實驗五用大腸桿菌生長曲線的測定.ppt

大腸桿菌生長曲線的測定水 環(huán)境中微生物的測定 林親雄閻春蘭李曉華 了解光電比濁計數(shù)法的原理 學習 掌握光電比濁計數(shù)的操作方法 通過細菌數(shù)量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律 繪制生長曲線 實驗31大腸桿菌生長曲線的測定 一 實驗目的 生長曲線將少量純種單細胞微生物接種到定量的液體培養(yǎng)基中 定時取樣測定細胞數(shù)量 以培養(yǎng)時間為橫坐標 以菌數(shù)為縱坐標作圖 得到一條反映單細胞微生物在整個培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線 二 實驗原理 一個典型的生長曲線分為延緩期 對數(shù)期 穩(wěn)定期和衰亡期四個時期 微生物數(shù)量的測定方法 稀釋平板計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法最大概率法光電比濁法 稀釋平板計數(shù)法 對樣品稀釋培養(yǎng) 據(jù)形成的菌落數(shù)計數(shù) 優(yōu)點 活菌計數(shù)方法 對設備要求不高 缺點 操作復雜 顯微鏡直接計數(shù)法 使用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù) 優(yōu)點 操作簡便 計數(shù)直觀 缺點 計數(shù)結(jié)果為活細菌和死菌體的總和 最大概率法 待測菌液經(jīng)十倍系列稀釋 每稀釋度做3 5個重復 經(jīng)培養(yǎng)后 檢查細菌的生長 以有細菌生長的最后三個稀釋度的管數(shù)作數(shù)量指標 由數(shù)理統(tǒng)計表查出近似值 再乘以數(shù)量指標第一位的稀釋倍數(shù) 即為原菌液中的菌數(shù) 最大概率法 例如 某細菌在稀釋培養(yǎng)法中生長情況如下 稀釋度 10 310 410 510 610 710 8重復數(shù) 555555有菌生長管數(shù) 555410根據(jù)上述結(jié)果 數(shù)量指標為 541 查表得近似值為17 乘以第一位數(shù)的稀釋倍數(shù) 得出原始培養(yǎng)物的活菌數(shù) 17 105個 優(yōu)點 活菌計數(shù) 適用于特殊細菌 缺點 計數(shù)結(jié)果為概值 光電比濁法 光電比濁法是利用在一定的范圍內(nèi) 微生物細胞濃度與透光度成反比的原理 當細菌細胞在溶液中數(shù)量越多 濁度越大 在光電比色計中測定時所吸收的光線越多 優(yōu)點 簡便快速 適合于自動控制 缺點 測定結(jié)果受培養(yǎng)液成分影響 某些樣品樣品不適合用此法 菌種培養(yǎng)不同時段的大腸桿菌 儀器或其他用具分光光度計 比色皿等 三 實驗器材 開電源 儀器預熱20min 將波長調(diào)至600nm處 打開樣品室 將擋光體插入比色皿架 將其推或拉入光路 蓋好樣品室蓋 在TMODE下 按0 T鍵調(diào)零透射比 取出擋光體 按100 T OA鍵調(diào)100 透射比 四 實驗步驟 1 樣品測試前的調(diào)試 2 樣品測定 將參比溶液 未接種的LB液體培養(yǎng)基 以及被測溶液倒入比色皿中 打開樣品室蓋 將參比溶液放在樣品架的第一個槽位中 將被測溶液依次放入其它槽位 將參比溶液推入光路 按100 T OA鍵調(diào)滿度 按MODE 將測試方式調(diào)至吸光度方式 A 此時 顯示器顯示 0 000 將被測溶液推入光路 顯示器顯示為被測樣品的吸光值 在600nm波長下 用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對照 分別對培養(yǎng)了0 4 8 12 16和20h的大腸桿菌培養(yǎng)液 進行光電比濁測定 對于高濃度的大腸桿菌培養(yǎng)液 要用未接種的LB培養(yǎng)基進行稀釋 使其吸光值在0 1 0 65范圍內(nèi) 比色皿經(jīng)蒸餾水清洗后 必須經(jīng)待測樣品潤洗 比色皿的毛面用吸水紙擦干 而光面只能用吸水紙吸干 以免光面被劃破 比色皿之間吸光度進行比較 四 實驗結(jié)果 記錄不同大腸桿菌培養(yǎng)液的OD600值 并繪制大腸桿菌的生長曲線 五 思考題 光電比濁計數(shù)的原理是什么 這種計數(shù)法有何優(yōu)缺點 如果用活菌計數(shù)法制作生長曲線 你認為會有什么不同 兩者各有什么優(yōu)缺點 比較不同場所和不同條件下細菌的數(shù)量和類型 觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征 體會無菌操作的重要性 掌握水和環(huán)境中微生物的測定方法 檢測污染水域微生物的類型和數(shù)量 實驗67水 環(huán)境中微生物的測定 一 實驗目的 應用平板菌落計數(shù)技術(shù)測定污染水的細菌總數(shù) 由于細菌種類繁多 不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下 使所有的細菌均能生長繁殖 因此 計算出來的細菌總數(shù)僅是一種近似值 利用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基可以大致測定不同環(huán)境中存在的微生物 二 實驗原理 樣品的采取自來水取自自來水管道 橙汁購于超市 口腔 人民幣 門把手和實驗環(huán)境中的微生物 南湖水距水面10 15cm的深層水樣 培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基 儀器或其他用具滅菌培養(yǎng)皿 無菌槍頭 涂棒等 三 實驗器材 無菌操作采用10 1 10 2 10 3稀釋液涂布牛肉膏蛋白胨平板 每個稀釋度2個重復 N 乙酰葡糖胺 四 實驗步驟 1 南湖水中微生物的測定 每個培養(yǎng)皿加0 1ml稀釋液 LTA 2 口腔 人民幣和門把手微生物的測定 用棉簽分別從牙周 人民幣紙幣和門把手表面挑取微生物 然后放入裝有0 5ml無菌水的EP管中 顛倒均勻后 用移液器全部吸入牛肉膏蛋白胨平板中 涂布均勻 3 實驗室空氣中微生物的測定 將牛肉膏蛋白胨平板蓋揭開 分別置實驗臺10 20 30 40 50 60min后 蓋上皿蓋 倒置培養(yǎng) 4 自來水 橙汁中微生物的測定 取1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板 自來水用無菌三角瓶收集 四 實驗結(jié)果 計算每ml南湖水中含有微生物的數(shù)量 你所測定的環(huán)境中微生物的數(shù)量和種類 并試著分別記錄每種細菌的大小 形態(tài) 干濕 透明度 顏色以及邊緣等特征 觀測實驗結(jié)果時間 五 思考題 你所測定的南湖水的污染程度如何 通過本次實驗 在防止培養(yǎng)物的污染與防止細菌的擴散方面 你學到了什么 有什么體會 本次實驗安排 比濁法測定大腸桿菌生長曲線 倒牛肉膏蛋白胨平板12個 南湖水稀釋分離涂布 6皿 口腔 人民幣 門把手 空氣 10 20 30 40 50 60min 自來水和橙汁微生物的測定 1種 人 每組6人 本次實驗完