5.1《DNA的粗提取與鑒定》活動單李百勝

DNA的粗提取和鑒定知識要點：1. DNA的物理化學(xué)性質(zhì)，尤其是DNA的溶解性;2二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。、DNA的粗提取的原理思考1 : DNA存在于真核生物細(xì)胞的哪些部位？思考2 :提取生物大分子的一般思路是什么？1、DNA的性質(zhì):在NaCI溶液中的溶解度對蛋白酶的耐受性對高溫的耐受性對洗滌劑的 耐受性DNA蛋白質(zhì)DNA和蛋白質(zhì)的溶解性、對酶、高溫和洗滌劑的耐受性DNA粗提取的原理有些哪些？i、 DNA 在 mol/L NaCI溶液中溶解度最小ii、DNA不溶于溶液，而蛋白質(zhì)等能夠溶解2、DNA鑒定的原理：在的條件下，DNA遇會被染成cTSmol/L 度、DNA粗提取的主要步驟：1 '材料選擇：適于作實驗材的材料：選用 的生物材料；如雞（紅）血，其適宜作為實驗材料的原因：雞血（紅）細(xì)胞核的易 DNA含量豐富，材料易得；雞血細(xì)胞極 吸水脹破。哺乳動物紅細(xì)胞呢？2、主要實驗步驟（以雞血紅細(xì)胞為例）：廠方法：將510mL雞血細(xì)胞液 加入20mL中；用玻棒同方向攪拌5min ;用34紗布過濾，以除去顆粒較大的雜質(zhì)過濾；收破碎細(xì)胞，釋放Q方法：向濾液中加入2倍體積的 工詫” *濾獲取；溶解細(xì)胞核二1內(nèi) DNAK ；mol/LNaCI 溶液，攪拌1min ；過目的：使與DNA結(jié)合的_ J 高溶液NaCI溶液中解聚，釋放出;DNA溶解于注意：按同一方向攪拌廠方法：沿?zé)谙驗V液中緩慢加入蒸憎水，并輕輕按同一方向攪拌，使DNA析出, DNA析出直到;可以在玻棒上收集到黏稠物(或過濾或離心收集黏稠物)目的：降低NaCI溶液濃度達(dá)到mol/L 皿V左右'使DNA析出3min，使.注意：加入的蒸幗水不能過多'使NaCI溶液濃度過低，DNA又會:DNA的:初步純化：DNA充分溶解；過濾，收集濾液；向濾液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的95% 乙醇，并用玻棒按冋一方向緩慢、均勻地攪拌，在玻棒上收集白色絲狀物 (DNA )廣方法：向20mL 2mol/LNaCI溶液中加入黏稠物并按同一方向攪拌I原理：DNA不溶于中，而蛋白質(zhì)能溶于歸納：本實驗中幾次過濾？過濾的目的是什么？中O過濾一：過濾二：過濾三：本實驗中幾次加入蒸館水的目的各是什么？第一次：向雞血細(xì)胞液中加入蒸綢水，目的： 第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCI溶液中加入蒸f留水，目的：拓展：1、以菜花為材料進(jìn)行實驗時，如何獲得核物質(zhì)？取材、剪碎7加入洗滌劑、食鹽7研磨、過濾加洗滌劑的目的：加入食鹽的目的：2、分析教材中方案一、二、三的原理。方案一：方案二：方案三：3、 探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對DNA粗提取量的影響（說說實驗思路）三、DNA的鑒定：1、 方法：取甲、乙兩支試管，并向其中加入5mL （等量）的2mol/LNaCI溶液；向甲試管中加入粗提取的DNA并攪拌使DNA溶解；向兩支試管中各加入4mL （等量）二苯胺試劑，混勻，沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管的顏色（藍(lán)色）變化。2、注意點：實驗中需要對照，目的：證明四、實驗結(jié)果分析與評價1、實驗結(jié)果評價：是否提取到 DNA觀察提取的DNA顏色：如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定：出現(xiàn)藍(lán)色說 明實驗基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實驗操作中出現(xiàn)錯誤，需要重新制備。2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色？實驗提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。3、 影響絲狀物總量的因素有哪些？實驗材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時的NaCI溶液濃度、實驗方法、攪拌方法（攪拌不當(dāng)可能破壞DNA）五、案例：（快速閱讀、理解步驟原理）以菜花為實驗材料進(jìn)行【實驗材料準(zhǔn)備】將新鮮菜花和體積分 數(shù)為DNA的粗提取【提取DNA的具體步驟】95%的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24 h1、取材稱取30 g菜花，去梗取花，切碎。2、 研磨 將碎菜花放入研缽中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。教材中建議采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑，使植物細(xì)胞膜破碎，釋放學(xué)生可以設(shè)置對照實驗，比較哪一種方法可以提取到純度更高的高純度的DNA。一般實驗室提取DNA都采用一種陽離子去污劑一一十六烷三甲基澳化鞍分離緩沖液，（體積比為24 ： 1）DNA。碎，同時將DNA與植物中多糖等雜質(zhì)分開，再用氯仿一異丙醇混合液使細(xì)胞膜破抽提去除雜質(zhì)蛋白，得到高純度的DNAo（有條件的學(xué)?？蓪?5 min，取上清液放入95%的預(yù)冷乙醇溶液中，）°沉淀35 min后、可3、過濾在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾到燒杯中濾液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心，用1000 r/mi n的轉(zhuǎn)速，離心燒杯中）。在4 C冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。4、沉淀將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為并用見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，將絮狀物纏繞在玻璃棒上。八訓(xùn)練題：'在DNA粗提取的過程中，兩次向燒杯中加入蒸憎水的作用分別是A. 稀釋血液；沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂；降低氯化鈉的濃度C.使血細(xì)胞破裂；增大DNA的溶解度D .使血細(xì)胞破裂；沖洗樣品2.下列實驗中所用試劑錯誤的是A. 在觀察植物細(xì)胞有絲分裂實驗中，使用醋酸洋紅溶液使染色體著色B. 在提取葉綠體色素實驗中，使用丙酮提取色素DNAC. 在DNA的粗提取與鑒定實驗中，使用氯化鈉溶液析出3 D.在蛋白質(zhì)的鑒定實驗中，使用蘇丹川染液鑒定蛋白質(zhì)NaCI的物質(zhì)量為多少mol/L時，DNA的溶解度最小4- A. 0.12 B . 0.13C . 0.14 D . 0.15在提嫩酌姍蔽幡苗飜網(wǎng)耐閔的是A.溶解雜質(zhì)從細(xì)胞核中癩解蛋白質(zhì)C .析出DNA.溶解DNA5.A. NaCI溶液提瑕翻®OW溶液是A . NaCI溶液B .酒精C蒸憎水.檸檬酸鈉6.DNA所用的溶液B .冷卻90%的酒精.加熱95%的酒精D .冷卻95%的酒精玻璃棒緩緩、輕輕地攪拌溶液（玻璃棒不要直插到燒杯底部7.DNA遇一苯胺（沸水?。r，會染成A .磚紅色B .紅色C .紫色&可以鑒定DNA的物質(zhì)是藍(lán)色 rm i iA 斐林試劑B . 95%的酒精C .甲基綠溶液D9.破譯生苯胺溶液物基因組DNA的遺傳信息或進(jìn)行基因操作，首先要提取細(xì)胞核DNA下列不適宜作為DNA提取的實驗 材料是A .雞血細(xì)胞B .蛙的紅細(xì)胞C.人的成熟紅細(xì)胞D .菜花操作及其作用的表述.正10 .（多選）下表是尖于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料、確的是試劑操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸館水與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)胞形狀C蒸館水加入到溶解有DNA的NaCI中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后DNA的NaCI中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)門（多選）下列矢于DNA粗提取與鑒定的說法不正確的是A.溶液中的溶解度洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜，同時也能控制DNA在NaCI(I )實驗材料選用雞血球液，而不用雞全血，主要原因是雞血球(2)在圖A所示的實驗步驟中加蒸憎Tf5f島昨液懸中c所示實驗步娠(3)為鑒定實驗所得絲狀物主要成分是 溶液，結(jié)果絲B. 在探究洗滌劑對植物細(xì)胞 DNA提取的影響實驗中，需要控制的變量是洗滌劑和植物細(xì)胞C. 常溫下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色D. 將濾液放在6075 C的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘能去除濾液中的雜質(zhì)，其原理是利用了 DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同12 如圖所示是尖于“ DNA的粗提取和物理性狀觀察”實驗：液中含有較高含量的水的目的是，通過圖B所示的步驟取得濾液，再在溶液中加入2 mol/L NaCI溶液的目的是中加蒸憎水的目的是 。DNA可滴加狀物被染成 少年智則國智，少年富則國富，少年強(qiáng)則國強(qiáng)，少年獨立則國獨立，少年自由則國自由，少年進(jìn)步則國進(jìn) 步，少年勝于歐洲，則國勝于歐洲，少年雄于地球，則國雄于地球。