飼料中沙門氏菌的監(jiān)測概況及常規(guī)檢測技術應用.pptx

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1、 飼料中沙門氏菌監(jiān)測情況及常規(guī)檢測技術的應用 常 規(guī) 沙 門 氏 菌 檢 測 技 術 的 應 用 背 景 1 飼 料 中 沙 門 氏 菌 污 染 情 況23 背 景 沙門氏菌的檢測是各國檢驗機構對多種食品的必檢項目之一公共衛(wèi)生學上具有重要意義的人畜共患病之一 引起食物中毒的重要病原菌 在各類細菌性的食物中毒中沙門氏菌常居前列 不 得檢 出飼料衛(wèi)生標準 食品安全國家標準歐盟ICMSFCAC 沙 門 氏 菌 DANIEL ELMER SALMON, (1850-1914)美 國 獸 醫(yī) 微 生 物 和 病 理 學 家 。是 美 國 授 予 的 第 一 位 獸 醫(yī) 學博 士 。 1884年 任 美

2、國 農(nóng) 業(yè) 部畜 牧 局 首 任 局 長 。 他 首 次 從病 豬 中 分 離 出 豬 霍 亂 沙 門 氏菌 。 在 醫(yī) 學 微 生 物 中 通 用 的沙 門 氏 菌 一 詞 ， 就 是 為 紀 念他 而 以 他 的 名 字 命 名 的 。 沙 門 氏 菌（ Salmonella） 一 群 形 態(tài) 、 培 養(yǎng) 、 生 化 反 應和 抗 原 構 造 相 類 似 的 桿 菌 ，種 類 繁 多 。 已 發(fā) 現(xiàn) 2500多 種 血 清 型 ， 我國 目 前 發(fā) 現(xiàn) 的 有 200多 種 血 清型 。 沙 門 氏 菌 主 要 生 物 學 性 狀革 蘭 氏 陰 性 短 桿 菌 ，無 芽 孢 和 莢 膜 ，

3、 有鞭 毛 （ 除 雞 白 痢 沙門 氏 菌 、 雞 傷 寒 沙門 氏 菌 外 ） ， 大 多數(shù) 具 有 毛 。需 氧 或 兼 性 厭 氧 ； 普 通 營 養(yǎng) 瓊 脂 上生 長 良 好 。7-45 均 可 生 長 ， 最 適 溫 度 37 ，最 適 pH6.8-7.8。 抵 抗 力 60 20-30min即被殺死在水中能生存23周在糞便中可生存12個月在冰中能生存3個月 沙 門 氏 菌 生 物 學 特 性 傷 寒 沙 門 氏 菌 、 雞 傷 寒 沙 門 氏 菌 及 一 部 分 雞 白 痢沙 門 氏 菌 發(fā) 酵 糖 不 產(chǎn) 氣 ， 大 多 數(shù) 雞 白 痢 沙 門 氏 菌 不 發(fā)酵 麥 芽 糖 。

4、 O抗 原 Vi抗 原H抗 原 O抗 原 ： 為 脂 多 糖 ， 多 糖 部 分 決 定 其 特 異 性 ， 耐 熱 (100 、2.5h不 破 壞 )， 其 特 異 性 不 易 喪 失 或 變 異 。 H抗 原 ： H抗 原 存 在 于 鞭 毛 中 ， 蛋 白 質(zhì) ， 不 耐 熱 ， 60 、30-60min及 酒 精 作 用 均 可 破 壞 其 抗 原 性 ， 能 抵 抗 甲 醛 。 Vi抗 原 ： 是 一 種 N-乙 酰 -D-半 乳 糖 胺 糖 醛 酸 聚 合 物 ， 60加 熱 1h即 破 壞 其 凝 集 性 和 免 疫 原 性 。 DHL:無色半透明有黑色中心或幾乎全為黑色酚紅黃綠

5、：菌落呈紅色透明，同時培養(yǎng)基顏色變紅HE：藍綠色或藍色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色科馬嘉顯色培養(yǎng)基：呈紫色或紫紅色沙 門 氏 菌 在 不 同 選 擇 瓊 脂 平 板 上 的 菌 落 特 征 沙 門 氏 菌傷 寒 和 副 傷寒 急 性 腸 胃 炎 敗 血 癥內(nèi) 毒 素 對 人 的 危 害 據(jù) 調(diào) 查 ， 沙 門 氏 菌 是 美 國 食 物 中 毒 致 死 的 主 要 原 因 。 美 國 每 年 大 約 報 告 40000例 沙 門 氏 菌 感 染 病 例 。 但 實 際 的 感 染 人 數(shù) 可 能 要 達 20倍 以 上 ， 因 為 許 多 輕 型 病 人 可能 未 確 診 ， 據(jù) 不 完 全

6、 統(tǒng) 計 ， 每 年 大 約 1000人 死 于 急 性 沙 門 氏 菌 感 染 。 沙 門 氏 菌 對 動 物 的 危 害 畜 禽 食 用 含 有 沙 門 氏 菌 的 飼 料 ， 就 可 引 起 疾 病 或帶 菌 。 一 般 情 況 下 畜 禽 腸 道 帶 菌 率 比 較 高 。 當 動 物因 患 病 、 衰 弱 、 營 養(yǎng) 不 良 、 疲 勞 以 致 抵 抗 力 降 低 時 ，腸 道 中 的 沙 門 氏 菌 即 可 經(jīng) 腸 系 膜 淋 巴 結 和 淋 巴 組 織進 入 血 液 引 起 全 身 感 染 ， 甚 至 死 亡 。 （ 1） 急 性 敗 血 癥 多 見 于 斷 奶 前 后 （ 24

7、月 齡 ） 仔 豬 ， 主要 由 豬 霍 亂 沙 門 氏 菌 引 起 。 發(fā) 熱 ， 拒 食 ， 耳 根 ， 胸 前 ， 腹 下等 處 皮 膚 出 現(xiàn) 紫 斑 ， 后 期 見 下 痢 ， 呼 吸 困 難 ， 咳 嗽 跛 行 ， 經(jīng)14d死 亡 。 病 死 率 可 達 20 40 。（ 2） 亞 急 性 和 慢 性 表 現(xiàn) 為 ： 體 溫 升 高 ， 畏 寒 ； 結 膜 炎 ， 頑 固 性 下 痢 ， 伴 以 消 瘦 ， 脫 水 而 死 ； 部 分 病 豬 在 病 中 后 期 皮膚 出 現(xiàn) 彌 漫 性 濕 疹 。 （ 1） 雛 雞 感 染 ： 引 起 敗 血 癥 ， 可 造 成 大 批 死 忙

8、； 病 雞表 現(xiàn) 虛 弱 ， 口 渴 ， 食 欲 不 振 ， 腹 瀉 ， 發(fā) 育 遲 滯 等 。（ 2） 成 年 雞 ： 最 常 見 產(chǎn) 蛋 量 降 低 或 停 止 。 另 外 可 引 起卵 巢 炎 ， 可 在 卵 黃 內(nèi) 帶 菌 而 傳 給 幼 雛 。 （ 1） 犢 牛 ： 體 溫 升 高 ， 呼 吸 困 難 ； 排 出 血 絲 糞 便 ； 病期 延 長 時 ， 腕 和 跗 關 節(jié) 可 能 腫 大 ， 有 時 伴 有 支 氣 管 炎 和肺 炎 癥 狀 。（ 2） 成 年 牛 ： 常 有 高 熱 ， 昏 迷 ， 食 欲 廢 絕 ， 呼 吸 困 難 ，體 力 迅 速 衰 竭 ； 懷 孕 母 牛

9、多 數(shù) 發(fā) 生 流 產(chǎn) 。 傳 播 途 徑最 主 要 的 傳 播 途 徑 是 水 、 土 壤 和 飼 料病 菌 隨 人 和 動 物的 糞 尿 等 排 泄 物及 病 死 畜 禽 來 污染 土 壤 和 水 源 因 宰 殺 患 病 、 帶菌 的 畜 禽 而 造 成病 菌 的 散 布 ， 致使 健 康 動 物 的 胴體 和 環(huán) 境 受 到 污染 飼 料 和 飲 水 的 污染 ， 是 導 致 畜 禽沙 門 氏 菌 病 以 及相 互 傳 染 的 主 要原 因 危 害 程 度 分 類 中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 人 間 傳 染 的 病 原 微 生 物 名 錄 序 號 病 原 菌 名 稱 危 害

10、程度 分 類 實 驗 活 動 所需 生 物 安 全實 驗 室 級 別學 名 中 文 名 大 量 活 菌 操作1 S a l m o n e l l a choleraesuis 豬 霍 亂 沙 門 菌 第 三 類 BSL-22 Salmonella enterica 腸 沙 門 菌 第 三 類 BSL-23 Salmonella meleagridis 火 雞 沙 門 菌 第 三 類 BSL-24 Salmonella paratyphi A,B,C 甲 、 乙 、 丙 型 副 傷寒 沙 門 菌 第 三 類 BSL-2 5 Salmonella typhi 傷 寒 沙 門 菌 第 三 類 BS

11、L-26 Salmonella typhimurium 鼠 傷 寒 沙 門 菌 第 三 類 BSL-2 加 強 飼 料 的 衛(wèi) 生 管 理 ， 防 止 沙 門 氏 菌 的 污 染 ，不 僅 是 發(fā) 展 畜 禽 生 產(chǎn) 的 需 要 ， 也 是 減 少 人 類 感 染 沙門 氏 菌 、 預 防 食 物 中 毒 的 一 個 重 要 環(huán) 節(jié) 。意 義 Torres G J等2011年對西班牙3844個飼料樣品檢測發(fā)現(xiàn)，沙門氏菌的檢出率為4.8% 美國對12個牛場的295份飼料樣品進行沙門氏菌檢測，檢出率為9.8% 國 外 沙 門 氏 菌 污 染 情 況 傳 統(tǒng) 檢 測 方 法 分 子 生 物 學 方

12、法免 疫 學 方 法常 規(guī) 沙 門 氏 菌 檢 測 技 術 國 內(nèi) 現(xiàn) 行 標 準分子生物學方法免疫學方法傳統(tǒng)檢測方法GB/T13091-2002（培養(yǎng)法）GB/T 4789.4-2010（培養(yǎng)法）GB/T29642-2012（ PCR法 ）SN/T 1059.7-2010（ 實 時 熒 光 PCR法 ） GB/T 22429-2008（ 酶 聯(lián) 免 疫 法 ）DB34/T816-2008（ 免疫 色 譜 反 應 法 ） 傳 統(tǒng) 檢 測 方 法 前 增菌選 擇性 增菌 分 離 培養(yǎng)生 化 鑒定 血 清 學鑒 定傳 統(tǒng) 檢 測 方 法原 理沙 門 氏 菌生 化 特 性修 復 受 損 傷的 沙 門

13、 氏 菌 飼 料 中 含大 量 雜 菌 主 要 培 養(yǎng) 基 、 試 劑 、血 清 緩 沖 蛋 白 胨 水（ BPW） 氯 化 鎂 -孔 雀 綠增 菌 液 （ RV） 亞 硒 酸 鹽 胱 氨酸 增 菌 液 （ SC） 酚 紅 黃 綠 瓊 脂 DHL瓊 脂 營 養(yǎng) 瓊 脂 色 氨 酸 肉 湯 賴 氨 酸 脫 羧 酶肉 湯 尿 素 酶 氰 化 鉀 培 養(yǎng) 基 甘 露 醇 山 梨 醇 -半 乳 糖 苷 沙 門 氏 菌 O， Vi， H型 血清 主 要 儀 器 設 備 與 材料高 壓 滅 菌 鍋干 熱 滅 菌 箱培 養(yǎng) 箱水 浴 鍋 接 種 環(huán)培 養(yǎng) 瓶 或 三 角 瓶 量 筒平 皿 25g樣 品 22

14、5ml BPW36 16-20h 1ml BPW增 菌 液+10ml SC MM增 菌 液 在 42 、SC增 菌 液 在 36各 培 養(yǎng) 24h0.1ml BPW增 菌液 +10ml MM 分 別 從 MM和 SC增 菌液 中 取 1環(huán) ， 接 種 到酚 紅 黃 綠 和 DHL瓊 脂 上 培 養(yǎng)在 36 培 養(yǎng) 20-24h DHL瓊 脂 在36 培 養(yǎng) 24h 分 別 選 擇 性 培 養(yǎng) 基上 挑 選 可 以 菌 落 進行 TSI等 生 化 鑒 定 TSI生化試驗 底 層 產(chǎn) H2S底 層 產(chǎn) 酸斜 面 產(chǎn) 堿斜 面 底 層產(chǎn) 酸 產(chǎn) 堿底 層 產(chǎn) 酸斜 面 產(chǎn) 堿底 層 產(chǎn) H2S 產(chǎn)

15、酸 產(chǎn) 氣產(chǎn) 酸 產(chǎn) 氣 產(chǎn) H2S只在TSI產(chǎn)堿的情況下可判定無沙門氏菌，其余任何情況均需進行生化鑒定 生 化 鑒 定 O.5個 麥 氏 濁度 的 菌 懸 液依 次 在 每 個 安 瓿瓶 中 滴 加 菌 懸 液2 3滴 。第 一 步 第 二 步 第 三 步 生 化 鑒 定 試 劑 套 裝色氨酸肉湯經(jīng)36，1824h培養(yǎng)后滴加靛基質(zhì)試劑， 片刻觀察結果，陽性為玫瑰紅色 色氨酸脫羧酶及對照和氰化鉀及對照轉種結束后需滴加液體石蠟覆蓋試驗管方可進行培養(yǎng) 靛基質(zhì)試驗+時補做甘露醇山梨醇試驗，試驗陽性后進行血清學鑒定 TSI-時，進行ONPG試驗，ONPG陰性時進行血清學鑒定H2S+、靛基質(zhì)- 、尿素-

16、、KCN-、賴氨酸+后進行血清學鑒定 結 果 判 定 其 他 商 品 化 生 化 鑒 定 系 統(tǒng)VITEK GNI+ 應 用 一 系 列 小 的 多 孔 的 聚 苯 乙 烯 卡 片 進 行 測試 ， 卡 片 含 有 干 燥 的 抗 菌 藥 物 和 生 化 基 質(zhì) 。 先 制備 一 定 濃 度 的 欲 鑒 定 菌 株 的 菌 懸 液 ， 然 后 將 菌 懸液 接 種 到 各 種 細 菌 的 小 卡 上 ， 將 其 放 入 具 有 讀 數(shù)功 能 的 孵 箱 內(nèi) ， 每 隔 一 定 時 間 ， 儀 器 會 自 動 檢 測培 養(yǎng) 基 的 發(fā) 酵 情 況 ， 并 換 算 成 能 被 計 算 機 所 接

17、受的 生 物 編 碼 。 最 后 由 計 算 機 判 定 ， 打 印 出 鑒 定 結果 。 VITEK 6-8h 商 品 化 生 化 鑒 定 系 統(tǒng)API 20E API 20E 生 化 鑒 定 是 根 據(jù) 快 速 酶 促 反 應 及 代 謝產(chǎn) 物 的 檢 測 技 術 發(fā) 展 而 來 的 一 種 細 菌 編 碼 鑒 定 法 ，廣 泛 應 用 于 臨 床 、 食 品 中 革 蘭 氏 陰 性 桿 菌 的 快 速鑒 定 。 API 20E 18-24h API 20E第1位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)結果判定ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IN

18、D VP GEL GLU MAN INO SOR RGA SAC MEL AMY ARA OX1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 反應結果- + + + + + - - - - - + + + + + - + - + -沙門氏菌應得數(shù)值0 2 4 1 2 4 0 0 0 0 0 4 1 2 4 1 0 4 0 2 0組合編碼 6 7 0 4 7 5 2 BD PhoenixTM 100 2-8h 血 清 學 鑒 定 陰 性 陽 性 GB/T29642-2012 飼 料 中 沙 門 氏 菌 的 快 速 檢 測 方 法 -聚 合 酶 鏈 式 反 應

19、（ PCR） 法 SN/T 1059.7-2010 進 出 口 食 品 中 沙 門 氏 菌 檢 測 方 法 -實 時 熒 光 PCR法現(xiàn) 行 標 準 PCR技 術 原 理 PCR技 術 是 是 通 過 模 擬體 內(nèi) DNA復 制 的 方 式 ，在 體 外 選 擇 性 地 將 DNA目 的 片 段 進 行 短 時 間 內(nèi)大 量 擴 增 的 技 術 。 25g樣 品 225ml BPW36 16-20h 1ml BPW增 菌 液+10ml SC RVS增 菌 液 在 41.5 、SC增 菌 液 在 36各 培 養(yǎng) 243h0.1ml +10ml 大 豆 蛋 白 胨肉 湯 （ RVS） 煮 沸 離

20、心 PCR擴 增 電 泳 檢 測GB/T29642-2012- 主 要 儀 器 設 備 、 培 養(yǎng) 基 、 試 劑PCR儀離 心 機微 量 移 液 器電 泳 儀凝 膠 成 像 儀分 析 天 平 緩 沖 蛋 白 胨水大 豆 蛋 白 胨肉 湯亞 硒 酸 鹽 胱氨 酸 增 菌 液 引 物Premix Taq DNA 聚 合 酶瓊 脂 糖Marker 2000TAE緩 沖 液溴 化 乙 錠（ EB）-GB/T29642-2012 DNA模 板 制 備 方 法方 法 一 ： 熱 裂 解 法 取 選 擇 性 增 菌 液 1ml于 離 心 管 中 ， 12000r/min離 心 10min， 滅 菌 去 離

21、 子 水 洗滌 2次 ， 最 后 用 0.2ml滅 菌 去 離 子 水 懸 浮 ， 煮 沸 10min， 將 離 心 管 迅 速 轉 移 至 冰浴 中 冷 卻 ， 10000r/min離 心 5min， 取 上 清 液 作 為 模 板 。方 法 二 ： 試 劑 盒 可 選 用 商 業(yè) 試 劑 盒 。 -GB/T29642-2012 PCR擴 增 反 應 體 系 反 應 程 序 -GB/T29642-2012 PCR結 果 分 析 及 判 定結 果 判 定 ： 在 陰 性 對 照 無 條 帶 ， 陽 性 對 照 有 條 帶 的 前 提 下 ， 如 果 待 測 樣 品 再 330處 未 出 現(xiàn) 相

22、 應 大 小 的 擴 增 條 帶 ， 則 可 報告 未 檢 出 沙 門 ； 如 果 待 測 樣 品 在 330bp處 出 現(xiàn) 擴 增 條 帶 ， 則 為 疑 似 陽 性 樣 品 ，需 用 GB/T 13091進 行 確 證 ， 最 終 結 果 以 后 者 為 準 。-GB/T29642-2012 實 時 熒 光 PCR原 理實 時 熒 光 PCR是 指 在 PCR反 應 體 系中 加 入 熒 光 基 團 ， 利 用 熒 光 信 號積 累 實 時 監(jiān) 測 整 個 PCR進 程 ， 最 后通 過 陽 性 對 照 、 Ct值 及 擴 增 曲 線對 模 板 進 行 定 性 分 析 的 方 法 。 25

23、g樣 品 225ml BPW36 16-20h 1ml BPW增 菌 液+10ml SC RVS增 菌 液 在 41.5 、SC增 菌 液 在 36各 培 養(yǎng) 243h0.1ml +10ml 大 豆 蛋 白 胨肉 湯 （ RVS） 煮 沸 離 心 反 應 體 系 擴 增 曲 線實 時 熒 光 PCR法 主 要 儀 器 設 備 、 培 養(yǎng) 基 、 試 劑 熒 光 定 量PCR儀 離 心 機 微 量 移 液 器 恒 溫 水 浴 鍋 高 壓 滅 菌 鍋 緩 沖 蛋 白 胨水 亞 硒 酸 鹽 胱氨 酸 增 菌 液 四 硫 磺 酸 鈉孔 雀 綠 增 菌液 引 物 探 針 DNA提 取 試劑 盒 Taq

24、DNA聚合 酶-SN/T 1059.7-2010 模 板 DNA的 制 備方 法 一 ： 熱 裂 解 法 取 增 菌 液 1ml， 置 于 離 心 管 中 ， 5000r/min離 心 5min， 滅 菌 生 理 鹽 水 洗 滌 2次 ，最 后 用 1ml滅 菌 去 離 子 水 懸 浮 ， 煮 沸 15min， 10000r/min離 心 5min， 取 上 清 液作 為 模 板 。方 法 二 ： 試 劑 盒 法 參 照 美 國 Promega公 司 生 產(chǎn) 的 DNA抽 提 試 劑 盒 ， 或 其 他 等 效 產(chǎn) 品 操 作 程 序 進行 。 -SN/T 1059.7-2010 實 時 熒

25、光 PCR擴 增反 應 體 系 （ 25ul） 反 應 條 件10 PCR緩 沖 液 2.5uldNTPs 1ul上 游 引 物 1ul下 游 引 物 1ul探 針 1ul模 板 2ulTaq DNA 酶 0.5ul 雙 蒸 水 16ul 1個 循 環(huán) 95 10min40個 循 環(huán) 95 15s65 30s-SN/T 1059.7-2010 樣 品 Ct值 35時 ， 報 告 沙 門 氏 菌 篩 選 陽性 ； 樣 品 Ct值 介 于 35-40之 間 ， 重 復 一 次 ，如 果 Ct值 40， 且 曲 線 有 明 顯 的 對 數(shù)增 長 期 ， 報 告 沙 門 氏 菌 篩 選 陽 性 ， 否

26、則 ， 報 告 未 檢 出 ； 樣 品 Ct值 40時 ， 報 告 未 檢 出 。 篩 選 陽 性 的 樣 品 按 SN0170的 規(guī) 定 進 行確 證 ， 以 確 證 結 果 為 準 。結 果 分 析 及 判 定 -SN/T 1059.7-2010 其 他 分 子 生 物 學 技 術環(huán) 介 導等 溫 擴增 技 術（LAMP） 多 重PCR技術 基 因 芯片 技 術 免 疫 學 方 法 現(xiàn) 行 標 準GB/T 22429-2008食 品 中 沙 門 氏 菌 、 腸 出 血 性 大 腸 埃希 氏 菌 O157及 單 核 細 胞 增 生 李 斯 特 氏 菌 的 快 速 篩 選 檢驗（ 酶 聯(lián) 免

27、疫 法 ）DB 34/T 816-2008飼 料 中 沙 門 氏 菌 的 測 定（ 免 疫 色 譜 反 應 法 ） 技 術 原 理 免 疫 學 檢 測 是 基 于 免 疫 學 理論 基 礎 ， 根 據(jù) 抗 原 抗 體 的 特 異性 反 應 而 進 行 檢 測 的 技 術 。 沙 門 氏 菌 特 異 性 抗 體 是 快 速定 性 檢 測 的 基 礎 。 主 要 儀 器 設 備 、 培 養(yǎng) 基 、 試 劑酶 聯(lián) 免 疫 分析 儀漩 渦 混 合 器均 質(zhì) 器恒 溫 培 養(yǎng) 箱高 壓 滅 菌 鍋 緩 沖 蛋 白 胨水氯 化 鎂 孔 雀綠 增 菌 液亞 硒 酸 鹽 胱氨 酸 增 菌 液四 硫 磺 酸 鈉

28、孔 雀 綠 增 菌液 沙 門 氏 菌 酶聯(lián) 免 疫 試 劑盒-GB/T 22429-2008 檢 測 步 驟1. 前 增 菌 和 增 菌 ： 按 GB/T 4789.4中 處 理 。2. 移 取 1ml增 菌 液 到 滅 菌 小 試 管 中 ， 煮 沸 15min， 剩 余 增 菌 液 于 4 保 存 ， 以便 用 于 陽 性 確 認 。3. 取 沙 門 氏 菌 酶 聯(lián) 免 疫 試 劑 盒 ， 與 15-30 的 環(huán) 境 中 放 置 30min。4. 取 適 量 煮 沸 后 的 增 菌 液 加 入 試 劑 盒 測 試 孔 中 ， 按 照 試 劑 盒 說 明 進 行 操 作 。-GB/T 224

29、29-2008 結 果 判 定 經(jīng) 過 酶 聯(lián) 免 疫 過 程 后 ， 將 檢 測 反 應 強 度 （ 熒 光 強 度 或 吸 收 度 ） ， 與 參 照 值 比較 ， 得 出 檢 驗 結 果 。 -GB/T 22429-2008 其 他 免 疫 學 檢 測 技 術免 疫 學技 術免 疫 膠體 金 技術 免 疫 層析 技 術免 疫 印跡 技 術免 疫 熒光 技 術 國 標 方 法 優(yōu) 缺 點 傳 統(tǒng) 檢 測 法 周 期 長 ， 需 要 4-7d， 過 程 繁 瑣 、 費 時 費 力 ； 傳 統(tǒng) 培 養(yǎng) 基 選 擇 性和 特 異 性 存 在 一 定 局 限 性 ， 檸 檬 酸 菌 屬 、 變 形

30、 桿 菌 等 均 可 能 對 沙 門 氏 菌 的 檢 測 產(chǎn)生 干 擾 ， 造 成 假 陽 性 。 PCR技 術 快 速 準 確 ， 結 果 分 析 簡 單 ， 對 樣 品 要 求 不 高 ， 檢 測 時 間 短 ； 但 與 傳統(tǒng) 培 養(yǎng) 法 相 比 ， 操 作 復 雜 ， 殘 留 污 染 易 導 致 假 陽 性 ， 對 技 術 人 員 要 求 較 高 ， 需 要專 用 儀 器 設 備 。 ELISA法 具 有 靈 敏 度 高 、 檢 測 速 度 快 等 優(yōu) 點 ， 但 費 用 較 高 ， 需 要 專 用 儀 器 。 實 時 熒 光 PCR法 具 有 高 度 的 靈 敏 性 、 特 異 性 和 精 確 性 ， 與 PCR方 法相 比 ， 具 有 操 作 簡 單 、 所 需 時 間 短 等 優(yōu) 點 ， 但 成 本 較 高 。非 國 標 方 法 優(yōu) 缺 點 THANK YOU!