高考生物二輪專題復習 第一部分 專題5 第1講 基因工程與克隆技術(shù)課件

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1、兩個核苷酸之間的兩個核苷酸之間的_作用作用部位部位攜帶目的基因進入攜帶目的基因進入_拼接拼接DNA 片段，形片段，形成成_切割切割_和載體和載體作用作用載體載體DNA 連接酶連接酶限制酶限制酶目的基因目的基因重組重組DNA受體細胞受體細胞磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵質(zhì)粒、質(zhì)粒、噬菌體的衍生噬菌體的衍生物、動植物病毒等物、動植物病毒等Ecoli DNA 連接連接酶、酶、T4 DNA 連連接酶接酶EcoR 限制限制酶酶 Sma 限制限制酶酶常用常用類型類型能在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)能在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)定存在并大量復制定存在并大量復制有多個有多個_具有特殊的具有特殊的_Ecoli DNA 連連接酶只能連接接酶只能連接_T

2、4 DNA 連接連接酶能連接酶能連接_和平末端和平末端識別雙鏈識別雙鏈DNA 分子的某分子的某種種_在特定位點在特定位點上切割上切割作用作用特點特點(條件條件)載體載體DNA 連接酶連接酶限制酶限制酶特定核苷酸特定核苷酸序列序列黏性末端黏性末端限制酶切割限制酶切割位點位點黏性末黏性末端端標記基標記基因因目的基因目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結(jié)合，然后在與單鏈相應互補序列結(jié)合，然后在_作用下延伸作用下延伸PCR技術(shù)技術(shù)擴增擴增以以RNA為模板，在為模板，在 作用下人工合成作用下人工合成反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法已知核苷酸序列的已知核苷酸序列的 ，直接利

3、用，直接利用DNA合成儀用化學方法合成，不需要模板合成儀用化學方法合成，不需要模板化學合成化學合成人人工工合合成成從自然界已有的物種中分離，如從從自然界已有的物種中分離，如從_中獲取中獲取直接分離直接分離具體操作具體操作方法方法基因文庫基因文庫較小基因較小基因逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合聚合酶酶原核細胞原核細胞_受精卵、體細胞受精卵、體細胞受體受體細胞細胞_法法(用用Ca2處理處理)_技術(shù)技術(shù)_法、法、基因槍法、基因槍法、_法法常用常用方法方法微生物細胞微生物細胞動物細胞動物細胞植物細胞植物細胞花粉花粉管通道管通道顯微注射顯微注射感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞受精卵受精卵農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化過程過程動物胚

4、胎或出生不久的幼齡動物胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織動物的器官或組織植物幼嫩部位植物幼嫩部位取材取材動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)項目項目蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)皮膚移植材料的培育皮膚移植材料的培育檢測有毒物質(zhì)檢測有毒物質(zhì)生理、病理、藥理學的研究生理、病理、藥理學的研究植株快速繁殖植株快速繁殖脫毒植株的培養(yǎng)脫毒植株的培養(yǎng)人工種子人工種子生產(chǎn)藥物、殺蟲劑等生產(chǎn)藥物、殺蟲劑等轉(zhuǎn)基因植物的培育轉(zhuǎn)基因植物的培育應用應用無菌、無毒無菌、無毒營養(yǎng)，血清等營養(yǎng)，血清等溫度和溫度和pH氣體環(huán)境：氣體環(huán)境：O2、CO2無菌無菌營養(yǎng)營養(yǎng)適宜條件適宜條件條件條件新的細胞，不形

5、成個體，不體新的細胞，不形成個體，不體現(xiàn)全能性現(xiàn)全能性獲得植株個體，可以體獲得植株個體，可以體現(xiàn)全能性現(xiàn)全能性結(jié)果結(jié)果動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)項目項目過程過程細胞膜的細胞膜的_細胞膜的細胞膜的 _、細胞、細胞的的_原理原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交流動性流動性流動性流動性全能性全能性 突破了有性雜交方法的局突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能限，使遠緣雜交成為可能克服了遠緣雜交的克服了遠緣雜交的_，獲得雜種植株，獲得雜種植株意義意義雜交細胞雜交細胞 雜種植株雜種植株結(jié)果結(jié)果除物理法和化學法外還可除物理法和化學法外還可以用以用_誘導誘導物理法：離心、電激、物理法：離心、電激、振動；振動；化學法：聚乙二醇等試化學法：聚乙二醇等試劑誘導劑誘導融合方法融合方法_或膠原蛋白酶或膠原蛋白酶纖維素酶和纖維素酶和_相關(guān)酶相關(guān)酶動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交果膠酶果膠酶 胰蛋白酶胰蛋白酶 滅活的病毒滅活的病毒 不親不親 和性和性