高中生物選修一DNA的粗提取與鑒定

會計學(xué)1高中生物選修一高中生物選修一 DNA的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定第1頁/共27頁第2頁/共27頁第3頁/共27頁第4頁/共27頁第5頁/共27頁第6頁/共27頁第7頁/共27頁第8頁/共27頁第9頁/共27頁第10頁/共27頁第11頁/共27頁第12頁/共27頁第13頁/共27頁第14頁/共27頁第15頁/共27頁第16頁/共27頁 提取DNA的第一步是材料的選取，其目的是一定要選取DNA含量較高的生物材料，否則會由于實(shí)驗(yàn)過程中或多或少的損失而造成檢測的困難；第二步是DNA的釋放和溶解，這一步是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵，要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的DNA全部溶解；第三步是DNA的純化，即根據(jù)DNA的溶解特性、對酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將DNA與雜質(zhì)分開；最后一步是對DNA進(jìn)行鑒定，這是對整個實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的檢測。 1、請解釋提取DNA的實(shí)驗(yàn)操作主要步驟的目的練習(xí)練習(xí)第17頁/共27頁2 2、你認(rèn)為從細(xì)胞中提取某種特定的蛋、你認(rèn)為從細(xì)胞中提取某種特定的蛋白質(zhì)與提取白質(zhì)與提取DNADNA一樣容易嗎？一樣容易嗎？答：提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大。這是因?yàn)?，與DNA相比，蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、pH等條件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多種多樣，理化性質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件，設(shè)計特定的方法。第18頁/共27頁2.實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 molL對DNA有何影響?1.在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出第19頁/共27頁3.DNA遇二苯胺(沸水浴)會染成( ) A.磚紅色 B.橘黃色 C.紫色 D.藍(lán)色4.提取雞血中的DNA時，為什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，關(guān)鍵是對雜質(zhì)的去除，由于上清液是血液中的血漿部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白質(zhì))。答：D第20頁/共27頁第21頁/共27頁為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？ 1、用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)； 2、用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。 因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。 第22頁/共27頁本實(shí)驗(yàn)中有三次過濾 ,分別有什么作用?第23頁/共27頁實(shí)驗(yàn)中有五次用玻璃棒攪拌?分別有什么作用? 第24頁/共27頁方法步驟 加入物質(zhì) 目的 1.制備雞血細(xì)胞液 檸檬酸鈉溶液 2.提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì) 20 m1蒸餾水 幻燈片 18 3.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA 2 m1L 的NaCI溶液40mL 幻燈片 18 4.析出含DNA的黏稠物 蒸餾水 5.濾取含DNA的黏稠物 6.將DNA的黏稠物再溶解 2 molL 的NaCl溶液20 mL 7.過濾含DNA的NaCl 溶液 8.提取含有雜質(zhì)較少的 DNA 冷卻的95的酒精50 mL 幻燈片 18 A:(1)向試管中加入0.015 molL 的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺試劑 9.DNA的鑒定 B:(1)向試管中加入0.015molL 的NaCl溶液5mL (2)4 mL二苯胺試劑 第25頁/共27頁加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固加速血細(xì)胞破裂 溶解DNA 使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L使得DNA最大限度地釋出 使含DNA的黏稠物被留在紗布上使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)提取DNA A出現(xiàn)藍(lán)色 B無變化第26頁/共27頁