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1、HLA-B27與強直性脊柱炎,1,強制性脊柱炎AS,強制性脊柱炎（AS）是一種主要累及脊柱，中軸骨和四肢大關節(jié)，以椎間盤纖維環(huán)及其附近結締組織纖維化和骨化及關節(jié)強直為病變特點的慢性炎癥。其特征是病變從骶髂關節(jié)開始，逐步上升蔓延至脊柱關節(jié)，造成骨性強直。,2,3,病理變化,本病早期病理變化為肌腱，韌帶骨附著點炎，也可發(fā)生一定程度的滑膜炎癥，常以骶髂關節(jié)發(fā)病最早，以后可發(fā)生關節(jié)粘連，纖維性和骨性強直，組織學改變?yōu)殛P節(jié)囊，肌腱，韌帶的慢性炎癥，伴有淋巴細胞，漿細胞浸潤，這些炎性細胞成團分布于較小的滑膜血管周圍。,4,骶髂關節(jié)炎是強直性脊柱炎的病理標志，也常是其最早的病理表現(xiàn)之一，骶髂關節(jié)炎的早期病理
2、變化包括軟骨下肉芽組織形成，組織學上可見滑膜增生和淋巴樣細胞及漿細胞聚集，淋巴樣濾泡形成以及含有IgG，IgA和IgM的漿細胞，骨骼的侵蝕和軟骨的破壞隨之發(fā)生，然后逐漸被退變的纖維軟骨替代，最終發(fā)生骨性強直，脊柱的最初損害是椎間盤纖維環(huán)和椎骨邊緣連接處的肉芽組織形成，纖維環(huán)外層可能最終被骨替代，形成韌帶骨贅，進一步發(fā)展將形成X線所見的竹節(jié)樣脊柱。,5,AS的檢查,體格檢查 影像學檢查 早期表現(xiàn)為骶髂關節(jié)炎，可根據(jù)疾病不同時期選擇X線，CT,MRI檢查。 實驗室檢查 活動期可有ESR,CRP,PLT和血清IGA升高，類風濕因子陰性 90%患者HLA-B27陽性,6,HLA-B27檢測及其臨床應用
3、,什么是HLA及HLA-B27 MHC、HLA，HLA-B27 HLA-B27與哪些疾病相關 血清陰性脊柱關節(jié)病 類型及特點 強直性脊柱炎 特點及其與B27關聯(lián)機制 HLA-B27 怎么檢測 MLCT、FCM、PCR-SSP,7,HLA相關概念,主要組織相容性抗原 主要組織相容性復合體（ MHC 類)：H-2 SLA HLA MHC、HLA復合體基因 MHC分子、HLA分子抗原 HLA：人類白細胞抗原（ Human Leukocyte Antigen）,8,HLA抗原是人類主要組織相容性復合體（Major Histocompatibity Complex， MHC）的表達產(chǎn)物，在免疫系統(tǒng)中主要
4、負責細胞之間的相互識別和誘導免疫反應，調(diào)節(jié)免疫應答的功能。根據(jù)HLA抗原結構，功能與組織分布的不同，可分為三類：類分子為HLA-A、-B、-C系列抗原，廣泛分布于各組織有核細胞表面，包括血小板和網(wǎng)織紅細胞，成熟的紅細胞一般不含HLA抗原；類分子為HLA-D/DR、-DP、-DQ系列抗原，主要在B細胞和抗原提呈細胞上表達，這兩類抗原都與移植有關，其中類抗原更為重要；類分子為補體成分。,9,HLA-B27基因?qū)儆谛蚆HC基因，基本上表達在機體中所有含核的細胞上，尤其是淋巴細胞的表面有豐富的含量 早在二十多年前，人們就已發(fā)現(xiàn)HLA-B27抗原的表達與強直性脊椎炎有著高度相關性，超過90%的強直性脊椎
5、炎患者其HLA-B27抗原表達為陽性，普通人群中僅5-10%的為陽性，而強直性脊椎炎由于其癥狀與許多疾病相似而難以確診，因此HLA-B27的檢測在病情的診斷中有著重要意義。,10,HLA-B27相關疾病,11,HLA-B27相關疾?。簭娭毙约怪?患病率：0.3%，20-30歲，男女比例 10:1，有家族傾向； 主要侵犯：中軸關節(jié)（骶髂關節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織） 可伴發(fā)外周關節(jié)及關節(jié)外表現(xiàn)，嚴重者發(fā)生脊柱畸形和關節(jié)強直 B27檢測可作為有相關癥狀或高危人群AS早期的篩選方法！ AS不是RA的一種特殊類型！,12,HLA-B27與AS,13,HLA-B27與AS,14,健康人群HLA-B27
6、陽性率及AS患病率各地區(qū)、種族有顯著的差異 HLAB27與強直性脊柱炎的發(fā)病有很強的相關性 兩種錯誤認識需糾正：HLA-B27陽性AS！ HLA-B27陽性不會轉(zhuǎn)陰！,HLA-B27與AS的關聯(lián)機制,連鎖不平衡學說 分子模擬學說 關節(jié)源性肽假說 其他：T細胞受體庫假說超抗原假說B27修飾因子假說Cys67模型,15,張谷香醫(yī)學綜述，2012,18(4):498-501,HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標志。,B27抗原與某些G（-）菌之間存在類似的分子結構，能發(fā)生分子模擬或交叉反應，機體免疫系統(tǒng)把B27當作病原
7、體抗原產(chǎn)生免疫應答，對機體產(chǎn)生免疫損害。,認為關節(jié)源性肽只存在于關節(jié)組織中，特異性地由HLAB27提呈，正常情況下遞呈水平低，反應T細胞處于耐受狀態(tài)；當某些具有同源結構蛋白的病毒或細菌感染時，則可致敏耐受的T細胞，從而識別以低水平遞呈的關節(jié)源性肽，引起自身免疫反應而損傷組織。,AS發(fā)病原因機制目前尚未完全闡明，大多數(shù) 學者認為其與遺傳，感染，免疫，環(huán)境因素 等有關。,16,HLA-B27檢測方法,抗原水平 微量細胞毒法 流式細胞術法 基因水平 PCR-SSP,17,微量細胞毒法（MLCT）,原理：如果受試者淋巴細胞表面表達有相應的HLA-B27抗原，就可以與B27抗體結合，形成Ag-Ab復合物
8、激活補體，發(fā)生對細胞膜的破壞及細胞殺傷作用，通過染色法觀察，死細胞的細胞膜通透性改變，染料能夠進入使之著色，而活細胞細胞膜完整不被染色。根據(jù)死細胞占全部細胞的百分比，可以判斷受試者淋巴細胞表面是否存在HLA-B27抗原及其與抗體的反應強度。 優(yōu)點：不需特殊儀器設備，易于操作，一般的實驗室都可開展。 缺點：標本存放不能超過8小時；感染可以使細胞膜表面的B27分子的數(shù)量或結構改變，影響MLCT的結果，易出現(xiàn)假陰性。,18,J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189,流式細胞術法,利用熒光標記的HLA-B
9、27單克隆抗體，與細胞表面的B27抗原結合，使結合后的淋巴細胞具有一定的熒光強度，這種熒光強度可由流式細胞儀測得的通道值來反映，以其值的高低判斷HLA-B27抗原表達百分比，從而判斷HLA-B27是否陽性。 優(yōu)點：全自動儀器檢測，減少了人為因素的影響，重復性高，結果判斷準確，為目前較為理想的方法，目前已將FCM法檢測HLA-B27作為AS 診斷的常規(guī)檢測方法。 缺點：儀器昂貴，目前只在較大醫(yī)院應用，且熒光易淬滅。,19,Levering WH，et al. JCytometry B Clin Cytom，2003,54(1):28-38,PCR-SSP,通過設計基因序列特異的引物SSP，特異性
10、的擴增出標本中的HLA-B27基因片段，以瓊脂糖凝膠電泳分析PCR擴增產(chǎn)物，若出現(xiàn)目的條帶則表示HLA-B27為陽性。 優(yōu)點：基因水平的檢測 直接對HLA-B27原基因進行擴增分型，靈敏度高，特異性強。 缺點：耗時長，需要跑電泳，需要特定的實驗儀器及嚴格的實驗條件，在臨床上普遍開展此項檢查有一定的難處。,20,Olerup OTissue Antigens，1994,43(4):253-256,總結,HLA-B27陽性人群也不用太過緊張，但應注意積極預防,首先在平時生活中要適當?shù)腻憻捝眢w，增加戶外運動，注意保暖，尤其是腰背部，注意飲食結構，控制煙酒，預防呼吸道、消化道和生殖道感染，防止外傷；其次要克制思想麻痹，如果發(fā)現(xiàn)有關節(jié)疼痛、晨僵等早期癥狀要及時就醫(yī)，盡快治療。,21,Thanks for your listen!,22,
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