2019-2020年高三生物總復(fù)習(xí) 第46講 基因工程教案.doc

2019-2020年高三生物總復(fù)習(xí) 第46講 基因工程教案【考綱要求】 遺傳的基本規(guī)律 考綱要求具體內(nèi)容(1)基因工程的誕生(2)基因工程的原理及技術(shù)(3)基因工程的應(yīng)用 I I實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)基因工程的具體操作步驟、過(guò)程與方法(2)從動(dòng)物組織、植物器官中粗提取DNA的基本操作步驟與DNA鑒定操作過(guò)程 實(shí)驗(yàn)與探 究能力【考點(diǎn)分析】考點(diǎn)試卷類(lèi)型越型基因工程的操作工具xx全國(guó)理綜選擇題xx廣東生物選擇題xx全國(guó)理綜選擇題基因工程的操作步驟及應(yīng)用選擇題xx廣東生物選擇題xx海南生物非選擇題xx山東理綜非選擇題xx江蘇生物非選擇題xx天津理綜非選擇題xx山東理綜非選擇題xx海南生物非選擇題xx江蘇生物非選擇題xx江蘇生物選擇題xx安徽生物選擇題xx浙江生物選擇題xx重慶生物選擇題xx上海理綜選擇題xx天津生物非選擇題xx重慶生物非選擇題xx江蘇生物非選擇題xx上海生物非選擇題【考點(diǎn)預(yù)測(cè)】從近幾年的高考試題看，考點(diǎn)主要集中在考查基因工程的基本工具、操作程序、DNA分子的提取與鑒定上?；蚬こ痰墓ぞ吆筒襟E仍是本專(zhuān)題的重點(diǎn)內(nèi)答，今年高考命題可能會(huì)從以下幾個(gè)方面展開(kāi)： 1基因工程的基本工具。 2基本操作程序的四個(gè)步驟。 3基因工程的應(yīng)用等知識(shí)點(diǎn)。 本專(zhuān)題內(nèi)容側(cè)重考查學(xué)生現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)方面的知識(shí)應(yīng)用能力，主要要是以填空題的形式呈現(xiàn)。【知識(shí)梳理】基因工程1、 概念2、 誕生歷程3、 基本工具4、 操作程序應(yīng)用【重點(diǎn)解析】考點(diǎn)一 基因工程的工具及其操作程序1基因工程的基本工具 2基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的獲取 從基因文庫(kù)中獲取目的基因 優(yōu)點(diǎn)：有了基因文庫(kù)，就可以隨時(shí)從中提取所需要的目的基因，引入受體細(xì)胞使之表達(dá)。 人工合成目的基因 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 aPCR：是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。PCR擴(kuò)增是獲取目的基因的一種非常有用的方法，也是進(jìn)行分子鑒定和檢測(cè)的一種很靈敏的方法。 b目的：通過(guò)指數(shù)式擴(kuò)增獲取大量的目的基因。 (2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建 目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。 基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。 a啟動(dòng)子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端。它是RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合的部位。 b終止子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，位于基因的尾端。作用是使轉(zhuǎn)錄過(guò)程停止。 C標(biāo)記基因：一般為抗生素抗性基因或熒光基因等，其作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因(目的基因是否導(dǎo)人成功)。 基因表達(dá)載體的構(gòu)建方法 (3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。受體細(xì)胞種類(lèi)不同，導(dǎo)入方法不同受體生物不同，所用的受體細(xì)胞種類(lèi)也不相同 a植物：可以是卵細(xì)胞(受精卵)、體細(xì)胞(可經(jīng)組織培養(yǎng)成為完整植株)。 b動(dòng)物：受精卵(因?yàn)轶w細(xì)胞的全能性受到嚴(yán)格限制)。 轉(zhuǎn)化實(shí)質(zhì)：目的基因整合到受體細(xì)胞染色體基因組中。 (4)目的基因的檢測(cè)與鑒定【例l】為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開(kāi)發(fā)利用備受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。(1)獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性核酸內(nèi)切酶作用于圖中的 處，DNA連接酶作用于 處。(填“a”或“b”)(2)將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和 法。(3)由導(dǎo)入目的基因的水稻細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要利用 技術(shù)，該技術(shù)的核心是 和 。(4)為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的 作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用 方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。解析：限制酶可水解DNA分子中特定位點(diǎn)的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，DNA連接酶可催化兩個(gè)脫氧核苷酸分子之間磷酸二酯鍵的形成；運(yùn)用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法或花粉管通道法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞之后，還需利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將受體細(xì)胞培養(yǎng)成植株。答案：(1)a a(2)基因槍(花粉管通道)(3)植物組織培養(yǎng)脫分化(去分化) 再分化(4)耐鹽基因(目的基因) 一定濃度鹽水澆灌(移栽到鹽堿地中)考點(diǎn)二、基因工程的應(yīng)用1基因工程的應(yīng)用 (1)植物基因工程成果 抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物(抗蟲(chóng)棉是轉(zhuǎn)入Bt毒蛋白基因培育的)。 抗病轉(zhuǎn)基因植物(病毒外殼蛋白基因、病毒復(fù)制酶基因)。 抗逆轉(zhuǎn)基因植物(生物的抗性基因)。 轉(zhuǎn)基因改良植物(營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、實(shí)用價(jià)值、觀賞價(jià)值)。 (2)動(dòng)物基因工程成果 提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度(外源生長(zhǎng)激素基因)。 改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)。 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物(牛、山羊等動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶、血清白蛋白、生長(zhǎng)激素、a一抗胰蛋白酶)。 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體(導(dǎo)入調(diào)節(jié)因子抑制抗原決定基因表達(dá)或除去抗原決定基因，培育沒(méi)有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆器官)。 (3)基因工程藥物 來(lái)源：主要來(lái)自轉(zhuǎn)基因工程菌。 成果：細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。作用：預(yù)防和治療人類(lèi)腫瘤、心血管疾病、遺傳病、各種傳染病、糖尿病、類(lèi)風(fēng)濕等疾病。 (4)基因治療 概念：是把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達(dá)到治療疾病的目的，是目前治療遺傳病最有效的手段。 成果：將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入患者淋巴細(xì)胞中，治療復(fù)合型免疫缺陷癥。 方法 a體外基因治療：先從病人體內(nèi)獲得某種細(xì)胞，如T淋巴細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)。然后，在體外完成基因轉(zhuǎn)移，再篩選成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內(nèi)。 b體內(nèi)基因治療：直接向人體組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移基因的治病方法。如1994年美國(guó)科學(xué)家利用經(jīng)過(guò)修飾的腺病毒作載體，成功地將治療遺傳性囊性纖維化病的正?；蜣D(zhuǎn)入患者肺組織中。【實(shí)戰(zhàn)訓(xùn)練】（09安徽卷）1xx年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予了“發(fā)現(xiàn)和發(fā)展了水母綠色熒光蛋白“的三位科學(xué)家。將綠色熒光蛋白基因的片段與目的基因連接起來(lái)組成一個(gè)融合基因，再將該融合基因轉(zhuǎn)入真核生物細(xì)胞內(nèi)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)就會(huì)帶有綠色熒光。綠色熒光蛋白在該研究中的主要作用是A追蹤目的基因在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過(guò)程B追蹤目的基因插入到染色體上的位置C追蹤目的基因編碼的蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的分布D追蹤目的基因編碼的蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu) 答案：C解析：將綠色熒光蛋白基因的片段與目的基因連接起來(lái)組成一個(gè)融合基因，將該融合基因轉(zhuǎn)入真核生物細(xì)胞內(nèi)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)帶有綠色熒光，從而可以追蹤目的基因編碼的蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的分布。故C正確。（09浙江卷）2下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是A目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物B限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類(lèi)常用的工具酶C人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性D載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)答案：D解析：基因工程中目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶；人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性，只有經(jīng)過(guò)一定的物質(zhì)激活以后，才有生物活性。載體上的抗性基因主要是有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞，不能促進(jìn)目的基因的表達(dá)。所以D錯(cuò)誤。（09重慶卷）3.下表有關(guān)基因表達(dá)的選項(xiàng)中，不可能的是 基因表達(dá)的細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物A細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白基因抗蟲(chóng)棉葉肉細(xì)胞細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白B人酪氨酸酶基因正常人皮膚細(xì)胞人酪氨酸酶C動(dòng)物胰島素基因大腸桿菌工程菌細(xì)胞動(dòng)物胰島素D兔血紅蛋白基因兔成熟紅細(xì)胞兔血紅蛋白答案：D解析：抗蟲(chóng)棉葉肉細(xì)胞中存在細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白基因，細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白基因能夠表達(dá)產(chǎn)生細(xì)菌抗蟲(chóng)蛋白；正常人皮膚細(xì)胞中含有人酪氨酸酶基因，人酪氨酸酶基因能夠表達(dá)產(chǎn)生人酪氨酸酶；大腸桿菌工程菌細(xì)胞存在動(dòng)物胰島素基因，動(dòng)物胰島素基因能夠表達(dá)產(chǎn)生動(dòng)物胰島素；兔成熟紅細(xì)胞中無(wú)細(xì)胞核，所以無(wú)兔血紅蛋白基因不能表達(dá)產(chǎn)生兔血紅蛋白。此題為容易題，識(shí)記理解類(lèi)。（09上海理綜卷）4科學(xué)家運(yùn)用基因工程技術(shù)將人胰島素基因與大腸桿菌的質(zhì)粒DNA分子重組，并且在大腸桿菌體內(nèi)獲得成功表達(dá)。圖示a處為胰島素基因與大腸桿菌質(zhì)粒DNA結(jié)合的位置，它們彼此能結(jié)合的依據(jù)是A基因自由組合定律B半保留復(fù)制原則C基因分離定律D堿基互補(bǔ)配對(duì)原則答案：D解析：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，重組質(zhì)粒依據(jù)的是粘性末端的堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。（09天津卷）5（30分）水稻種子中70的磷以植酸形式存在。植酸易同鐵、鈣等金屬離子或蛋白質(zhì)結(jié)合排出體外，是多種動(dòng)物的抗?fàn)I養(yǎng)因子，同時(shí)，排出的大量磷進(jìn)入水體易引起水華。（1）磷元素除了形成植酸外，還可以出現(xiàn)在下列_分子或結(jié)構(gòu)中（多選）。A.核糖B.ATPC.核糖體D.核膜（2）種植蘆葦能有效抑制水華的發(fā)生，表明蘆葦與引起水華的藻類(lèi)關(guān)系是_。（3）植酸酶可降解植酸，在谷物類(lèi)飼料中添加植酸酶可提高飼料的_ 利用率。（4）酵母菌中植酸的活性較高。下圖是從不同類(lèi)型酵母菌的發(fā)酵液中提取植酸酶的工藝流程。據(jù)圖回答：植酸酶_（/）屬于分泌蛋白。若植酸酶和的肽鏈組成不同，其差異體現(xiàn)在_。提純的植酸酶需做活性條件測(cè)定。右圖為測(cè)定結(jié)果。圖中的自變量可為_(kāi)(答一種)；因變量可以通過(guò)測(cè)定_來(lái)表示。（5）為從根本上解決水稻中的高植酸問(wèn)題，可將植酸酶基因?qū)胨?，培育低植酸轉(zhuǎn)基因水稻品種。下圖是獲取植酸酶基因的流程。據(jù)圖回答：圖中基因組文庫(kù)_（小于/等于/大于）cDNA文庫(kù)。B過(guò)程需要的酶是_；A、C過(guò)程中_（可以/不可以）使用同一種探針篩選含目的基因的菌株。目的基因和除從構(gòu)建的文庫(kù)中分離外，還可以分別利用圖中_。和_為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增，該過(guò)程中所用酶的顯著特點(diǎn)是_。（6）已獲得的轉(zhuǎn)植酸酶基因水稻品系植酸含量低，但易感病，下圖為選育低植酸抗病水稻品種的過(guò)程。圖中兩對(duì)相對(duì)性形狀分別由兩對(duì)基因控制，并獨(dú)立遺傳。 采用上圖育種過(guò)程，需從_代開(kāi)始篩選，經(jīng)篩選淘汰后，在選留的植株中低植酸抗病純合體所占的比例是_。選留植株多代自交，經(jīng)篩選可獲得低植酸抗病性狀穩(wěn)定的品性。答案：（1）BCD（2）競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系（3）營(yíng)養(yǎng)成分（4）I 氨基酸的種類(lèi)、數(shù)量和排列順序不同 溫度（或PH） 單位時(shí)間內(nèi)植酸的降解量（或植酸降解產(chǎn)物的生成量）（5）大于逆轉(zhuǎn)錄酶 可以DNA cDNA耐高溫（6）F2 1/9解析：本題考查物質(zhì)的元素組成、生物的種間關(guān)系、蛋白質(zhì)、酶、基因工程、遺傳定律的相關(guān)知識(shí)，涉及的知識(shí)點(diǎn)較多，綜合性很強(qiáng)。（1）只有核糖中不含磷元素，ATP（磷酸基團(tuán)）、核糖體（含RNA）、核膜（含磷脂）中均含有磷元素。（2）蘆葦能抑制水華的發(fā)生，表明蘆葦與水華的藻類(lèi)關(guān)系是競(jìng)爭(zhēng)。（3）植酸易同鐵、鈣等金屬離子或蛋白質(zhì)結(jié)合排出體外，是多種動(dòng)物的抗?fàn)I養(yǎng)因子，而植酸酶可降解植酸，因此在谷物類(lèi)飼料中添加植酸酶可提高飼料的營(yíng)養(yǎng)成分的利用率。（4）分析圖可知，植酸酶需要經(jīng)過(guò)兩次離心，因此植酸酶屬于分泌蛋白。若植酸酶和的肽鏈組成不同，其差異體現(xiàn)在氨基酸的種類(lèi)、數(shù)量和排列順序的不同。從圖的可看出，自變量可為溫度或pH，因變量可以通過(guò)測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)植酸的降解量或植酸降解量產(chǎn)物的生成量來(lái)表示。（5）分析獲取植酸酶基因的流程圖可知，圖中基因組文庫(kù)大于cDNA文庫(kù)。B過(guò)程需要的酶應(yīng)該是逆轉(zhuǎn)錄酶，因?yàn)锳、C過(guò)程都能獲得含目的基因的菌株，所以可以使用同一種探針進(jìn)行篩選。目的基因和除從構(gòu)建的文庫(kù)中分離外，還可以分別利用圖中DNA和cDNA為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增，該過(guò)程中所用酶的顯著特點(diǎn)是耐高溫。（6）根據(jù)上圖育種過(guò)程，所需性狀在F2代中才開(kāi)始出現(xiàn)，所以應(yīng)從F2代開(kāi)始篩選。從圖中可以看出，低植酸抗病是雙顯性（在F2中占9/16），經(jīng)篩選淘汰后，在選留的植株中純合體所占的比例是1/9。（09重慶卷）6.（16分）小鼠基因敲除技術(shù)獲得xx年諾貝爾獎(jiǎng)，該技術(shù)采用基因工程、細(xì)胞工程、雜交等手段使小鼠體內(nèi)的某一基因失去功能，以研究基因在生物個(gè)體發(fā)育和病理過(guò)程中的作用。例如現(xiàn)有基因型為BB的小鼠，要敲除基因B，可先用體外合成的突變基因b取代正?；駼，使BB細(xì)胞改變?yōu)锽b細(xì)胞，最終培育成為基因敲除小鼠。（1）基因敲除過(guò)程中外源基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，可利用重組質(zhì)粒上的 檢測(cè)。如果被敲除的是小鼠抑癌基因，則可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的 被激活，使小鼠細(xì)胞發(fā)生癌變。（2）通過(guò)基因敲除，得到一只AABb小鼠。假設(shè)棕毛基因A、白毛基因a、褐齒基因B和黃齒基因b均位于常染色體上，現(xiàn)要得到白毛黃齒新類(lèi)型小鼠，用來(lái)與AABb小鼠雜交的純合親本的基因型是 ，雜交子代的基因型是 。讓F1代中雙雜合基因型的雌雄小鼠相互交配，子代中帶有b基因個(gè)體的概率是 。不帶B基因個(gè)體的概率是 。（3）在上述F1代中只考慮齒色這對(duì)性狀，假設(shè)這對(duì)性狀的遺傳屬X染色體伴性遺傳，則表現(xiàn)黃齒個(gè)體的性別是 ，這一代中具有這種性別的個(gè)體基因是 。答案：（1）標(biāo)記基因；原癌基因（2）aaBB；AaBb；12/16（3/4）；4/16（1/4）（3）雄性（）；XBY、XbY解析：（1）作為質(zhì)粒的一個(gè)條件之一就是要具有標(biāo)記基因，以檢測(cè)外源基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。癌變的產(chǎn)生就是原癌基因由抑制態(tài)變激活態(tài)。（2）根據(jù)題意AABb基因敲除小鼠的表現(xiàn)型是棕毛褐齒，現(xiàn)要得到白毛黃齒新類(lèi)型小鼠（aabb），應(yīng)選取用與AABb小鼠雜交的純合親本的基因型是，用圖解表示：親本：AABbX子代：aabb則此親本必含有a基因，而又是純合的基因型只能為aabb或aaBB，而aabb是要培育的新品種不可能有，所以只用選用基因型為aaBB的親本，親本：AABbXaaBB子一代：1/2AaBb 1/2 AaBBF1代中雙雜合基因型AaBb的雌雄小鼠相互交配即自交,由于是常染色體遺傳,即Bb自交后代的基因型及比例為:1/4BB、2/4Bb、1/4bb，帶有b基因個(gè)體的概率是3/4，不帶B基因個(gè)體的概率是1/4。（只考慮B和b這一對(duì)基因的計(jì)算，用基因分離定律）也可兩對(duì)同時(shí)計(jì)算用自由組合定律，AaBb自交得1/4AAX1/4BB、1/4AAX2/4Bb、1/4AAX/4bb、2/4AaX1/4BB、2/4AaX2/4Bb、24AaX/4bb、1/4aaX1/4BB、1/4aaX2/4Bb、1/4aaX/4bb、可得帶有b基因個(gè)體的概率是12/16，不帶B基因個(gè)體的概率是4/16。（3）假設(shè)齒色性狀的遺傳屬X染色體伴性遺傳，則親本都為褐齒，基因型為XBXb和XY，則F1代的基因型為XBXb、XX、XB、XbY，其中XbY為黃齒是雄性個(gè)體，雄性個(gè)體基因還有XB。此題考查學(xué)生對(duì)兩大遺傳定律的理解與掌握情況及基因工程的有關(guān)知識(shí)。（09江蘇卷）7（7分）蘇云金桿菌（Bt）能產(chǎn)生具有殺蟲(chóng)能力的毒素蛋白。下圖是轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因植物的培育過(guò)程示意圖（為抗氨芐青霉素基因），據(jù)圖回答下列問(wèn)題。（1）將圖中的DNA用Hind、BamH完全酶切后，反應(yīng)管中有 種DNA片段。（2）圖中表示 Hind與BamH酶切、DNA連接酶連接的過(guò)程，此過(guò)程可獲得 種重組質(zhì)粒；如果換用Bst l與BamH酶切，目的基因與質(zhì)粒連接后可獲得 種重組質(zhì)粒。 （3）目的基因插入質(zhì)粒后，不能影響質(zhì)粒的 。（4）圖中的Ti質(zhì)粒調(diào)控合成的vir蛋白，可以協(xié)助帶有目的基因的TDNA導(dǎo)人植物細(xì)胞，并防止植物細(xì)胞中 對(duì)TDNA的降解。（5）已知轉(zhuǎn)基因植物中毒素蛋白只結(jié)合某些昆蟲(chóng)腸上皮細(xì)胞表面的特異受體，使細(xì)胞膜穿孔，腸細(xì)胞裂解，昆蟲(chóng)死亡。而該毒素蛋白對(duì)人類(lèi)的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較小，原因是人類(lèi)腸上皮細(xì)胞 。 （6）生產(chǎn)上常將上述轉(zhuǎn)基因作物與非轉(zhuǎn)基因作物混合播種，其目的是降低害蟲(chóng)種群中的 基因頻率的增長(zhǎng)速率。答案：（1）4 （2）2 1 （3）復(fù)制 （4）DNA水解酶（5）表面無(wú)相應(yīng)的特異性受體（6）抗性解析：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)。（1）由于上述兩種酶形成的末端不一樣，所以被兩種不同的限制酶切割之后所形成的片段有AA、AB、BA、BB四種切法形成的四種片段。（A表示Hind，B表示BamH）（2）同時(shí)被兩種限制酶切割有兩種不同的目的基因，即AB和BA，所以重組質(zhì)粒有兩種。Bst l與BamH酶切割的末端一樣，所以同時(shí)用這兩種限制酶切割只能形成一種目的基因，所以只能形成一種重組質(zhì)粒。（3）質(zhì)粒要進(jìn)行復(fù)制才能更多的表達(dá)出產(chǎn)物，所以重組之后要能復(fù)制。（4）酶具有專(zhuān)一性，對(duì)TDNA的降解酶為DNA水解酶。（5）生物的細(xì)胞表面的受體具有特異性，人類(lèi)腸上皮細(xì)胞沒(méi)有昆蟲(chóng)腸上皮細(xì)胞表面的特異受體。所以該毒素蛋白對(duì)人類(lèi)的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較小（6）自然選擇是普遍存在的，純種種植自然選擇會(huì)使害蟲(chóng)抗性基因頻率快速增長(zhǎng)。所以混合種植降低害蟲(chóng)的抗性基因頻率的增長(zhǎng)速率。（09上海卷）8.（9分）人體細(xì)胞內(nèi)含有抑制癌癥發(fā)生的P53基因，生物技術(shù)可對(duì)此類(lèi)基因的變化進(jìn)行檢測(cè)。（1）目的基因的獲取方法通常包括_和_。（2）上圖表示從正常人和患者體內(nèi)獲取的P53基因的部分區(qū)域。與正常人相比，患者在該區(qū)域的堿基會(huì)發(fā)生改變，在上圖中用方框圈出發(fā)生改編的堿基對(duì)，這種變異被稱(chēng)為_(kāi)。（3）已知限制酶E識(shí)別序列為CCGG,若用限制酶E分別完全切割正常人和患者的P53基因部分區(qū)域（見(jiàn)上圖），那么正常人的會(huì)被切成_個(gè)片段，而患者的則被切割成長(zhǎng)度為_(kāi)對(duì)堿基和_對(duì)堿基的兩種片段。（4）如果某人的P53基因部分區(qū)域經(jīng)限制酶E完全切割后，共出現(xiàn)170、220、290和460堿基對(duì)的四種片段，那么該人的基因型是_（以P+表示正?；颍琍n表示異?；颍４鸢福海?）從細(xì)胞中分離 通過(guò)化學(xué)方法人工合成（2）見(jiàn)下圖 基因堿基對(duì)的替換（基因突變）（3）3 460 220（4）解析：本題主要考查基因工程相關(guān)知識(shí)。（1）目的基因的獲取方法有直接分離和化學(xué)方法人工合成兩種；（2）仔細(xì)對(duì)比正常人與患者的基因序列可知是CG堿基對(duì)變?yōu)榱薚A堿基對(duì)，這種變化屬于基因突變；（3）正常人P53基因終于兩個(gè)限制酶E的識(shí)別序列，完全切割后可產(chǎn)生三個(gè)片段，患者P53基因中有一個(gè)限制酶E的識(shí)別序列發(fā)生突變，且突變點(diǎn)位于識(shí)別位點(diǎn)內(nèi)，這樣患者就只有一個(gè)限制酶E的識(shí)別序列，切割后產(chǎn)生兩個(gè)片段，分別為290+170=460對(duì)堿基，220對(duì)堿基；（4）正常人經(jīng)限制酶E完全切割后產(chǎn)生三個(gè)片段，290對(duì)堿基、170對(duì)堿基和220對(duì)堿基，患者產(chǎn)生兩個(gè)片段460對(duì)堿基和220對(duì)堿基，則該人的基因型應(yīng)為P+P-?！久麕燑c(diǎn)撥】DNA聚合酶和DNA連接酶的比較 比較項(xiàng)目 DNA聚合酶 DNA連接酶形成磷酸二酯鍵的方式只能將單個(gè)脫氧核苷酸連接起來(lái)，形成磷酸二酯鍵是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，不是在單個(gè)脫氧核苷酸與DNA片段之間形成磷酸二酯鍵不同點(diǎn)是否需要模板以一條DNA鏈為模板，將單個(gè)核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補(bǔ)的DNA鏈?zhǔn)菍NA雙鏈上的兩個(gè)缺VI同時(shí)連接起來(lái)，因此DNA連接酶不需要模板是否參與基因工程沒(méi)有參與在基因工程中，DNA連接酶可以作為連接運(yùn)載體和目的基因的“針線”兩者化學(xué)本質(zhì)都是蛋白質(zhì)。兩者均屬于酶，具有酶的基本屬性和特點(diǎn)。相同點(diǎn)兩者都能形成磷酸二酯鍵，即在相鄰核苷酸的3位碳原子的羥基與5位碳原子上所連接的磷酸基團(tuán)的羥基之間形成。兩者均參與DNA的復(fù)制、逆轉(zhuǎn)錄等過(guò)程。