生物化學(xué)：實(shí)驗(yàn)一 實(shí)驗(yàn)基本操作

實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一生物化學(xué)與分子生生物化學(xué)與分子生物學(xué)基本操作物學(xué)基本操作一、實(shí)驗(yàn)課紀(jì)律一、實(shí)驗(yàn)課紀(jì)律1. 課前要預(yù)習(xí)，課前要預(yù)習(xí)，不能遲到、早退，不能遲到、早退，進(jìn)實(shí)驗(yàn)室要求穿白大進(jìn)實(shí)驗(yàn)室要求穿白大衣，不允許穿拖鞋、背心，不要攜帶食品飲料到教室，衣，不允許穿拖鞋、背心，不要攜帶食品飲料到教室，課堂上應(yīng)避免大聲喧嘩、打鬧或隨便進(jìn)出；課堂上應(yīng)避免大聲喧嘩、打鬧或隨便進(jìn)出；2. 請(qǐng)假一定要有假條，并經(jīng)年級(jí)輔導(dǎo)員簽字才有效；請(qǐng)假一定要有假條，并經(jīng)年級(jí)輔導(dǎo)員簽字才有效；3.凡凡曠課三次及以上曠課三次及以上，缺交缺交報(bào)告（報(bào)告（遲交遲交、抄襲抄襲）三次及）三次及以上者以上者，則不能參加理論課的考試，即本門課程做補(bǔ)考則不能參加理論課的考試，即本門課程做補(bǔ)考處理；處理；4. 實(shí)驗(yàn)前后要清點(diǎn)儀器，實(shí)驗(yàn)前后要清點(diǎn)儀器，損壞要照價(jià)賠償；損壞要照價(jià)賠償；5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要清洗儀器，收拾桌面，禁止實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要清洗儀器，收拾桌面，禁止向水池丟棄碎片、廢紙；向水池丟棄碎片、廢紙；6. 每周安排每周安排4人值日，值日生需經(jīng)教師檢查人值日，值日生需經(jīng)教師檢查 同意方可離開，否則按重新值日處理。同意方可離開，否則按重新值日處理。二、清點(diǎn)儀器二、清點(diǎn)儀器1. 試管架試管架 1個(gè)個(gè) 7 . 10ml量筒量筒 1個(gè)個(gè)2 . 中試管中試管 20支支 8 . 吸耳球吸耳球 1個(gè)個(gè)3 . 小試管小試管 10支支 9 . 試管夾試管夾 1個(gè)個(gè)4 . 燒杯燒杯 1個(gè)個(gè) 10 . 滴管滴管 1支支5 . 錐形瓶錐形瓶 1個(gè)個(gè) 11 . 玻璃棒玻璃棒 1支支6 . 漏斗漏斗 1個(gè)個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果（包括：（包括：原始數(shù)據(jù)或現(xiàn)象及數(shù)原始數(shù)據(jù)或現(xiàn)象及數(shù)據(jù)處理）據(jù)處理）討論討論（對(duì)原理、（對(duì)原理、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的探討，思考實(shí)驗(yàn)結(jié)果的探討，思考題的解答等題的解答等）三、實(shí)驗(yàn)報(bào)告三、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1. 實(shí)驗(yàn)名稱，實(shí)驗(yàn)原理，操作步驟實(shí)驗(yàn)名稱，實(shí)驗(yàn)原理，操作步驟四、實(shí)驗(yàn)操作四、實(shí)驗(yàn)操作（一）（一） 刻度吸量管的使用刻度吸量管的使用 ( (二二) ) 渦旋振蕩器的使用渦旋振蕩器的使用（四）（四） 分光光度計(jì)的使用（分組）分光光度計(jì)的使用（分組）（三）（三） 微量移液器的使用微量移液器的使用（一）（一） 刻度吸量管刻度吸量管1. 最大量程最好等于或稍大于取液最大量程最好等于或稍大于取液量。量。選用原則：選用原則：2. 同一試劑一系列體積時(shí)選最大者。同一試劑一系列體積時(shí)選最大者。 1.1.選用合適的吸量管（大小和選用合適的吸量管（大小和“專管專專管專用用”）, ,看清刻度的大小、順序（看清刻度的大小、順序（是是自上而下還自上而下還是自下而上，是否要吹）是自下而上，是否要吹） 2.2.讀數(shù)時(shí)吸量管要讀數(shù)時(shí)吸量管要垂直垂直，視線、凹液面底部和視線、凹液面底部和刻度刻度要在同一水平要在同一水平上上。 3.3.放液時(shí)試管或容量瓶要放液時(shí)試管或容量瓶要稍傾斜稍傾斜，吸量管尖端，吸量管尖端要要接觸接觸內(nèi)壁內(nèi)壁但但不能插入不能插入容器液體中。容器液體中。 4.4.吸取吸取粘度大粘度大的液體（如血清），放液前要的液體（如血清），放液前要擦擦干干凈吸量管凈吸量管尖部外壁尖部外壁的液體。的液體。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：（二）（二）渦旋振蕩器渦旋振蕩器一手扶振蕩器防移動(dòng)，另一手持容器一手扶振蕩器防移動(dòng)，另一手持容器45傾傾斜斜，勿將管口對(duì)著人，勿將管口對(duì)著人輕壓容器至形成旋渦，每次輕壓容器至形成旋渦，每次10秒，反復(fù)數(shù)秒，反復(fù)數(shù)次次不要突然加力，以防容器內(nèi)的液體濺出。不要突然加力，以防容器內(nèi)的液體濺出。用完關(guān)閉電源用完關(guān)閉電源（三）微量加樣器（俗稱加樣（三）微量加樣器（俗稱加樣槍槍)的使用方法的使用方法v使用方法：使用方法：2. 安裝吸嘴安裝吸嘴：將吸嘴（：將吸嘴（Tip頭）在吸液桿上套牢頭）在吸液桿上套牢 1. 設(shè)定移液量設(shè)定移液量：旋轉(zhuǎn)：旋轉(zhuǎn)“手輪手輪”，使，使“數(shù)輪數(shù)輪”顯示顯示所需值所需值 3. 吸液吸液：按壓按鈕至按壓按鈕至“第一停點(diǎn)位置第一停點(diǎn)位置”，浸入溶，浸入溶液，緩慢放松按鈕，稍停后移出液面液，緩慢放松按鈕，稍停后移出液面 4. 放液放液：按壓推動(dòng)按鈕至：按壓推動(dòng)按鈕至“第一停點(diǎn)位置第一停點(diǎn)位置”，稍，稍停再按壓至停再按壓至“第二停點(diǎn)位置第二停點(diǎn)位置”，排盡管嘴殘余液，排盡管嘴殘余液體體5. 吸嘴脫卸吸嘴脫卸:用卸吸嘴按鈕脫卸吸嘴，每次實(shí)驗(yàn)結(jié)用卸吸嘴按鈕脫卸吸嘴，每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將束后將“數(shù)輪數(shù)輪”調(diào)到其標(biāo)稱的最大值調(diào)到其標(biāo)稱的最大值注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1. 調(diào)整調(diào)整“數(shù)輪數(shù)輪”的讀數(shù)的讀數(shù)不得超出刻度范圍不得超出刻度范圍。2. 吸不同類型的溶液應(yīng)吸不同類型的溶液應(yīng)更換吸嘴更換吸嘴，以防止，以防止 試樣之間的試樣之間的交叉污染交叉污染。 3. 移液器吸液后移液器吸液后嚴(yán)禁倒置、平放嚴(yán)禁倒置、平放，以免，以免 溶液流入內(nèi)腔，損壞活塞。溶液流入內(nèi)腔，損壞活塞。 A = k Lc （ k為吸光系數(shù)；為吸光系數(shù)；L為液為液層厚度；層厚度；c為溶液的濃度）為溶液的濃度）與溶液與溶液的濃度及液層的厚度成正比。的濃度及液層的厚度成正比。vUV2100型分光光度計(jì)操作步驟：型分光光度計(jì)操作步驟：1.1.插插頭，開電源，預(yù)熱至顯示器顯示插插頭，開電源，預(yù)熱至顯示器顯示“546nm 100.0”546nm 100.0”，方可進(jìn)行測(cè)試方可進(jìn)行測(cè)試 2.2.用用鍵將測(cè)試方法設(shè)置至鍵將測(cè)試方法設(shè)置至A(A(吸光度吸光度) )狀態(tài)狀態(tài)3.3.選擇光源選擇光源W:W:鎢燈鎢燈(335-900nm)(335-900nm)；D:D:氘燈氘燈(200-334nm)(200-334nm)4.4.用用WAVELENGTHWAVELENGTH設(shè)置鍵，設(shè)置樣品波長設(shè)置鍵，設(shè)置樣品波長5 5. . 倒比色液，放比色杯，空白管放在第一個(gè)槽位中；比倒比色液，放比色杯，空白管放在第一個(gè)槽位中；比色杯的透明壁位于光路上色杯的透明壁位于光路上6 6. . 按按“0A/100%T”0A/100%T”鍵調(diào)鍵調(diào)0A/100%T0A/100%T，此時(shí)顯示器顯示的，此時(shí)顯示器顯示的“BLA”BLA”直至顯示直至顯示“0.000”0.000”為止為止7 7. . 將測(cè)定管依次推（拉）入光路，則分別得到它們的吸將測(cè)定管依次推（拉）入光路，則分別得到它們的吸光度值光度值 可用毛刷的儀器（試管、燒杯、錐可用毛刷的儀器（試管、燒杯、錐形瓶等）形瓶等） 毛刷沾洗衣粉刷洗（先內(nèi)后外）毛刷沾洗衣粉刷洗（先內(nèi)后外） 自來水沖洗自來水沖洗 蒸餾水沖洗蒸餾水沖洗23次次 倒置晾干倒置晾干五、五、普通玻璃儀器（試管、燒杯、量筒）普通玻璃儀器（試管、燒杯、量筒） 的洗滌的洗滌六、操作練習(xí)（隨機(jī)抽查）六、操作練習(xí)（隨機(jī)抽查）取取3支中試管，按下表加液：支中試管，按下表加液： 管號(hào)管號(hào) 1 2 3 K2Cr2O7 (mL) 0.40 1.20 2.00 3mmol/L 蒸餾水（蒸餾水（mL） 4.60 3.80 3.00 各管加完后，在振蕩器上振勻，用蒸餾水各管加完后，在振蕩器上振勻，用蒸餾水調(diào)零，測(cè)定各管調(diào)零，測(cè)定各管440nm吸光度吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法一：用坐標(biāo)紙手工繪制方法一：用坐標(biāo)紙手工繪制方法二：利用方法二：利用EXCEL軟件的作圖功能繪軟件的作圖功能繪 制，并可求出回歸方程及相關(guān)制，并可求出回歸方程及相關(guān) 系數(shù)系數(shù)