)胞液加入20mL中；用玻棒同方1*向攪拌5min;用34紗布過濾，以除去顆粒較大的雜質(zhì)過濾；:破碎細(xì)胞，釋放J西徉；,收集°i*CNA.（格物質(zhì)？.*:目的：破壞細(xì)胞，釋放核物質(zhì)I注意：攪拌不能用力過大，以防止打碎DNA分子；方法：向?yàn)V液中加入2倍體積的mol/LNaCl溶液，攪拌1min;：溶解細(xì)胞核;過濾獲?。簝?nèi)DNAX目的：使與DNA結(jié)合的解聚，釋放出;DNA溶解于高溶液N"NaCl溶液中、注意：按同一方向攪拌方法：沿?zé)谙驗(yàn)V液中緩慢加入蒸儲(chǔ)水，并輕輕按同一方向攪拌，使DNA析 DNA :析出：出，直到;可以在玻棒上收集到黏稠物（或過濾或離心收集黏稠物）目的：降低NaCl溶液濃度達(dá)到mol/L左右，使DNA析出k注意：加入的蒸儲(chǔ)水不能過多，使NaCl溶液濃度過低，DN取會(huì)尸方法：向20mL2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物，并按同一方向攪拌3min,使DNA充分溶解；過濾，收集濾液；向?yàn)V液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的95%乙醇，并用玻棒按同一方向緩慢、均勻地?cái)嚢?，在玻棒上收集白色絲狀物（DNA）L原理：DNA不溶于中，而蛋白質(zhì)能溶于史二歸納：本實(shí)驗(yàn)中幾次過濾？過濾的目的是什么？過濾一：過濾二：過濾三：本實(shí)驗(yàn)中幾次加入蒸儲(chǔ)水的目的各是什么？第一次：向雞血細(xì)胞液中加入蒸儲(chǔ)水，目的：第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸儲(chǔ)水，目的:拓展：1、以菜花為材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，如何獲得核物質(zhì)？取材、剪碎一加入洗滌劑、食鹽一研磨、過濾加洗滌劑的目的：加入食鹽的目的：2、分析教材中方案一、二、三的原理。萬案一：萬案一：方案二：3、探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對(duì)DNA粗提取量的影響（說說實(shí)驗(yàn)思路）三、DNA的鑒定：1、方法：取甲、乙兩支試管，并向其中加入5mL（等量）的2mol/LNaCl溶液；向甲試管中加入粗提取的DNA,并攪拌使DNA溶解；向兩支試管中各加入4mL（等量）二苯胺試劑，混勻，沸水中加熱5min,待試管冷卻后，比較兩支試管的顏色（藍(lán)色）變化。2、注意點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)中需要對(duì)照，目的：證明四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)：是否提取到DNA?觀察提取的DNA顏色：如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定：出現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯(cuò)誤，需要重新制備。2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色？實(shí)驗(yàn)提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。3、影響絲狀物總量的因素有哪些？實(shí)驗(yàn)材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時(shí)的NaCl溶液濃度、實(shí)驗(yàn)方法、攪拌方法（攪拌不當(dāng)可能破壞DNA）五、案例：（快速閱讀、理解步驟原理）以菜花為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNA的粗提取【實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備】將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24h【提取DNA的具體步驟】1、取材稱取30g菜花，去梗取花，切碎。2、研磨將碎菜花放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。教材中建議采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑，使植物細(xì)胞膜破碎，釋放DNA。學(xué)生可以設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，比較哪一種方法可以提取到純度更高的DNA。一般實(shí)驗(yàn)室提取高純度的DNA都采用一種陽離子去污劑一十六烷三甲基澳化俊分離緩沖液，使細(xì)胞膜破碎，同時(shí)將DNA與植物中多糖等雜質(zhì)分開，再用氯仿一異丙醇混合液（體積比為24：1）抽提去除雜質(zhì)蛋白，得到高純度的DNA。3、過濾在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾到燒杯中（有條件的學(xué)校可將濾液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心，用1000r/min的轉(zhuǎn)速，離心25min,取上清液放入燒杯中）。在4c冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。4、沉淀將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%的預(yù)冷乙醇溶液中，并用玻璃棒緩緩、輕輕地?cái)嚢枞芤海úＡО舨灰辈宓綗撞浚?。沉?5min后，可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，將絮狀物纏繞在玻璃棒上。六、訓(xùn)練題：1 .在DNA粗提取的過程中，兩次向燒杯中加入蒸儲(chǔ)水的作用分別是A.稀釋血液；沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂；降低氯化鈉的濃度C.使血細(xì)胞破裂；增大DNA的溶解度D.使血細(xì)胞破裂；沖洗樣品2 .下列實(shí)驗(yàn)中所用試劑錯(cuò)誤的是A.在觀察植物細(xì)胞有絲分裂實(shí)驗(yàn)中，使用醋酸洋紅溶液使染色體著色B.在提取葉綠體色素實(shí)驗(yàn)中，使用丙酮提取色素C.在DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中，使用氯化鈉溶液析出DNAD.在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，使用蘇丹出染液鑒定蛋白質(zhì)3 .NaCl的物質(zhì)量為多少mol/L時(shí)，DNA的溶解度最小A.0.12B.0.13C,0.14D,0.154 .在提取的細(xì)胞核物質(zhì)的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是A.溶解雜質(zhì)B.溶解蛋白質(zhì)C.析出DNAD.溶解DNA5 .從細(xì)胞核中提取DNA所用的提取溶液是A.NaCl溶液B.酒精C.蒸儲(chǔ)水D.檸檬酸鈉6 .提取含雜質(zhì)較少的DNA所用的溶液A.NaCl溶液B.冷卻90%的酒精C.加熱95%的酒精D.冷卻95%的酒精7 .DNA遇二苯胺(沸水浴)時(shí)，會(huì)染成A.磚紅色B.紅色C.紫色D,藍(lán)色8 .可以鑒定DNA的物質(zhì)是A.斐林試劑B.95%的酒精C.甲基綠溶液D.二苯胺溶液9 .破譯生物基因組DNA的遺傳信息或進(jìn)行基因操作，首先要提取細(xì)胞核DNA。下列不適宜彳乍為DNA提取的實(shí)驗(yàn)材料是A.雞血細(xì)胞B.蛙的紅細(xì)胞C.人的成熟紅細(xì)胞D.菜花10 .(多選)下表是關(guān)于DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中所使用的材料、操作及其作用的表述.正確的是試齊操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸儲(chǔ)水與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)胞形狀C蒸儲(chǔ)水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后DNA的NaCl中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)11 .(多選)下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法不正確的是A.洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜，同時(shí)也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B.在探究洗滌劑對(duì)植物細(xì)胞DNA提取的影響實(shí)驗(yàn)中，需要控制的變量是洗滌劑和植物細(xì)胞C.常溫下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色D.將濾液放在6075c的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘能去除濾液中的雜質(zhì)，其原理是利用了DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同12 .如圖所示是關(guān)于“DNA的粗提取和物理性狀觀察”實(shí)驗(yàn):(1)實(shí)驗(yàn)材料選用雞血球液，而不用雞全血，主要原因是雞血球液中含有較高含量的。(2)在圖A所示的實(shí)驗(yàn)步驟中加蒸儲(chǔ)水的目的是，通過圖B所示的步驟取得濾液，再在溶液;圖中燕中加入2mol/LNaCl溶液的目的是C所示實(shí)驗(yàn)步驟中加蒸儲(chǔ)水的目的是DNA ,可滴加成O(3)為鑒定實(shí)驗(yàn)所得絲狀物主要成分是果絲狀物被染優(yōu)選精品文檔歡迎下載選用