《消毒與滅菌》PPT課件.ppt

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1、 1 滅 菌 ： 應(yīng) 用 物 理 或 化 學(xué) 方 法 殺 滅 物 體 中 所 有 的 病原 微 生 物 、 非 病 原 微 生 物 以 及 芽 胞 和 霉 菌 孢 子 的 方法 。2 消 毒 ： 應(yīng) 用 物 理 或 化 學(xué) 方 法 殺 滅 物 體 中 的 病 原 微生 物 ， 而 對(duì) 非 病 原 微 生 物 及 芽 胞 ， 孢 子 不 要 求 全 部殺 死 。3 防 腐 ： 應(yīng) 用 物 理 或 化 學(xué) 方 法 阻 止 和 抑 制 微 生 物 的生 長(zhǎng) 繁 殖 的 方 法 。4 無 菌 操 作 法 ： 防 止 或 杜 絕 一 切 細(xì) 菌 進(jìn) 入 動(dòng) 物 體 或其 他 物 體 的 方 法 。5 濾

2、 過 除 菌 ： 液 體 或 氣 體 通 過 濾 過 作 用 除 去 其 中 所存 在 的 細(xì) 菌 。 一 般 用 0.22微 米 濾 膜 ， 但 不 能 除 去 病毒 ， 霉 形 體 及 L型 細(xì) 菌 。 a比 干 熱 更 易 使 菌 體 蛋 白 凝 固 。b濕 熱 穿 透 力 強(qiáng) ；c濕 熱 可 以 釋 放 大 量 潛 熱 。 紫 外 線 ：殺 菌 機(jī) 理 ：波 長(zhǎng) 200 300m的 紫 外 線 具 有 殺 菌 作 用干 擾 DNA的 復(fù) 制 與 轉(zhuǎn) 錄紫 外 線 穿 透 力 較 弱不 耐 熱 物 品 的 表 面 消 毒應(yīng) 用 范 圍 ：特 點(diǎn) ： 殺 菌 機(jī) 理 ：應(yīng) 用 范 圍 ：電

3、 離 輻 射 ： 包 括 高 速 電 子 、 x射 線 和 射 線 。產(chǎn) 生 游 離 基 ,破 壞 DNA。一 次 性 醫(yī) 用 塑 料 制 品 的 消 毒 ，食 品 的 消 毒 不 破 壞 其 營(yíng) 養(yǎng) 成 分 。 濾 菌 器 消 毒 劑 類 別 名 稱 濃 度 (%) 用 途重 金 屬 鹽 紅 汞 2 皮 膚 、 粘 膜 、 小 創(chuàng) 面 消 毒硫 柳 汞 0.01 生 物 制 品 防 腐氧 化 劑 高 錳 酸 鉀 0.1 皮 膚 、 尿 道 、 水 果 、 蔬 菜 消 毒過 氧 化 氫 3 皮 膚 、 粘 膜 、 創(chuàng) 傷 消 毒過 氧 乙 酸 0.2 0.5 塑 料 、 玻 璃 、 人 造 纖

4、 維 消 毒鹵 素 類 碘 液 2.5 皮 膚 消 毒醇 類 乙 醇 70 75 皮 膚 、 體 溫 計(jì) 消 毒 酚 類 石 炭 酸 3 5 地 面 、 器 皿 表 面 和 排 泄 物 消 毒來 蘇 爾 3 5 同 上 、 也 常 用 于 手 及 皮 膚 消 毒表 面 活 性 劑 新 潔 爾 滅 0.1 手 術(shù) 器 械 消 毒酸 堿 類 生 石 灰 10 20 排 泄 物 、 地 面 消 毒染 料 龍 膽 紫 2 4 表 淺 創(chuàng) 傷 消 毒 1928年 A.Fleming發(fā) 現(xiàn) 青 霉 素 澳 大 利 亞 病 理 學(xué) 家 霍 華德 .弗 羅 里 與 弗 萊 明1940提 純 出 青 霉 素 。

5、共 同 獲 得 1945年 諾 貝 爾生 理 學(xué) 和 醫(yī) 學(xué) 獎(jiǎng) . 三 、 噬 菌 體病 毒 種 類 很 多 ， 根 據(jù) 病 毒 寄 生 的 對(duì) 象 來 分 ， 有 植物 病 毒 、 動(dòng) 物 病 毒 和 微 生 物 病 毒 。噬 菌 體 ： 是 病 毒 中 的 一 種 ， 一 般 把 侵 染 細(xì) 菌 、 放線 菌 的 病 毒 叫 噬 菌 體 。 （ 把 侵 染 真 菌 的 病 毒 叫 噬真 菌 體 ）噬 菌 體 在 自 然 界 廣 泛 存 在 ， 在 1995年 發(fā) 表 的ICTV的 病 毒 分 類 與 命 名 第 六 次 報(bào) 告 中 共 報(bào) 道 了4000余 種 ， 分 別 劃 歸 為 4

6、9個(gè) 病 毒 科 .據(jù) Bradley(1967)歸 納 ， 噬 菌 體 共 有 六 類 形 態(tài) 。 1、 組 成 ： 主 要 由 蛋 白 質(zhì) 和 核 酸 組 成 。2、 基 本 形 態(tài) ： 蝌 蚪 形 、 微 球 形 和 纖 絲 形 。（ 一 ） 噬 菌 體 的 形 態(tài) 結(jié) 構(gòu) 與 組 成 以 大 腸 桿 菌 T4噬 菌 體 為 例頭 部 ： 廿 面 體 對(duì) 稱 結(jié) 構(gòu) ， 由 蛋 白質(zhì) 衣 殼 構(gòu) 成 ， 內(nèi) 含 一 條 DNA。頸 部 ： 薄 盤 狀 ， 附 頸 須 。尾 鞘 ： 長(zhǎng) 95nm, 衣 殼 粒 螺 旋 對(duì) 稱 ；可 伸 縮 。 尾 髓 :中 空 ， DNA可 由 此 進(jìn) 入

7、 細(xì) 胞 ?；?板 : 六 角 形 盤 狀 物 ， 其 上 有 刺突 、 尾 絲 。刺 突 : 有 吸 附 功 能 。尾 絲 : 有 識(shí) 別 吸 附 功 能 。 大 腸 桿 菌 T4噬 菌 體 構(gòu) 造3、 蝌 蚪 形 噬 菌 體 的 構(gòu) 造 （ 二 ） 、 噬 菌 體 (phage)的 繁 殖噬 菌 體 并 沒 有 個(gè) 體 的 生 長(zhǎng) 過 程 ， 而 只 有 其 基 本 成分 的 合 成 和 裝 配 ， 即 首 先 將 各 個(gè) 部 件 合 成 出 來 ，然 后 裝 配 ， 所 以 一 般 將 噬 菌 體 的 繁 殖 稱 做 復(fù) 制 。根 據(jù) 噬 菌 體 與 宿 主 的 關(guān) 系 ：烈 性 噬 菌

8、 體 ： 指 感 染 宿 主 細(xì) 胞 后 ， 能 夠 使 宿 主 細(xì)胞 裂 解 的 噬 菌 體 .溫 和 噬 菌 體 （ 或 溶 源 性 噬 菌 體 ） ： 噬 菌 體 感 染 細(xì)胞 后 ， 將 其 核 酸 整 合 （ 附 著 ） 到 宿 主 的 核 DNA上 ，并 且 可 以 隨 宿 主 DNA的 復(fù) 制 而 進(jìn) 行 同 步 復(fù) 制 ， 在一 般 情 況 下 ， 不 引 起 寄 主 細(xì) 胞 裂 解 的 噬 菌 體 。 烈 性 噬 菌 體 的 繁 殖 過 程 一 般 分 為 五 個(gè) 階 段 ：即 吸 附 、 侵 入 、 復(fù) 制 、 裝 配 和 釋 放 。1、 烈 性 噬 菌 體 的 繁 殖 吸

9、 附 ： 噬 菌 體 和 宿 主 細(xì) 胞 上 的 特 異性 吸 附 部 位 進(jìn) 行 特 異 性 結(jié) 合 ， 噬 菌 體以 尾 絲 牢 固 吸 附 在 受 體 上 后 ， 靠 刺 突“ 釘 ” 在 細(xì) 胞 表 面 上 。 侵 入 ： 核 酸 注 入 細(xì) 胞 的 過 程 。 噬 菌體 尾 部 所 含 酶 類 物 質(zhì) 可 使 細(xì) 胞 壁 產(chǎn) 生一 些 小 孔 ， 然 后 尾 鞘 收 縮 ， 尾 髓 刺 入細(xì) 胞 壁 ， 并 將 核 酸 注 入 細(xì) 胞 內(nèi) ， 蛋 白質(zhì) 外 殼 留 在 細(xì) 胞 外 。 復(fù) 制 ： 包 括 核 酸 的 復(fù) 制 和 蛋 白 質(zhì)合 成 。 噬 菌 體 核 酸 進(jìn) 入 宿 主

10、 細(xì) 胞 后 ，會(huì) 控 制 宿 主 細(xì) 胞 的 合 成 系 統(tǒng) ， 然 后 以噬 菌 體 核 酸 中 的 指 令 合 成 噬 菌 體 所 需的 核 酸 和 蛋 白 質(zhì) 。 裝 配 ：主 要 步 驟 有 ：DNA分 子 的 縮 合 通 過 衣 殼 包 裹 DNA而 形 成 頭 部 尾 絲 及 尾 部 的 其 它 部 件 獨(dú) 立 裝 配 完 成 頭 部 與 尾 部相 結(jié) 合 最 后 裝 上 尾 絲 ， 至 此 ， 一 個(gè) 個(gè) 成 熟 的 形 狀 、大 小 相 同 的 噬 菌 體 裝 配 完 成 。 釋 放 ：方 式 ：裂 解 ： 多 以 裂 解 細(xì) 胞 的方 式 釋 放 。分 泌 ： 噬 菌 體

11、穿 出 細(xì) 胞 ，細(xì) 胞 并 不 裂 解 。通 常 情 況 下 ， 一 個(gè) 噬 菌體 通 過 上 述 五 個(gè) 過 程 能合 成 100300個(gè) 噬 菌體 。 烈 性 噬 菌 體 的 這 種生 長(zhǎng) 繁 殖 方 式 也 稱 為 一步 生 長(zhǎng) ， 一 步 生 長(zhǎng) 曲 線1. 實(shí) 驗(yàn) 設(shè) 計(jì) 依 據(jù) ： 1個(gè) 菌 體 被 1個(gè) 噬 菌 體 感 染 ,避 免 二次 吸 附 ； 細(xì) 菌 群 體 被 噬 菌 體 同 步 感 染 。2. 實(shí) 驗(yàn) 過 程 : 敏 感 菌 10ml Phage 1ml 混 勻 ， 5min,使 之 吸 附 離 心 或 用 抗 phage血 清 處 理 , 去 除 過 量 phag

12、e 高 倍 稀 釋 ,吸 附 phage的 菌 懸 液 (避 免 多 次 吸 附 ) 37 培 養(yǎng) ,定 時(shí) 取 樣 取 樣 人 為 裂 解 處 理 （ 每 5min） 樣 品 中 加 入 氯 仿 裂 解 細(xì) 胞 24-48h 裂 解 液 加 入 敏 感 菌 液 中 適 當(dāng) 稀 釋 混 合 液 涂 布 于 瓊 脂 培 養(yǎng) 基 上 計(jì) 數(shù) 噬 菌 斑 噬 菌 斑 :概 念 ： 將 少 量 噬 菌 體 與 大 量 敏感 菌 混 合 培 養(yǎng) 在 營(yíng) 養(yǎng) 瓊 脂 中 ，在 平 板 表 面 布 滿 宿 主 細(xì) 胞 的菌 苔 上 ,可 以 用 肉 眼 看 到 一個(gè) 個(gè) 透 明 的 不 長(zhǎng) 菌 的 小 圓

13、斑 ，稱 為 噬 菌 斑 。 (每 個(gè) 噬 菌 斑一 般 是 由 一 個(gè) 噬 菌 體 粒 子 形成 的 。 ) 應(yīng) 用 : 噬 菌 斑 可 用 于 檢 出 、分 離 、 純 化 噬 菌 體 和 進(jìn) 行 噬菌 體 的 計(jì) 數(shù) 。 噬 菌 斑 以 培 養(yǎng) 時(shí) 間 為 橫 坐 標(biāo) ,以噬 菌 斑 數(shù) 為 縱 坐 標(biāo) ,繪制 成 的 曲 線 為 一 步 生長(zhǎng) 曲 線 ?？?分 以 下 階 段 ：潛 伏 期裂 解 期穩(wěn) 定 期 一 步 生 長(zhǎng) 曲 線 潛 伏 期 ： 從 噬 菌 體 吸 附 細(xì) 菌 到 細(xì) 菌 細(xì) 胞 釋 放 新 的 噬 菌 體 之 前 的 這 段 時(shí) 期 .曲 線 平 行 于橫 軸 ，

14、 噬 菌 體 數(shù) 無 變 化 .樣 品 中 無 游 離 的噬 菌 體 。 (潛 伏 期 前 的 噬 菌 斑 數(shù) 是 噬 菌 體數(shù) ,也 就 是 感 染 噬 菌 體 的 細(xì) 菌 數(shù) ).裂 解 期 ： 曲 線 直 線 上 升 ,子 代 噬 菌 體 不 斷 釋 放到 培 養(yǎng) 基 中 ,直 到 達(dá) 到 一 個(gè) 極 限 .穩(wěn) 定 期 :感 染 細(xì) 胞 后 復(fù) 制 的 子 代 噬 菌 體 全 部 釋放 ， 噬 菌 斑 數(shù) 穩(wěn) 定 ， 一 次 感 染 結(jié) 束 。 裂 解 量 :每 一 受 感 染 細(xì) 胞 所 釋 放 的 新 的 噬 菌 體 的 平 均 數(shù) 。 穩(wěn) 定 期 噬 菌 斑 數(shù) 裂 解 量 = 潛

15、 伏 期 噬 菌 斑 數(shù)不 同 的 噬 菌 體 或 同 種 噬 菌 體 感 染 敏 感 菌 后 所 釋放 的 噬 菌 體 數(shù) 不 同 ,與 噬 菌 體 種 類 、 宿 主 細(xì) 胞菌 齡 以 及 環(huán) 境 因 數(shù) 有 關(guān) 。 2、 溫 和 噬 菌 體 與 溶 源 性 細(xì) 菌溫 和 噬 菌 體 ： 噬 菌 體 感 染 細(xì) 胞 后 ， 將 其 核酸 整 合 （ 附 著 ） 到 宿 主 的 核 DNA上 ， 并 且 可以 隨 宿 主 DNA的 復(fù) 制 而 進(jìn) 行 同 步 復(fù) 制 ， 在 一般 情 況 下 ， 不 引 起 寄 主 細(xì) 胞 裂 解 的 噬 菌 體 。原 噬 菌 體 （ 或 前 噬 菌 體 ）

16、 ： 即 整 合 在 宿 主核 DNA上 的 噬 菌 體 的 核 酸 。 溶 原 性 細(xì) 菌 ： 指 在 核 染 色 體 上 整 合 有 原 噬菌 體 的 細(xì) 菌 。 可 進(jìn) 行 正 常 生 長(zhǎng) 繁 殖 ,而 不 被裂 解 。 溶 原 性 細(xì) 菌 的 特 點(diǎn) ：可 穩(wěn) 定 遺 傳 ： 子 代 細(xì) 菌 都 含 有 原 噬 菌 體 ， 均 具 有 溶 原 性 ?？?自 發(fā) 裂 解 ： 溫 和 噬 菌 體 的 核 酸 也 可 從 宿 主 DNA上 脫 落 下 來 ，恢 復(fù) 原 來 的 狀 態(tài) ， 進(jìn) 行 大 量 的 復(fù) 制 ， 變 成 烈 性 噬 菌 體 ， 自 發(fā)裂 解 幾 率 10-2 10-5

17、 ?？?誘 導(dǎo) 裂 解 ： 用 化 學(xué) 、 物 理 方 法 誘 導(dǎo)具 有 “ 免 疫 性 ” ： 溶 原 菌 對(duì) 其 本 身 產(chǎn) 生 的 噬 菌 體 或 外 來 的 同源 的 噬 菌 體 不 敏 感 ， 對(duì) 同 源 噬 菌 體 具 免 疫 性 ， 對(duì) 非 同 源 噬 菌體 沒 有 免 疫 性 ?？?復(fù) 愈 ： 自 然 遺 失 前 噬 菌 體 ， 但 不 發(fā) 生 自 發(fā) 裂 解 和 誘 導(dǎo) 裂 解 溶 源 轉(zhuǎn) 變 ： 由 于 溶 原 菌 整 合 了 溫 和 噬 菌 體 的 核 酸 而 使 自 己產(chǎn) 生 一 些 新 的 生 理 特 征 。 （ 三 ） 、 噬 菌 體 的 危 害 和 應(yīng) 用噬 菌

18、體 的 危 害 ：主 要 是 引 起 發(fā) 酵 中 的 噬 菌 體 污 染例 ： 丙 酮 、 丁 醇 發(fā) 酵 中 的 噬 菌 體 污 染 抗 生 素 發(fā) 酵 中 的 噬 菌 體 污 染 食 品 工 業(yè) 上 的 噬 菌 體 污 染防 治 ：控 制 活 菌 排 放選 育 抗 性 生 產(chǎn) 菌 株生 產(chǎn) 中 輪 換 使 用 菌 種藥 物 防 治 例 如 用 金 霉 素 、 四 環(huán) 素 等 。 噬 菌 體 的 應(yīng) 用 ：1.作 為 分 子 生 物 學(xué) 研 究 的 工 具 2.用 于 鑒 定 未 知 菌 ， 可 到 型 。 3.用 于 臨 床 治 療 傳 染 病 4.檢 驗(yàn) 植 物 病 原 菌 5.測(cè) 定 輻 射 劑 量