（浙江選考）2019版高考生物一輪總復(fù)習(xí) 第十單元 現(xiàn)代生物科技專題 第33講 基因工程學(xué)案

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1、第33講基因工程考試標(biāo)準(zhǔn)加試考試標(biāo)準(zhǔn)加試1.工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生a3.基因工程的應(yīng)用a2.基因工程的原理和技術(shù)b4.活動(dòng)：提出生活中的疑難問題，設(shè)計(jì)用基因工程技術(shù)解決的方案c考點(diǎn)一基因工程的含義及操作工具1基因工程的含義(1)概念：把一種生物的遺傳物質(zhì)(細(xì)胞核、染色體脫氧核糖核酸等)移到另一種生物的細(xì)胞中去，并使這種遺傳物質(zhì)所帶的遺傳信息在受體細(xì)胞中表達(dá)。(2)核心：構(gòu)建重組DNA分子。(3)理論基礎(chǔ)：DNA是生物遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的確立以及遺傳信息傳遞方式的認(rèn)定。2基因工程的基本工具思考討論1已知限制性核酸內(nèi)切酶EcoR和Sma識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為GAATTC

2、和CCCGGG，兩種限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生的末端如下：EcoR限制性核酸內(nèi)切酶和Sma限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別的堿基序列不同，切割位點(diǎn)不同(填“相同”或“不同”)，說明限制性核酸內(nèi)切酶具有專一性。2觀察下圖所示過程，回答需要的工具酶及相關(guān)問題：(1)是限制性核酸內(nèi)切酶；是DNA連接酶；二者的作用部位都是磷酸二酯鍵。(2)限制性核酸內(nèi)切酶不切割自身DNA的原因：原核生物中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾。3載體須具備的條件及其作用(連線)4限制性核酸內(nèi)切酶Mun 和限制性核酸內(nèi)切酶EcoR的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別是CAATTG和GAATTC。如圖表示四種質(zhì)粒和目的基因，其中，箭頭所

3、指部位為限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)，質(zhì)粒的陰影部分表示標(biāo)記基因。適于作為圖示目的基因載體的質(zhì)粒是下列中的哪一個(gè)？提示由圖可知，質(zhì)粒上無標(biāo)記基因，不適合作為載體；質(zhì)粒和的標(biāo)記基因上都有限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)。只有質(zhì)粒上有標(biāo)記基因，且Mun的切割位點(diǎn)不在標(biāo)記基因上。題型基因工程的操作工具1如圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，下面選項(xiàng)中能依次表示限制性核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用順序的是()A BC D答案C解析限制性核酸內(nèi)切酶可在特定位點(diǎn)對(duì)DNA分子進(jìn)行切割；DNA聚合酶在DNA分子復(fù)制時(shí)將脫氧核苷酸連接成脫氧核苷酸鏈；DNA連接酶可將限制性核酸內(nèi)切酶切開的磷酸

4、二酯鍵連接在一起；解旋酶的作用是將DNA雙鏈解開，為復(fù)制或轉(zhuǎn)錄提供模板。2(2017常州模擬)若要利用某目的基因(見圖甲)和P1噬菌體載體(見圖乙)構(gòu)建重組DNA(見圖丙)，限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)分別是Bgl (AGATCT)、EcoR (GAATTC)和Sau3A (GATC)。下列分析合理的是()A用EcoR切割目的基因和P1噬菌體載體B用Bgl和EcoR切割目的基因和P1噬菌體載體C用Bgl和Sau3A切割目的基因和P1噬菌體載體D用EcoR和Sau3A切割目的基因和P1噬菌體載體答案D解析解答本題的關(guān)鍵是要看清切割后目的基因插入的方向，只有用EcoR和Sau3A切割目的基因和P1噬

5、菌體載體，構(gòu)建的重組DNA中RNA聚合酶在插入的目的基因上的移動(dòng)方向才一定與圖丙相同。幾種易混淆酶的比較名稱功能應(yīng)用限制性核酸內(nèi)切酶特異性地切斷DNA鏈中的磷酸二酯鍵重組DNA技術(shù)和基因診斷DNA連接酶連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵基因工程DNA聚合酶連接DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵DNA復(fù)制RNA聚合酶連接RNA片段與單個(gè)核糖核苷酸之間的磷酸二酯鍵RNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶作用于磷酸二酯鍵以RNA為模板獲得DNA解旋酶使堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂DNA復(fù)制DNA水解酶使DNA分子所有磷酸二酯鍵斷裂水解DNA考點(diǎn)二基因工程的基本操作步驟、應(yīng)用及相關(guān)的設(shè)計(jì)方案1基因工程的基本操作步驟(1)

6、獲得目的基因目的基因序列已知：化學(xué)合成或PCR擴(kuò)增；目的基因序列未知：從基因文庫中獲取。(2)形成重組DNA分子(基因工程的核心)：通常用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNA，然后用DNA連接酶將目的基因和載體DNA連接在一起，形成重組DNA分子。(3)將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞常用的受體細(xì)胞：大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。導(dǎo)入方法：用氯化鈣處理大腸桿菌，可以增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性，使重組質(zhì)粒容易進(jìn)入。(4)篩選含有目的基因的受體細(xì)胞篩選原因：并不是所有的細(xì)胞都接納了重組DNA分子，因此，需篩選含目的基因的受體細(xì)胞。篩選方法：用含抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細(xì)胞，選擇

7、含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。(5)目的基因的表達(dá)目的基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)，產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)。2基因工程的應(yīng)用應(yīng)用領(lǐng)域優(yōu)點(diǎn)基因工程與遺傳育種轉(zhuǎn)基因植物所需時(shí)間短，克服了遠(yuǎn)緣親本難以親合的缺陷轉(zhuǎn)基因動(dòng)物指轉(zhuǎn)入了外源基因的動(dòng)物。優(yōu)點(diǎn)是省時(shí)、省力，并能取得一定的經(jīng)濟(jì)效益基因工程與疾病治療基因工程藥物主要有胰島素、干擾素和乙型肝炎疫苗等基因治療向目標(biāo)細(xì)胞中引入正常功能的基因，以糾正或補(bǔ)償基因的缺陷，達(dá)到治療的目的基因工程與生態(tài)環(huán)境保護(hù)開發(fā)可降解的新型塑料；改造分解石油的細(xì)菌，提高其分解石油的能力等思考討論1重組DNA分子的組成及各部分的作用(連線)2據(jù)圖選擇相關(guān)的限制性核酸內(nèi)切酶基因工程中，需使用特定的

8、限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)是GGATCC；限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)是GATC。請據(jù)圖分析：切割目的基因應(yīng)選擇限制性核酸內(nèi)切酶，切割質(zhì)粒應(yīng)選擇限制性核酸內(nèi)切酶。3完成下列填充(1)原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少。(2)轉(zhuǎn)化的實(shí)質(zhì)是把目的基因整合到受體細(xì)胞基因組中。4補(bǔ)充目的基因檢測與鑒定的方法示意圖5如圖為抗蟲棉的培育過程，請據(jù)圖回答下列問題：(1)該基因工程中的目的基因和載體分別是什么？一般情況下，為什么要用同一種限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體？提示目的基因是Bt毒蛋白基因，載體

9、是Ti質(zhì)粒。用同一種限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體，可以獲得相同的粘性末端，便于形成重組DNA分子。(2)該實(shí)例中，檢測目的基因是否表達(dá)的常見方法是什么？提示用棉葉飼喂棉鈴蟲。題型一基因工程的操作程序1(2017北京，5)為了增加菊花花色類型，研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1)，擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟环氖?)A用限制性核酸內(nèi)切酶EcoR和連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒B用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織，將C基因?qū)爰?xì)胞C在培養(yǎng)基中添加卡那霉素，篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞D用分子雜交技術(shù)檢測C基因是否整合到菊花染色體上答案C解析在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，

10、為保證目的基因與載體的連接，需要用同種限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行切割產(chǎn)生相同的粘性末端，才能通過DNA連接酶連接，圖中目的基因的兩端和啟動(dòng)子與終止子之間都有限制性核酸內(nèi)切酶EcoR的切割位點(diǎn)，選用限制性核酸內(nèi)切酶EcoR切割目的基因和載體，A項(xiàng)正確；菊花為雙子葉植物，將目的基因?qū)腚p子葉植物細(xì)胞的常用方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，B項(xiàng)正確；圖2中重組質(zhì)粒中的抗性基因?yàn)槌泵顾乜剐曰?，?yīng)該在培養(yǎng)基中添加潮霉素，篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞，C項(xiàng)錯(cuò)誤；要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，常用DNA分子雜交技術(shù)，D項(xiàng)正確。2(2017諸暨中學(xué)統(tǒng)考)科學(xué)家將外源目的基因與大腸桿菌的質(zhì)粒進(jìn)行重組，并在大腸桿菌中

11、成功表達(dá)。下圖表示構(gòu)建重組質(zhì)粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程。請據(jù)圖回答下列問題：(1)步驟和中常用的工具酶是_和_。(2)經(jīng)過和步驟后，有些質(zhì)粒上的_基因內(nèi)插入了外源目的基因，形成重組質(zhì)粒。(3)步驟是_的過程。為了促進(jìn)該過程，應(yīng)該用_處理大腸桿菌。(4)步驟是將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌接種到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基A上培養(yǎng)，目的是篩選_。能在A中生長的大腸桿菌有_種。(5)步驟是用無菌牙簽挑取A上的單個(gè)菌落，分別接種到B(含氨芐青霉素和四環(huán)素)和C(含四環(huán)素)兩個(gè)培養(yǎng)基的相同位置上。一段時(shí)間后，菌落的生長狀況如上圖所示。含有目的基因的菌落位于(填“B”或“C”)_上，請?jiān)趫D中相應(yīng)位置上圈出來。答案(

12、1)限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶(2)氨芐青霉素抗性(3)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌氯化鈣(4)含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌2(5)C如下圖所示解析(1)步驟和是將目的基因和質(zhì)粒用同種限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行切割，得到相同的粘性末端，然后用DNA連接酶將二者連接起來，形成重組質(zhì)粒。(2)質(zhì)粒上有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，根據(jù)步驟和構(gòu)建的重組質(zhì)粒的圖像可知，部分質(zhì)粒的氨芐青霉素抗性基因中插入了目的基因。(3)據(jù)題圖可知，步驟是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞大腸桿菌中；氯化鈣處理可增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性，增強(qiáng)其對(duì)重組質(zhì)粒的吸收能力。(4)由于質(zhì)粒上具有四環(huán)素抗性基因，且未被目的基因插入，因此，凡是導(dǎo)入

13、質(zhì)粒的大腸桿菌均對(duì)四環(huán)素具有抗性，可以存活，沒有導(dǎo)入質(zhì)粒的不能存活，于是可以篩選出含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌；能夠在A上生長的大腸桿菌有2種，分別是導(dǎo)入空白質(zhì)粒的大腸桿菌和導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌。(5)目的基因的插入破壞了氨芐青霉素抗性基因，因此含有目的基因的大腸桿菌無法在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基B上存活，但能在C上存活，其所在位置即為B中未長出而C中長出菌落的位置。基因工程操作中的6個(gè)易錯(cuò)點(diǎn)(1)目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的?；虮磉_(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控，所以目的基因應(yīng)插入到啟動(dòng)子與終止子之間的部位。(2)基因工程操作過程中只有第三步(將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞)沒有堿基互補(bǔ)配對(duì)現(xiàn)象。第一

14、步存在逆轉(zhuǎn)錄法獲得DNA，第二步存在粘性末端連接現(xiàn)象，第四步檢測存在分子水平雜交方法。(3)原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少。(4)一般情況下，用同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段，但有時(shí)可用兩種限制性核酸內(nèi)切酶分別切割質(zhì)粒和目的基因，這樣可避免質(zhì)粒和質(zhì)粒之間、目的基因和目的基因之間的連接。(5)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程，稱為轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化的實(shí)質(zhì)是目的基因整合到受體細(xì)胞染色體基因組中。(6)不熟悉標(biāo)記基因的種類和作用：標(biāo)記基因的作用篩選、檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常見的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因(表達(dá)產(chǎn)物為帶顏

15、色的物質(zhì))等。題型二基因工程的原理和應(yīng)用3(2017河西區(qū)一模)如圖是利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖。以下相關(guān)敘述，正確的是()A、的操作中使用了限制性核酸內(nèi)切酶和DNA聚合酶B過程利用了膜的結(jié)構(gòu)特性，顯微鏡下觀察細(xì)胞的Ti質(zhì)粒是篩選標(biāo)志之一C應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可檢測細(xì)胞中目的基因是否表達(dá)D一般情況下只要表現(xiàn)出抗蟲性狀，就表明植株發(fā)生了可遺傳變異答案D解析、的操作表示形成重組DNA分子，該過程中使用了限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，A項(xiàng)錯(cuò)誤；光學(xué)顯微鏡下無法觀察到質(zhì)粒，該基因工程可以利用個(gè)體水平進(jìn)行鑒定，即植株的葉片是否具有抗蟲效果，B項(xiàng)錯(cuò)誤；檢測細(xì)胞中目的基因是否表達(dá)需要利用抗原抗體雜交

16、技術(shù)或個(gè)體水平的檢測，C項(xiàng)錯(cuò)誤；一般情況下只要表現(xiàn)出抗蟲性狀，就表明植株發(fā)生了可遺傳變異，D項(xiàng)正確。4下列關(guān)于基因工程應(yīng)用的敘述，正確的是()A基因治療就是把缺陷基因誘變成正?；駼基因診斷的基本原理是DNA分子雜交C一種基因探針能檢測水體中的各種病毒D利用基因工程生產(chǎn)乙肝疫苗時(shí)，目的基因存在于人體B淋巴細(xì)胞的DNA中答案B解析基因治療就是向目標(biāo)細(xì)胞中引入正常功能的基因，達(dá)到治療疾病的目的，A項(xiàng)錯(cuò)誤；基因診斷又稱DNA診斷或分子診斷，通過分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)，直接檢測出分子結(jié)構(gòu)水平和表達(dá)水平是否異常，從而對(duì)疾病做出判斷，利用的原理就是DNA分子雜交，B項(xiàng)正確；基因探針是用放射性同位素(

17、或熒光分子)標(biāo)記的含有目的基因的DNA片段，一種基因探針只能檢測水體中的一種或一類病毒，C項(xiàng)錯(cuò)誤；基因工程生產(chǎn)乙肝疫苗是通過構(gòu)建含有乙肝病毒表面抗原基因的重組質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染(就是讓質(zhì)粒進(jìn)入宿主細(xì)胞)相應(yīng)的宿主細(xì)胞，如酵母菌、CHO細(xì)胞(中國倉鼠卵巢細(xì)胞，一種可以無限繁殖的細(xì)胞)，生產(chǎn)乙肝表面抗原蛋白，D項(xiàng)錯(cuò)誤?；蛟\斷與基因治療(1)基因診斷方法：DNA分子雜交法(即DNA探針法)，該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，把互補(bǔ)的雙鏈DNA解開，把單鏈的DNA小片段用同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測的DNA中的同源互補(bǔ)序列雜交，從而檢出所要查明的DNA或基因。步驟：抽取病人的組織

18、或體液作為化驗(yàn)樣品；將樣品中的DNA分離出來；用化學(xué)法或熱處理法使樣品DNA解旋；將事先制作好的DNA探針引入化驗(yàn)樣品中，這些已知的經(jīng)過標(biāo)記的探針能夠在化驗(yàn)樣品中找到互補(bǔ)鏈，并與之結(jié)合(雜交)在一起，找不到互補(bǔ)鏈的DNA探針，則可以被洗脫。這樣通過對(duì)遺留在樣品中的標(biāo)記過的DNA探針進(jìn)行基因分析，就能檢出病人所得的病。(2)基因治療原理：利用正常基因糾正或補(bǔ)償基因的缺陷，即把正?；?qū)牖颊唧w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達(dá)到治療疾病的目的，而原有缺陷基因一般不作處理。方法：有體外基因治療和體內(nèi)基因治療，體外基因治療方法療效好。如重度免疫缺陷癥的體外基因治療方法：體內(nèi)基因治療：用基因工程的

19、方法，直接向人體組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移基因。題型三設(shè)計(jì)用基因工程技術(shù)解決的方案5(2017舟山中學(xué)高三期中)人組織纖溶酶原激活物(htPA)是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得。流程如下：(1)為獲取更多的卵(母)細(xì)胞，要對(duì)供體母羊注射_，使其超數(shù)排卵。采集的精子需要經(jīng)過_，才具備受精能力。(2)在htPA基因與質(zhì)粒構(gòu)建重組DNA分子的過程中，下列哪項(xiàng)是必需的()A限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶BDNA連接酶和DNA聚合酶CDNA聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶D限制性核酸內(nèi)切酶和DNA聚合酶(3)轉(zhuǎn)基因羊的培育過程中，常用受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞，主要原因是_。為了獲得母羊，胚胎移植前需對(duì)已

20、成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行_。利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個(gè)轉(zhuǎn)基因個(gè)體，這些個(gè)體的基因型_。(4)若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到_，說明目的基因成功表達(dá)。答案(1)促性腺激素獲能處理(2)A(3)受精卵的全能性易于表達(dá)性別鑒定相同(4)htPA(或人組織纖溶酶原激活物)解析(1)為獲取更多的卵(母)細(xì)胞，要對(duì)供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵。采集的精子需要經(jīng)過獲能處理，才具備受精能力。(2)在htPA基因與質(zhì)粒構(gòu)建重組DNA分子的過程中，需要用到的工具酶為限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。(3)轉(zhuǎn)基因羊的培育過程中，常用受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞，主要原因是受精卵的全能性易于表

21、達(dá)。為了獲得母羊，胚胎移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定。利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個(gè)轉(zhuǎn)基因個(gè)體，這些個(gè)體的基因型相同。(4)若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA(或人組織纖溶酶原激活物)，說明目的基因成功表達(dá)。模擬演練1(2017臺(tái)州模擬)下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是()A目的基因和受體細(xì)胞均可來自動(dòng)物、植物或微生物B限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素?zé)o生物活性D載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)答案D解析目的基因來源于含有人們所需要性狀的一切生物，可以是動(dòng)物、植物，也可以是真

22、菌、細(xì)菌等；基因工程中一般要使用同種限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行切割，以獲得具有相同粘性末端的目的基因和載體，在DNA連接酶的作用下，將目的基因和載體連接起來，形成重組DNA分子；人的胰島素原基因可以在大腸桿菌內(nèi)表達(dá)，但是由于大腸桿菌是原核生物，沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器，合成的胰島素不具有胰島素的功能，即沒有生物活性；標(biāo)記基因是為了檢測并篩選含重組DNA的細(xì)胞，但對(duì)于目的基因的表達(dá)沒有影響。2(2017浙江模擬)科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中，在醫(yī)學(xué)研究及相關(guān)疾病治療方面都具有重要意義。下列有

23、關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因?yàn)檫@種細(xì)胞具有全能性B采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)C人的生長激素基因能在小鼠細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用D將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行核移植(克隆)，可以獲得多個(gè)具有外源基因的后代答案B解析選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因?yàn)檫@種細(xì)胞具有全能性，而且全能性最高，A項(xiàng)正確；采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因，但不能檢測外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)，B項(xiàng)錯(cuò)誤；人的生長激素基因能在小鼠細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用，C項(xiàng)正確；將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行

24、核移植(克隆)，可以獲得多個(gè)具有外源基因的后代，D項(xiàng)正確。3蘇云金桿菌(Bt)能產(chǎn)生具有殺蟲能力的毒素蛋白。圖1是轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因植物的重組DNA形成過程示意圖；圖2是毒素蛋白基因進(jìn)入植物細(xì)胞后發(fā)生的兩種生物大分子合成的過程，據(jù)圖回答下列問題：(1)將圖1的DNA用Hind、BamH完全酶切后，反應(yīng)管中有_種DNA片段。過程需要用到_酶。(2)假設(shè)圖1中質(zhì)粒原來BamH識(shí)別位點(diǎn)的堿基序列變?yōu)榱肆硪环N限制酶Bcl識(shí)別位點(diǎn)的堿基序列，現(xiàn)用Bcl和Hind切割質(zhì)粒，則該圖1中的DNA右側(cè)還能選擇BamH進(jìn)行切割，并能獲得所需重組質(zhì)粒嗎？并請說明理由_。(3)若上述假設(shè)成立，并成功形成重組質(zhì)粒，則重

25、組質(zhì)粒()A既能被BamH也能被Hind切開B能被BamH但不能被Hind切開C既不能被BamH也不能被Hind切開D能被Hind但不能被BamH切開(4)圖2中鏈?zhǔn)莀。不同組織細(xì)胞的相同DNA進(jìn)行過程時(shí)啟用的起始點(diǎn)_(填“都相同”、“都不同”或“不完全相同”)，其原因是_ _。(5)要想檢測導(dǎo)入的Bt毒素蛋白基因是否表達(dá)，在分子水平上可用_法進(jìn)行檢測，如果出現(xiàn)雜交帶，說明目的基因已經(jīng)表達(dá)蛋白質(zhì)產(chǎn)品，轉(zhuǎn)基因植物培育成功。答案(1)4DNA連接(2)能，切割后露出的粘性末端相同(3)D(4)mRNA不完全相同不同組織細(xì)胞中基因會(huì)進(jìn)行選擇性表達(dá)(5)抗原抗體雜交解析(1)由于圖1中的DNA上有Hi

26、nd和BamH的3個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，所以用這兩種酶完全酶切后，形成4種DNA片段。(2)Bcl與BamH酶切割目的基因后形成的粘性末端一樣，故該圖中的DNA右側(cè)還能選擇BamH進(jìn)行切割，并能獲得所需重組質(zhì)粒。(3)根據(jù)酶切位點(diǎn)和識(shí)別的堿基序列可知，重組質(zhì)粒只能被Hind但不能被BamH切開。(4)從圖乙可知，鏈?zhǔn)且訢NA的一條鏈作為模板進(jìn)行轉(zhuǎn)錄形成的信使RNA分子，不同組織細(xì)胞的相同DNA在轉(zhuǎn)錄時(shí)，如果是相同基因一般轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)相同，不同的基因轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)不同。(5)檢測目的基因是否在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，分子水平上的檢測是向分泌物中加入抗體，通過抗原抗體特異性結(jié)合形成雜交帶加以檢測，如果能形成，說明表達(dá)了，如果

27、不能形成，說明沒有表達(dá)。4(2017浙大附中全真模擬)我國科學(xué)家張道遠(yuǎn)先生通過從耐旱灌木白花檉柳中克隆得到TSOD基因，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)化到棉花中，獲得了具備更強(qiáng)抗旱性的T4代轉(zhuǎn)基因棉花株系。下圖為轉(zhuǎn)基因抗旱棉花的培育過程示意圖，請據(jù)圖回答：(1)過程表示用_擴(kuò)增目的基因的方法。過程用到的工具酶有_。步驟一般用_處理農(nóng)桿菌，使其易吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。(2)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞除步驟所示的方法外，還可采用_。如果受體細(xì)胞是動(dòng)物的受精卵，則一般采用的方法是_。(3)外植體培養(yǎng)成為試管苗的過程采用了_技術(shù)，利用了_的原理，步驟表示_。(4)為了確定抗旱轉(zhuǎn)基因棉花是否培育成功，可先用放射性同

28、位素標(biāo)記的_作探針進(jìn)行分子水平鑒定，再_進(jìn)行個(gè)體水平鑒定棉花植株的抗旱性。答案(1)PCR技術(shù)限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶Ca2(或CaCl2)(2)花粉管通道法(基因槍法)顯微注射法(3)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞的全能性脫分化、再分化(4)抗旱基因(TSOD基因、目的基因)移栽到干旱土地中5(2016浙江4月選考)兔肝細(xì)胞中的基因E編碼代謝甲醛的酶，擬利用基因工程技術(shù)將基因E轉(zhuǎn)入矮牽牛中，以提高矮牽牛對(duì)甲醛的代謝能力。請回答下列問題：(1)從兔肝細(xì)胞中提取mRNA，在_酶的作用下形成互補(bǔ)的DNA，然后以此DNA為模板擴(kuò)增得到基因E。在相關(guān)酶的作用下，將基因E與Ti質(zhì)粒連接在一起，形成_，再導(dǎo)入

29、用氯化鈣處理的_中，侵染矮牽牛葉片。將被侵染的葉片除菌后進(jìn)行培養(yǎng)，最終得到轉(zhuǎn)基因矮牽牛。其中培養(yǎng)過程正確的是_。A葉片在含適宜濃度生長素的培養(yǎng)基上分化形成愈傷組織B愈傷組織在含細(xì)胞分裂素和生長素配比較高的培養(yǎng)基上形成芽C再生的芽在細(xì)胞分裂素含量高的培養(yǎng)基上生根D愈傷組織在含適宜濃度植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上脫分化形成再生植株(2)取轉(zhuǎn)基因矮牽牛葉片，放入含MS液體培養(yǎng)基和適量濃度甲醛且密封的試管中。將試管置于_上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)。一段時(shí)間后測定培養(yǎng)基中甲醛的含量，以判斷基因E是否在轉(zhuǎn)基因矮牽牛中正常表達(dá)。培養(yǎng)過程中液體培養(yǎng)的作用：一是提供營養(yǎng)；二是_，從而使葉片保持正常的形態(tài)。答案(1)逆轉(zhuǎn)錄

30、重組DNA分子農(nóng)桿菌B(2)搖床維持滲透壓解析(1)以mRNA為模板合成DNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄過程，這一過程需要在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下進(jìn)行。獲得目的基因后，需在限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的作用下，將目的基因與載體(Ti質(zhì)粒)連接形成重組質(zhì)粒(重組DNA分子)，再將其導(dǎo)入受體細(xì)胞。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，先將重組DNA分子導(dǎo)入經(jīng)氯化鈣處理的農(nóng)桿菌中，再用導(dǎo)入目的基因的農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，最終實(shí)現(xiàn)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞內(nèi)的目的。導(dǎo)入目的基因的植物細(xì)胞經(jīng)組織培養(yǎng)過程形成轉(zhuǎn)基因植株。組織培養(yǎng)過程中，葉片在含適宜濃度的生長素和細(xì)胞分裂素的培養(yǎng)基上脫分化形成愈傷組織，然后在含細(xì)胞分裂素和生長

31、素配比較高的培養(yǎng)基上形成芽，繼而在生長素含量高的培養(yǎng)基上生根，最后形成完整的植株，愈傷組織形成植株的過程中發(fā)生細(xì)胞的分化。(2)植物組織培養(yǎng)過程中，將愈傷組織等細(xì)胞置于搖床上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)，形成多個(gè)分散的細(xì)胞。培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液一方面為植物細(xì)胞提供營養(yǎng)，另一面維持一定的滲透壓，從而使葉片保持正常的形態(tài)。課時(shí)訓(xùn)練一、選擇題1下列關(guān)于基因工程的敘述中，正確的是()A目的基因的核苷酸序列都是已知的B接受外源基因的轉(zhuǎn)基因植物成為一個(gè)新物種C可從人肝臟細(xì)胞中提取胰島素原的mRNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得人胰島素原基因DDNA連接酶、限制性核酸內(nèi)切酶及載體是構(gòu)建重組DNA分子必需的工具答案D解析目的基因的核苷酸序列

32、不一定是已知的，A項(xiàng)錯(cuò)誤；接受外源基因的轉(zhuǎn)基因植物仍然是原物種，不是新物種，B項(xiàng)錯(cuò)誤；由于基因的選擇性表達(dá)，人肝臟細(xì)胞中胰島素基因不表達(dá)，因此沒有胰島素原的mRNA，C項(xiàng)錯(cuò)誤；DNA連接酶、限制性核酸內(nèi)切酶及載體是構(gòu)建重組DNA分子必需的工具，D項(xiàng)正確。2(2017余杭區(qū)校級(jí)月考)下列關(guān)于基因工程的說法，正確的是()A限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別某種特定的核苷酸序列，并在特定的切割位點(diǎn)上將相應(yīng)堿基之間的氫鍵斷開，從而使DNA分子切斷BDNA連接酶、限制性核酸內(nèi)切酶及載體是構(gòu)建重組質(zhì)粒必需的工具酶C下面是兩種限制性核酸內(nèi)切酶所識(shí)別的DNA分子序列和切割位點(diǎn)(表示切割位點(diǎn)、切出的斷面為粘性末端)：限制性

33、核酸內(nèi)切酶1：GATC，限制性核酸內(nèi)切酶2：GGATCC，這兩種限制性核酸內(nèi)切酶切出的粘性末端是相同的D在人工合成目的基因的過程中，根據(jù)蛋白質(zhì)中氨基酸序列合成的目的基因堿基序列及控制的性狀與生物體內(nèi)原有的基因及性狀是相同的答案C解析限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別某種特定的核苷酸序列，并能將特定位點(diǎn)之間的磷酸二酯鍵斷開，A項(xiàng)錯(cuò)誤；載體不是工具酶，B項(xiàng)錯(cuò)誤；限制性核酸內(nèi)切酶1(GATC)和限制性核酸內(nèi)切酶2(GGATCC)切出的粘性末端相同，都是GATC，C項(xiàng)正確；由于密碼子的簡并性，在人工合成目的基因的過程中，根據(jù)蛋白質(zhì)中氨基酸序列合成的目的基因堿基序列與生物體內(nèi)原有基因的堿基序列不一定相同，D項(xiàng)錯(cuò)誤。

34、3北極比目魚中有抗凍基因，其編碼的抗凍蛋白具有11個(gè)氨基酸的重復(fù)序列，該序列重復(fù)次數(shù)越多，抗凍能力越強(qiáng)。如圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過程示意圖，有關(guān)敘述正確的是()A過程獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚基因組測序B將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白C過程構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因，需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其是否完全表達(dá)答案B解析將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連形成能表達(dá)的新基因，合成的蛋白質(zhì)為新的蛋白質(zhì)，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白，故選項(xiàng)B正確；過程是利用逆轉(zhuǎn)錄法合成目的基因，由于沒有

35、非編碼區(qū)和編碼區(qū)中的內(nèi)含子，所以不能用于比目魚基因組測序；用作載體的質(zhì)粒，必須具有標(biāo)記基因才能便于檢測和篩選；應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可檢測轉(zhuǎn)基因抗凍番茄中目的基因的存在和轉(zhuǎn)錄，但不能檢測目的基因是否成功表達(dá)，故選項(xiàng)A、C、D錯(cuò)誤。4天然的玫瑰沒有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B，而開藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B。現(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰，下列操作正確的是()A提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA，再對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增B利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因BC利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞中D將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并

36、轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞答案A解析如果所需要的目的基因的序列是完全未知的，往往就需要構(gòu)建基因文庫，然后從基因文庫中獲取目的基因，而在基因序列已知的情況下，獲取目的基因通常用逆轉(zhuǎn)錄法或利用化學(xué)方法直接人工合成，因此，A項(xiàng)正確、B項(xiàng)錯(cuò)誤；將目的基因與質(zhì)粒連接起來的酶是DNA連接酶，而非DNA聚合酶，C項(xiàng)錯(cuò)誤；目的基因必須與載體結(jié)合后導(dǎo)入受體細(xì)胞才能夠自我復(fù)制和表達(dá)，且導(dǎo)入植物細(xì)胞常用的載體是農(nóng)桿菌，而不是大腸桿菌，D項(xiàng)錯(cuò)誤。二、非選擇題5(2017嘉興模擬)我國目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是一種叫做乙肝表面抗原的蛋白質(zhì)(S蛋白)，對(duì)應(yīng)的基因?yàn)閟基因。請回答：(1)在構(gòu)建重組DNA分子時(shí)

37、，要用限制性核酸內(nèi)切酶處理_，并用_酶使兩者結(jié)合。將重組DNA分子導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞，經(jīng)篩選得到工程細(xì)胞。(2)在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，工程細(xì)胞在生長過程中有_現(xiàn)象，需要定期使用_酶處理，以便于分瓶培養(yǎng)。(3)為提高工程細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，下列措施中不需采用的是_。A取單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng) B加入胰島素C二氧化碳培養(yǎng)箱 D加入動(dòng)物血清(4)由于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)較難，成本較高，近些年科學(xué)家們又發(fā)明了“乳腺生物發(fā)生器”，進(jìn)而從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的乳汁中提取所需產(chǎn)品。在這種技術(shù)中，作為重組DNA分子受體細(xì)胞的一般是_。答案(1)s基因和載體DNADNA連接(2)接觸抑制胰蛋白(3)A(4)受精卵解析(1)在構(gòu)建重組DN

38、A分子時(shí)，要用限制性核酸內(nèi)切酶處理s基因和載體DNA，并用DNA連接酶使兩者結(jié)合。(2)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中存在接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶處理，以便于分瓶培養(yǎng)。(3)取單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)不會(huì)提高工程細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，A項(xiàng)錯(cuò)誤；胰島素能促進(jìn)血糖進(jìn)入組織細(xì)胞，因此提高工程細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，應(yīng)該在培養(yǎng)基中添加胰島素，B項(xiàng)正確；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要一定的氣體環(huán)境，因此需要放在二氧化碳培養(yǎng)箱中，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH，C項(xiàng)正確；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，為了給細(xì)胞提供充足的營養(yǎng)，需要在培養(yǎng)基中加入動(dòng)物血清，D項(xiàng)正確。故選A。(4)培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，應(yīng)該以受精卵作為受體細(xì)胞，因?yàn)槭芫训娜苄宰罡摺?/p>

39、6科研人員擬將已知的花色基因(目的基因)轉(zhuǎn)入矮牽牛的核基因組中，培育具有新花色的矮牽牛。請回答：(1)為了獲得大量的目的基因，可將目的基因與含有抗生素抗性基因的質(zhì)粒DNA連接形成重組DNA，再與經(jīng)_(A.氯化鈣B氯化鈉C蔗糖D葡萄糖)處理的大腸桿菌液混合，使重組DNA進(jìn)入大腸桿菌，用_處理過的玻璃刮刀將稀釋后的大腸桿菌液_接種到含有抗生素的固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)形成_，并進(jìn)行鑒定和擴(kuò)大培養(yǎng)。(2)從擴(kuò)大培養(yǎng)的大腸桿菌中提取含有目的基因的DNA后，用_分別切割含目的基因的DNA和農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，然后用DNA連接酶連接，形成重組DNA分子。(3)取田間矮牽牛的幼嫩葉片，經(jīng)自來水沖洗后，先用70%_

40、浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最后用_清洗，作為轉(zhuǎn)基因的受體材料。(4)將消毒后的矮牽牛葉片剪成小片，在含有目的基因的農(nóng)桿菌溶液中浸泡后，取出并轉(zhuǎn)移至加有適當(dāng)配比生長調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基(含蔗糖、瓊脂和抗生素，下同)上，使葉小片先經(jīng)脫分化形成_，再將其轉(zhuǎn)移至另一培養(yǎng)基中誘導(dǎo)形成芽，芽切割后轉(zhuǎn)移到_(A.LB培養(yǎng)基BMS培養(yǎng)基適宜濃度NAACMS培養(yǎng)基適宜濃度BADNAA/BA小于1的MS培養(yǎng)基)上生根，形成完整植株。(5)取出試管苗，在適宜的光照、溫度和80%以上的_等條件下進(jìn)行煉苗。提取葉片組織的DNA，采用PCR技術(shù)_目的基因，鑒定目的基因是否成功導(dǎo)入。(6)為判斷本研究是否達(dá)到預(yù)期目的，可比

41、較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)基因植株的_性狀。答案(1)A滅菌涂布菌落(2)限制性核酸內(nèi)切酶(3)乙醇無菌水(4)愈傷組織B(5)濕度擴(kuò)增(6)花色解析(1)氯化鈣處理大腸桿菌可增加其細(xì)胞壁的通透性，有利于大腸桿菌對(duì)重組DNA分子的吸收；為防止雜菌污染，玻璃刮刀等實(shí)驗(yàn)器具都應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的滅菌處理，微生物分離接種常用的兩種方法是劃線分離法和涂布分離法，劃線分離法使用的是接種環(huán)，而涂布分離法使用的是玻璃刮刀；微生物在固體培養(yǎng)基表面繁殖，會(huì)形成肉眼可見的子細(xì)胞群體，即菌落。(2)限制性核酸內(nèi)切酶能夠識(shí)別DNA分子中特定的核苷酸序列，并在其中的特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，使DNA分子斷裂形成粘性末端，用相同的限制性核酸內(nèi)切

42、酶對(duì)含目的基因的DNA和Ti質(zhì)粒進(jìn)行切割，可得到相同的粘性末端，然后用DNA連接酶連接，即形成重組DNA分子。(3)利用乙醇和次氯酸鈉浸泡葉片是為了消除雜菌的干擾，而無菌水是用來洗凈表面殘留的消毒液，避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(4)離體培養(yǎng)的植物組織經(jīng)適宜條件誘導(dǎo)會(huì)脫分化形成愈傷組織，然后在相應(yīng)條件的誘導(dǎo)下會(huì)再分化，生出莖、根，長成試管苗；LB培養(yǎng)基是培養(yǎng)細(xì)菌的，MS培養(yǎng)基才是植物組織培養(yǎng)使用的，NAA為生長素類似物，BA為細(xì)胞分裂素類似物，當(dāng)生長素濃度大于細(xì)胞分裂素濃度時(shí)，促進(jìn)生根。(5)在適宜的光照、溫度和80%以上的濕度等條件下進(jìn)行煉苗，之后逐步降低濕度，直至達(dá)到自然濕度再進(jìn)行定植，這樣有利于提

43、高存活率；PCR技術(shù)是一種細(xì)胞外DNA復(fù)制技術(shù)，利用葉片組織的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若能夠擴(kuò)增目的基因，則說明成功導(dǎo)入，反之則不成功。(6)轉(zhuǎn)入花色基因是為了讓矮牽牛產(chǎn)生新的花色，因此比較轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)基因植株的花色，即可知實(shí)驗(yàn)是否達(dá)到目的。7浙江大學(xué)農(nóng)學(xué)院喻景權(quán)教授課題組研究發(fā)現(xiàn)，一種植物激素油菜素內(nèi)酯能促進(jìn)農(nóng)藥在植物體內(nèi)的降解和代謝。用油菜素內(nèi)酯處理后，許多參與農(nóng)藥降解的基因(如P450基因和GST)的表達(dá)和酶活性都得到提高，在這些基因“指導(dǎo)”下合成的蛋白酶能把農(nóng)藥逐漸轉(zhuǎn)化為水溶性物質(zhì)或低毒甚至無毒物質(zhì)，有的則被直接排出體外。某課題組進(jìn)一步進(jìn)行了如下的實(shí)驗(yàn)操作，請回答下列問題：(1)獲得

44、油菜素內(nèi)酯合成酶基因的方法有_(至少兩種方法)。步驟用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因時(shí)用到的耐高溫酶通常是指_；步驟用到的酶有_。(2)圖中導(dǎo)入重組質(zhì)粒的方法是_，在導(dǎo)入之前應(yīng)用一定濃度的_處理受體細(xì)菌。(3)導(dǎo)入重組質(zhì)粒2以后，往往還需要進(jìn)行檢測和篩選，可用_制成探針，檢測是否導(dǎo)入了重組基因，在培養(yǎng)基中加入_可將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。(4)請你為該課題命名：_。答案(1)從cDNA文庫中獲取、從基因組文庫中獲取、化學(xué)方法合成目的基因或PCR擴(kuò)增技術(shù)(任選其中兩項(xiàng)即可)TaqDNA聚合酶限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶(2)感受態(tài)細(xì)胞法(轉(zhuǎn)化法)氯化鈣溶液(3)紅霉素抗性基因紅霉素(4)探究油菜素內(nèi)酯

45、能否促進(jìn)土壤中農(nóng)藥的分解解析進(jìn)行基因工程操作時(shí)，首先要獲取目的基因，其方法有多種：從cDNA文庫中獲取、從基因組文庫中獲取、化學(xué)方法合成目的基因或PCR擴(kuò)增技術(shù)等。在構(gòu)建重組DNA分子的過程中，用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。圖中的受體細(xì)胞是細(xì)菌，故用感受態(tài)細(xì)胞法導(dǎo)入重組DNA分子，導(dǎo)入后需檢測和篩選。從圖中可以看出，最終是通過對(duì)照實(shí)驗(yàn)來檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因細(xì)菌對(duì)土壤中殘留農(nóng)藥的分解能力。8(2017遂寧模擬)我國一科研團(tuán)隊(duì)將小麥液泡膜Na/K逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(TaNHX2基因)轉(zhuǎn)移到水稻細(xì)胞內(nèi)，獲得了轉(zhuǎn)基因耐鹽水稻新品種。請回答下列有關(guān)問題：(1)為保證目的基因在水稻細(xì)胞中能夠表達(dá)，載體

46、上應(yīng)含有特定的_(A.復(fù)制原點(diǎn)B啟動(dòng)子C標(biāo)記基因)。(2)水稻的轉(zhuǎn)化過程為：將水稻幼胚接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，經(jīng)過_過程，培養(yǎng)出愈傷組織，然后用_法，將目的基因和相關(guān)功能片段整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA上，最后誘導(dǎo)愈傷組織形成水稻植株。(3)為驗(yàn)證外源基因整合到水稻基因組后是否轉(zhuǎn)錄，可從轉(zhuǎn)基因植株的細(xì)胞中提取所有mRNA并逆轉(zhuǎn)錄成_，再以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，利用TaNHX2基因特異引物，通過_方法進(jìn)行基因擴(kuò)增。若以根細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陽性(有產(chǎn)物生成)，以葉細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陰性(無產(chǎn)物生成)，則說明_。(4)將生長至4葉期的轉(zhuǎn)基因幼苗轉(zhuǎn)入高濃度的NaCl溶液中培養(yǎng)，進(jìn)行耐鹽試驗(yàn)，用非轉(zhuǎn)基因

47、幼苗作為對(duì)照。培養(yǎng)30天后觀察現(xiàn)象，若_，則說明轉(zhuǎn)基因植株獲得了耐鹽特性。答案(1)B(2)脫分化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化(3)cDNAPCR目的基因僅在根細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，未在葉細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄(4)轉(zhuǎn)基因植株存活率高于非轉(zhuǎn)基因植株9(2017紹興選考適應(yīng)性考試)基因工程基本操作流程如圖，請據(jù)圖分析回答問題。(1)圖中X是_，在目的基因與載體DNA的兩端形成_后，才能在DNA連接酶的催化下形成X。(2)在上述基因工程的操作過程中，與堿基互補(bǔ)配對(duì)無關(guān)的步驟有_(A.BCD)。(3)若要培育能生產(chǎn)彩色羊毛的轉(zhuǎn)基因羊，則一般用_做受體細(xì)胞。(4)在培育抗枯萎病的金茶花時(shí)，離體金茶花葉組織經(jīng)_形成愈傷組織，再通過_培養(yǎng)得到單

48、細(xì)胞，將外源基因?qū)肫渲?，?jīng)篩選培養(yǎng)形成抗病植株。該過程中用到的植物細(xì)胞工程技術(shù)是_。(5)與工程菌擴(kuò)大培養(yǎng)相比，分離和計(jì)數(shù)工程菌所用的培養(yǎng)基中還應(yīng)加入_制成平板，配置該培養(yǎng)基的基本步驟是_(A.計(jì)算、稱量、倒平板、融化、滅菌B計(jì)算、稱量、融化、倒平板、滅菌C計(jì)算、稱量、融化、滅菌、倒平板D計(jì)算、稱量、滅菌、融化、倒平板)，再采用_的方法接種。(6)對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法一般為_，含尿素的培養(yǎng)基需用_過濾除去雜菌。答案(1)重組DNA分子相同的粘性末端(2)C(3)受精卵(4)脫分化液體懸浮植物組織培養(yǎng)(5)瓊脂 C涂布分離(6)高壓蒸汽滅菌G6玻璃砂漏斗解析(1)圖中X為重組DNA分子，目的基因與載體DNA兩端形成相同粘性末端后，才能連接起來。(2)是將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，不涉及堿基互補(bǔ)配對(duì)。(3)動(dòng)物基因工程一般用受精卵作為受體細(xì)胞。(4)植物組織培養(yǎng)分為脫分化和再分化兩個(gè)階段。(5)與工程菌擴(kuò)大培養(yǎng)相比，分離和計(jì)數(shù)工程菌用固體培養(yǎng)基(加瓊脂)，采用涂布分離法接種。19