薄層色譜中展開劑的選擇【教資類別】

薄層色譜中展開劑的選擇2007-04-05 02:03（一）有機合成中展開劑的選擇 做有機合成時走板子是常有的事，展開劑的選擇就至關重要了。選擇適當?shù)恼归_劑是首要任務.一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用單一溶劑，往往不能達到很好的分離效果，往往使用混合溶劑通常使用一個高極性和低級性溶劑組成的混合溶劑，高極性的溶劑還有增加區(qū)分度的作用，展開劑的比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻中報道的該類化合物用什么樣的展開劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個分離效果好的展開劑。展開劑的選擇條件：對的所需成分有良好的溶解性；可使成分間分開；待測組分的Rf在0.20.8之間，定量測定在0.30.5之間；不與待測組分或吸附劑發(fā)生化學反應；沸點適中，黏度較??；展開后組分斑點圓且集中；混合溶劑最好用新鮮配制。 一般來說，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來調節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達到好的分離效果，適合于生物堿、黃酮、萜類等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調節(jié)，適合于蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和萜類的分離；強極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調節(jié)，適合于極性很大的生物堿類化合物的分離。很多時候,展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達到最佳效果。我們在實驗中，為了實現(xiàn)一個配體與其他雜質有效分離，曾經(jīng)嘗試了很多種的溶劑組合，最后才找到石油醚EtOAcHCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時,采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開的跡象,再調整比例（或者加入第三種溶劑）,達到最佳效果；如果沒有分開的跡象（斑點較“拖”），最好是換溶劑。對于在硅膠中這種酸性物質上易分解的物質，在展開劑里往往加一點點三乙胺，氨水，吡啶等堿性物質來中和硅膠的酸性。（選擇所添加的堿性物質，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無疑是較好的選擇。）分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質量很有關系：不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細程度，酸性強弱不同，從而導致產(chǎn)品在某個廠家的硅膠中分離效果很好，但在另一個廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質含量對分離效果都有明顯的影響。溫度，濕度對分離效果影響也很明顯，在實驗中我們發(fā)現(xiàn)有時同一展開條件，上下午的Rf截然不同 。 展開劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮，在進行薄層層析時，首先應該知道未知化學成分的類型，其極性的大致歸屬，從提取液或從色譜柱的流動相極性可知，另外某樣品里含多種化學成分先按極性不同大致分，然后細分，對于分離未知的化學物質，展開劑的選擇也是一個摸索的過程，不應該僅僅從展開劑考慮，多因素綜合衡量！溶劑：層析過程中溶劑的選擇，對組分分離關系極大。在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質與所選用的吸附劑性質這兩者結合起來加以考慮在用極性吸附劑進行層析時，當被分離物質為弱極性物質，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應降低。在柱層操作時，被分離樣品在加樣時可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。溶解樣品的溶劑應選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個十分緩慢的過程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫。如果極性增大過訣（梯度太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時可以用溶劑的介電常數(shù)（）來表示。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。對非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強。 被分離物質的性質被分離的物質與吸附劑，洗脫劑共同構成吸附層析中的三個要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個成分的分離情況，直接與被分離物質的結構與性質有關。對極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強。當然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團的數(shù)目愈多，被吸附的住能就會更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會強些?？傊?，只要兩個成分在結構上存在差別，就有可能分離，關鍵在于條件的選擇。要根據(jù)被分離物質的性質，吸附劑的吸附強度，與溶劑的性質這三者的相互關系來考慮。首先要考慮被分離物質的極性。如被分離物質極性很小為不含氧的萜烯，或雖含氧但非極性基團，則需選用吸附性較強的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進行洗脫。但多數(shù)中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般級）。采用的洗脫劑極性應由小到大按某一梯度遞增，或可應用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關系?，F(xiàn)以實例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關系。如有多組分的混合物，象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。如對于C-27甾體皂甙元類成分，能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分離：將混合皂甙元溶于含有5氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應降低，亦即采用苯或含5氯仿的苯，即可將一元羥基皂甙元從吸附劑上洗脫下來。這一例子說明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時，需用不同的溶劑才能達到相同的分離效果，從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關系。 （二）簿層層析：薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進行層析時一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。 1薄層層析的特點：薄層層析在應用與操作方面的特點與柱層析的比較。 2吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細，一般應小于250目，并要求粒度均勻。用于薄層層析的吸附劑或預制薄層一般活度不宜過高，以級為宜。而展開距離則隨薄層的粒度粗細而定，薄層粒度越細，展開距離相應縮短，一般不超過10厘米，否則可引起色譜擴散影響分離效果。 3展開劑的選擇：薄層層析，當吸附劑活度為一定值時（如或級），對多組分的樣品能否獲得滿意的分離，決定于展開劑的選擇。中草藥化學成分在脂溶性成分中，大致可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強極性。但在實際工作中，經(jīng)常需要利用溶劑的極性大小，對展開劑的極性予以調整。實例談薄層色譜展開劑選擇2007/12/08 12:18 P.M.實例談薄層色譜展開劑選擇     根據(jù)本人的幾年薄層層析經(jīng)驗，參考藥典等國家藥品標準和有關文獻，將 2000版藥典一部里部分有代表性的對照品的薄層層實例按展開劑極性排序，并對其規(guī)律做一些分析。以下的分析和介紹是總體描述性的，目的是快速、簡便地選擇展開劑。如果想了解展開劑選擇的各種理論，請參考其他專著。 #TfaMVM E     選擇展開劑，要依據(jù)溶劑極性和他們的混溶性，溶劑對被分析物的溶解性，以及被分析物的結構。這里只討論藥典里通常使用的以硅膠為固定相主體的正相薄層，也不考慮板的活性。   列出溶劑極性參數(shù)表，方便以下比較展開劑。環(huán)已烷 :-0.2、石油醚（類，3060）、石油醚（類，6090）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、異丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氫呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2 1 。    關于溶劑混溶性，一般根據(jù)相似相溶原則，需要注意，極性相差大的不混溶，比如正己烷與甲醇。多元展開劑，主體的兩種溶劑不能混溶，就需要通過第三種溶劑來調和。比如：石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、環(huán)已烷和甲醇、水之類的。      一般正相色譜，固定相為極性，被分析物質的極性越大，需要極性更大的展開劑。    了解被分析物的極性可以通過分析其結構獲得，很難獲得它的極性指數(shù)。物質分子化學結構中，通常由較極性部分和非極性部分兩部分。例如下面以苯丙烷為極性小部分，隨著極性基團部分的增加，總體的極性就增加，展開劑極性也增加了。      ， 依次為肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸。   相應展開劑分別為：正己烷乙醚冰醋酸 (5:5:0.1)、苯冰醋酸甲醇(30:1:3)、氯仿甲醇甲酸（9:1: 0.5）、石油醚乙酸乙酯甲酸（3:6: 1）、醋酸丁酯甲酸水(7:2.5:2.5)。（由于薄層板、比移值不同的原因，展開劑極性比較是相對的，并非絕對的后者大于前者）。     現(xiàn)在最重要的問題是，不同化合物，怎么定它的極性，又用什么標準來定它對應的展開劑呢？以下分開討論不同化合物極性情況及其對應的展開劑。    首先是極性較小的揮發(fā)性物質。比如：冰片：石油醚 (3060)醋酸乙酯(17:3)、厚樸酚：苯醋酸乙酯(9:1.5)、-香附酮：苯醋酯乙酯冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：環(huán)己烷醋酸乙酯(3:1)，這類化合物，以石油醚、正構烷和苯為體積百分數(shù)比較大的溶劑，通常起溶解和分離化合物的作用，而用醋酸乙酯為調節(jié)Rf（比移值）的溶劑。為了減少拖尾之類其他相似相溶原則以外的影響，適當加入添加劑，如有機酸或者有機堿。      極性較小的不揮發(fā)性物質。比如： -谷甾醇：環(huán)己烷醋酸乙酯甲醇(6:2.5:1)或者環(huán)己烷丙酮(5:2) 、熊果酸：甲苯醋酸乙酯冰醋酸(12:4:0.5)、齊墩果酸：氯仿甲醇(40:1)、豬去氧膽酸：氯仿乙醚冰醋酸(2:2:1)、大黃素：苯醋酸乙酯甲醇(15:2:0.2)或者苯乙醇 (8:1)、丹參酮A：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4) 、穿心蓮內酯：氯仿-無水乙醇(9:1)、靛玉紅、靛藍氯仿乙醇(9:1)或者苯氯仿丙酮(5:4:1)。這類物質展開劑極性比極性較小的揮發(fā)性物質洗脫力強一些，因為這類物質極性小的母核大，而極性大的基團通常可以形成氫鍵，比如羧酸、羥基。以上物質，母核分子量減小、母核結構中不飽和健的增加（尤其是出現(xiàn)苯環(huán)），極性基團的增加，都使極性增加，展開劑極性也增大。這個范圍內的物質很多，一般展開劑大百分數(shù)的溶劑可以從環(huán)己烷甲苯二甲苯苯氯仿的順序，按照極性要求選擇。這里注意，異丙醇、正丁醇極性指數(shù)也比較小，在這范圍的化合物很少用，因為粘性大、展開慢，造成斑點擴散；另外，羥基的氫鍵作用力也有不利。調節(jié)Rf值的溶劑，從醋酸乙酯甲醇丙酮乙醇。揮發(fā)性物質也有很多帶羰基、羥基的，但從它的揮發(fā)性就可以明白，分子間作用力不強，另外，母核與石油醚、正構烷和苯的結構差異小，估計更容易脫離硅膠吸附，更快進入溶劑中，而不需要通過提高展開劑的極性。    皂苷類。人參皂苷：氯仿甲醇水 (65:35:10)10以下放置的下層溶液或正丁醇醋酸乙酯水(4:1:5)的上層溶液或氯仿醋酸乙酯甲醇水(15:40:22:10)10以下放置的下層溶液、芍藥苷：氯仿醋酸乙酯甲醇甲酸(40:5:10:0.2)、黃芩苷：醋酸乙酯丁酮醋酸水(10:7:5:3)、橙皮苷：苯醋酸乙酯甲酸水(1:12:2.5:3)的上層溶液、葛根素：氯仿甲醇水(14:5:0.5)、蘆?。捍姿嵋阴ゼ姿崴?8:1:1)。這類物質，由于存在糖的多羥基結構，苷元的結構影響變小。展開劑中使用極性大的有機溶劑（氯仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇）和水。乙酸和甲酸的使用，一方面增大展開劑極性，另外也可以抑制硅膠羥基的作用，減少拖尾。由于混溶性和硅膠耐酸能力的限制，水和酸的使用是有限度的。      極性大的小分子有機酸。沒食子酸：氯仿醋酸乙酯甲酸 (5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸、異綠原酸。這類物質多數(shù)是苯乙烯母核的，這個結構的極性本身比較大，另外有酚羥基和羧酸基團，個別有多羥基配基。皂苷的展開劑差不多，極性大。注意甲酸通常指的是濃度85%左右的，含有水。      含氮有機物。鹽酸小檗堿：苯醋酸乙酯甲醇異丙醇濃氨試液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸氣飽和) 或正丁醇冰醋酸-水(7:1:2)、麻黃堿：氯仿甲醇濃氨試液(20:5:0.5)或正丁醇冰醋酸水(8:2:1)、甘草酸銨：醋酸乙酯甲酸冰醋酸水(15:1:1:2)。由于NH2硅醇基的作用很強，在強極性展開劑加有機酸、有機堿掃尾。對于極性化合物，使用正丁醇對斑點擴散影響較小，因為化合物和硅膠的作用強。 D B#kvL:     進行薄層分析基本可以根據(jù)母核、基團，選擇相似的化合物對號入座。當然，具體的條件優(yōu)化則需要根據(jù)實際情況了。遇到較困難的分離，需要使用到設計優(yōu)化方法的，已經(jīng)不屬于本文討論范圍了。關于展開劑：分離的樣品酸性比較大，一般在展開劑中加酸加甲酸是因為該樣品是酸性的，加酸的量和該物質的酸性成正比關系，加水可能是因為你的樣品是苷類的用酸水做一下緩沖，目的就是讓斑點圓滑，不脫尾，展距良好。飽和也非常重要，邊緣效應很嚴重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內壁，這樣飽和效果會好一些1)在層析缸口涂適量凡士林，增加密封性；2)以展開劑邊緣效應的大小，確定展開劑平衡時間的長短，一般平衡時間在30分鐘即可。有機溶劑的極性，甲醇>氯仿，因此在氯仿：甲醇：氨水 （10:1:0.6）這個展開劑中，如果極性略大，可適當降低甲醇比例；如極性太小，可適當增大甲醇比例。氯仿：甲醇：氨水 10:1:0.6 和20：2：1.2 極性肯定是相同的，這有問題嗎？另外還有一個問題，這個展開劑中，甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。不同的展開系統(tǒng)意思是其中至少應該有一種溶劑不同（最好是不同分類組的溶劑），而不是比例不同?；蛘呤褂貌煌墓潭ㄏ?。關于展開：TLC中樣品拖尾現(xiàn)象是什么原因?該如何解決?2.TLC中樣品跑成幾乎為一條線,斑點沒有清晰的分離,想請教一下這是什么原因造成的?一般情況下該如何解決?造成問題1的原因基本相同：a、對于一些具有酸堿性的化學成分，在溶液中部分電離，事實上展開時存在分子、離子兩種狀態(tài)，以中性的有機試劑展開必然會出現(xiàn)兩種層析行為，造成脫尾甚至是一條線。b、展開劑選擇不當c、點樣量過大，樣品超載解決辦法：a、在展開劑中加幾滴甲酸或冰醋酸；b、展開時以氨水飽和c、減少點樣量d、參考文獻，調整展開劑種類、比例我想問問，關于TLC二次展開，是在第一次展開顯色后再在繼續(xù)第二次展開，還是在第一次展開后，換另一種展開劑接著展開??？請哪位大俠指點一下關于TLC的二次展開。二次展開是依據(jù)樣品定的，但肯定要在第一次展開后，將板晾干或吹干，再放入另一種展開劑中展開，有的樣品二次展開還要換展開方向，和原方向垂直。所以要以實際分離樣品需要而定。一般是因為樣品成分多，極性差別有的大，有的關于顯色：在工作中研究過用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種，但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時，后改用不加CMC輔的水板來作，就不會有烘糊現(xiàn)象，故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應。感覺輔水板關鍵是硅膠G與水的比例要達1：3.5左右，而且研磨后要盡快涂布，不能易于凝固而難于涂布，我是百思不得其解，難道CMC還有類似穩(wěn)定劑的作用2. “0.5%的板加熱時間長了就會黑”，是在層析完，顯色后吧，我也遇到過同樣的情況，這只有嚴格控制加熱顯色的時間。這個問題應該是這樣回答：但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時，若改用不加CMC輔的水板來作，就不會有烘糊現(xiàn)象，但不加CMC輔的板又太軟，點樣時容易點出洞，有個好辦法是將CMC的濃度調至0.1%，這樣就不易烘黑的。不信你試試，我們這邊藥檢所都這樣做的3. 關于薄層板加熱變黑的問題，其實很容易解決：當噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了，可以用電吹風在板子背面吹吹就能顯色了我們實驗室里一般都采用此法，簡便、快潔如果一非想使用烘箱烘的話，一定要用帶玻璃窗的，當看到顯色了就取出，不然不好控制顯色時間，時間過長，容易碳化變黑4各位樓主真是經(jīng)驗豐富，我鋪的0.5%的板加熱時間長了就會黑，有什么好著嗎？根據(jù)我的經(jīng)驗，薄層版變黑與CMCNa的濃度過大有關，如果你留意的話，你會發(fā)現(xiàn)，當顯色劑中有濃硫酸時，加熱時間稍長就會變黑（其他顯色劑是沒事的），我老師說這是因為濃硫酸把CMCNa炭化了，其實color=blue=這種情況你只要適當降低CMC-Na的濃度/color就可以了，當然如果不加CMC-Na的話容易把板弄破。一般我都是顯色后用電吹風吹的，要均勻吹，電吹風離板的距離要遠些，防止部分會黑。另還要注意顯色劑，如果顯色劑中含有硫酸，加熱時間一定要掌握好，不可太長。5CP2000中277頁蘇氨酸的TLC的其它氨基酸檢查似乎有問題: .以"正丁醇丁酮濃氨溶液水"為展開劑, 展開后,晾干,噴以茚三酮的丙酮溶液(1-50),.茚三酮與濃氨溶液起顯色反應, 弄得整塊板都有色,茚三酮氧化蘇氨酸后再與釋放出的氨氣起反應生成的點在整塊板中尚能看到,其它氨基酸就別想看了.   氨基酸類的薄層鑒別過程中，顯色前先將展完的板子在烘箱內烘一段時間，從而確保展開劑揮干凈，效果不錯關于裂板：板子會裂口，一則可能是因為硅膠的比例太大，二則可能是，板子要在常溫下晾干后，再在烘箱中活化。如果鋪完不久就在較高溫度下，裂口的幾率就比較高的?！傲栏傻陌遄臃旁诤嫦淅镌趺慈蚜耍惺裁捶椒梢员苊獍遄诱?。” 你的板沒有完全干透，表面看是干了，但是最中間的沒有干，所以你直接放入105度的烘箱烘，當然會炸裂了，所以應該先用低溫大約40度左右烘30分鐘左右，再用105度活化，就可以解決這個問題了。關于活化出現(xiàn)裂板、爆板的問題。我從沒有遇上過?；罨沂沁@樣處理不要等到溫度達到100度，而是設好溫度后就將板子放在干燥箱，然后再通電加熱，達到最高溫度后停留5分鐘左右即可。這樣水分是慢慢由內而外散發(fā)，而不是由外向內散發(fā)，避免了表面成膜，里面還在散發(fā)水氣，豈有不裂、不爆的道理！。關于點樣：1. 點樣我本人沒有什么技巧，導師教了我一招挺好用，寫出來大家分享，就是在點樣時食指放在點樣管的上端，當點樣管的下端與硅膠板接觸的瞬間輕輕松動上端的食指，溶液自然從點樣管出來，迅速提起點樣管，就這樣反復操作點出的斑點既小又均勻。但要提出樣品溶液不能太濃，濃度太大，點下的樣品不能被硅膠很好的吸收，不利于分離。2. 關于點樣，我上學的時候，老師用比較便宜的進樣器（大約10幾塊錢吧，10l即可），將針尖打磨圓滑，老師好像是用銼一點一點銼的，這樣點樣的時候樣品溶液不容易沿針尖上行（甲醇溶液都這樣），并且針尖不會刺破已經(jīng)鋪好的薄層板?，F(xiàn)在，我和師兄都是實行的這個辦法，還是比較實用的，點樣量可以精確到0.5µl。當然，點樣的時候手不能抖動，動作要輕，這些要領在于意會，逐漸鍛煉，相信你會體會到其中的快感。3. 要磨平微量進樣器的針尖，簡單的方法就是，在展缸的蓋子上輕磨（當然是靠近中間部分），就很快能解決問題 ，且很平滑。薄層色譜小知識1、 怎樣提高點樣效率?    點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。實驗證明：定量毛細管更適合較小體積的點樣；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細管間的點樣誤差、建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時，應將毛細管用超聲波或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象；常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距1-2cm 底邊距1.5cm；HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm 底邊距1cm。   2、展開劑的選擇     TLC與HPLC相比，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大的靈活性。流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的RF值位于0.1-0.7之間并達到較好的分離，與此對應的是流動相要有適當?shù)膹姸群徒M成。流動相強度越大，溶質RF值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物，根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質、薄層色譜板性質選擇一個二元溶劑體系，通過調節(jié)溶劑比例以尋求適合RF值，適合的RF值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形，則可看到：三角形頂點是二元體系，邊是三元體系，三角形內是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點組成。這種方法較為直觀，也較簡單。   3、TLC的通用顯色方法     理想的顯色希望靈敏度高、斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好、斑點的大小及顏色的深度與物質的量成正比。在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得成尤為重要。通用顯色法主要有：   （1）、紫外照射法：方便，不破壞樣品；   （2）、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結合靈敏度高于該兩法單獨使用；   （3）、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質被鑒別，有熒光物質更明顯；   （4）、硫酸溶液：對絕大多數(shù)有機物有效，但有破壞性。· 展開劑 PE(60-90)EtAc/PE=1:2EtAc/PE/AcOH=15:5:1EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:18年來我用這四種體系,沒有出現(xiàn)過什么問題.我一直在用的是乙酸乙酯：環(huán)已烷，不斷調節(jié)比例，直到有滿意的Rf值，有拖尾時可能要加酸或堿，我一般乙酸和三乙胺。我用了好幾年了，都還好。不妨一試！極性小的用+/系統(tǒng)極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng)拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸甲醇：氯仿對于胺類比較好 氯仿：甲醇9：1是比較常用的方法我常用的展開劑有：氯仿/甲醇；環(huán)已烷/丙酮；醋酸乙酯/石油醚；甲醇/吡啶/水酸用BTOH：HAc：H2O=2：1：1 很好用的。二氯甲烷：甲醇，調節(jié)不同的配比基本解決大多數(shù)問題根據(jù)化合物的極性選擇合適的展開劑，極性大的可滴加少量水，酸堿化合物會拖尾，酸性化合物可在展開劑中加少量乙酸，堿性的加少量三乙胺，會減少拖尾。前面的一些帖子中提到在分離堿性化合物時可以在展開劑中加入少量三乙胺，這樣確實會達到分離效果，但在柱層析時需要注意，當你的洗脫劑含有二氯甲烷或氯仿時經(jīng)常會分到三乙胺的鹽酸鹽，因為一般的二氯甲烷或氯仿中都含有少量的鹽酸，三乙胺的鹽酸鹽為無色針狀結晶，很漂亮，經(jīng)常會誤以為是分到的單體。切忌！  9教學d