微生物檢驗(yàn)原始記錄(大腸菌群)

1 檢 驗(yàn) 原 始 記 錄 編號(hào) 報(bào)告類別 微生物 共 頁(yè) 項(xiàng)目 大腸菌群 coliforms 檢驗(yàn)地點(diǎn) 樣品名稱 樣品編號(hào) 樣品狀態(tài) 符合檢驗(yàn)要求 其他 環(huán)境條件 實(shí)驗(yàn)依據(jù)及步驟 GB4789 3 2016 固體和半固體樣品 稱取 25g 樣品置盛有 225ml 生理鹽水或磷酸鹽緩沖液 的無(wú)菌均質(zhì)容器內(nèi)均質(zhì) 或放入盛有 225ml 稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中拍擊式均質(zhì) 器拍打 制成為 1 10 樣品勻液 依次進(jìn)行 10 倍遞增稀釋 樣品稀釋 液體樣品 以無(wú)菌吸管吸取 25ml 樣品置盛有 225ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽 水的無(wú)菌錐形瓶 瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠 中混勻 為 1 10 樣品勻 液 樣品勻液的 ph 應(yīng)在 6 5 7 5 之間 必要時(shí)分別用 1mol lNaOH 或 1mol lHcL 調(diào) 節(jié) 取 1mL1 10 稀釋勻液沿管壁緩緩注入 9ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú) 菌試管中 注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面 振搖試管或換用一支無(wú) 菌吸管反復(fù)吹打 使其混合均勻 制成 1 100 樣品勻液 按上述操作順序做 10 倍遞增稀釋液 每稀釋一次 換用一支 1mL 滅菌吸 量管 從樣品勻液制備到樣品接種完畢 全過(guò)程不得超過(guò) 15min 初發(fā)酵試驗(yàn) 9 管法 每個(gè)樣品 選擇 3 個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液 液體樣品可以選擇原液 每個(gè)稀釋度接種 3 管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨 LST 肉湯 大腸菌群測(cè)定 如 果超過(guò) 1ml 則用雙料 LST 肉湯 36 1 培養(yǎng) 24h 2h 觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生 產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至 48 2h 產(chǎn)期進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 證實(shí)試驗(yàn) 用接種環(huán)從產(chǎn)氣的 LST 肉湯管中分別取培養(yǎng)物 1 環(huán) 移種于煌綠糖膽鹽肉湯 BGLB 管中 36 1 培養(yǎng) 48h 2h 觀察產(chǎn)氣情況 數(shù)據(jù)分析與結(jié)果 2 一 菌落計(jì)數(shù) 根據(jù)證實(shí)為大腸菌群的陽(yáng)性管數(shù) 查 MPN 檢索表 報(bào)告大腸菌群的最可能數(shù) 二 緩沖液 1 磷酸鹽緩沖液 磷酸二氫鉀 34 0g 蒸餾水 500ml 稀釋液需要 1000ml 貯存液 將 34 0g 磷酸二氫鉀溶于 500ml 蒸餾水中 用大約 175ml 的 1mol l 氫氧化鈉溶液調(diào) 節(jié) ph 至 7 2 用蒸餾水稀釋至 1000ml 后貯存冰箱 稀釋液 取貯存液 1 25ml 用蒸餾水稀釋至 1000ml 分裝于適宜容器 121 高壓滅菌 15min 2 無(wú)菌生理鹽水 氯化鈉 8 5g 蒸餾水 1000ml 將稱取好的氯化鈉溶于 1000ml 蒸餾水中 121 高壓滅菌 15min 3 PH 調(diào)節(jié)劑 1mol l 氫氧化鈉溶液 稱取 40g 氫氧化鈉溶于 1000ml 無(wú)菌蒸餾水中 1mol l HcL 溶液 移取 Hcl 90ml 用無(wú)菌蒸餾水稀釋至 1000ml 三 微生物限量采樣方案 根據(jù) GB 4789 1 2016 1 采樣方案分為二級(jí)和三級(jí)方案 二級(jí)采樣方案設(shè)有 n c m 值 三級(jí)采樣方案設(shè)有 n c m 和 M 值 n 同一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品件數(shù) c 最大可允許超出 m 值的樣品數(shù) m 微生物指標(biāo)可接受水平的限量值 M 微生物指標(biāo)的最高安全限量值 2 例 n 5 c 2 m 1cfu g M 10cfu g 即從一批產(chǎn)品中采集 5 個(gè)樣品 若 5 個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果均小于或等于 m 值 1cfu g 則這種情況是允許的 若 2 個(gè)樣品的結(jié)果 X 位于 m 值和 M 值之間 1cfu g X 10cfu g 則這種情況 也是允許的 若有 3 個(gè)及以上樣品的檢驗(yàn)結(jié)果位于 m 和 M 之間 則這種情況是不允許的 若有任一樣品的檢驗(yàn)結(jié)果大于 M 10cfu g 則這種情況也是不允許的 檢測(cè)記錄 校對(duì) 檢測(cè)日期 3 4 菌落總數(shù)檢樣原始記錄 初發(fā)酵試驗(yàn) 未產(chǎn)氣培養(yǎng) 48 2h 復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn) 接種 BGLB 管 結(jié)果 稀釋液及產(chǎn)氣管 數(shù) 稀釋液及產(chǎn)氣管 數(shù) 稀釋液及產(chǎn)氣管 數(shù) MPN 檢索表 各試樣菌 落分析 個(gè)產(chǎn)品 名稱 檢測(cè) 日期 時(shí)間 試 樣 編 號(hào) 接 種 日 期 時(shí) 間 結(jié) 果 日 期 時(shí) 間 CFU ml n 5 c 2 m 102 M 104 結(jié)論 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 5 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6