沙門氏菌培訓(xùn).pptx

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1、沙 門 菌 屬（ Salmonella） 簡 介 沙 門 氏 菌 病 是 公 共 衛(wèi) 生 學(xué) 上 具 有 重 要 意 義的 人 畜 共 患 病 之 一 。 其 病 原 沙 門 氏 菌 屬 腸 道 細(xì) 菌 科 ， 包 括 引 起食 物 中 毒 ， 導(dǎo) 致 胃 腸 炎 、 傷 寒 和 副 傷 寒 的 細(xì) 菌 。 除 可 感 染 人 外 ， 還 可 感 染 很 多 動 物 包 括 哺乳 類 、 鳥 、 爬 行 類 、 魚 、 兩 棲 類 及 昆 蟲 。 特 性 沙 門 氏 菌 革 蘭 氏 陰 性 、 兩 端 鈍 圓 的 短 桿 菌（ 比 大 腸 桿 菌 細(xì) ） 。 （ 0.7 1.5m） （ 2 5

2、m）散 在 。 無 莢 膜 和 芽 孢 ， 都 具 有 周 身 鞭 毛 （ 除 雞 白痢 沙 門 氏 菌 、 雞 傷 寒 沙 門 氏 菌 外 ） ， 能 運(yùn) 動 ， 大多 數(shù) 具 有 菌 毛 ， 能 吸 附 于 宿 主 細(xì) 胞 表 面 或 凝 集 豚鼠 紅 細(xì) 胞 。 培 養(yǎng) 特 性 A 需 氧 及 兼 性 厭 氧 菌 。 B 在 普 通 瓊 脂 培 養(yǎng) 基 上 生 長 良 好 ， 培 養(yǎng) 24h后 ，形 成 中 等 大 小 、 圓 形 、 表 面 光 滑 、 無 色 半 透 明 、 邊緣 整 齊 的 菌 落 ， 其 菌 落 特 征 亦 與 大 腸 桿 菌 相 似 （ 無糞 臭 味 ） 。 C

3、 鑒 別 培 養(yǎng) 基 （ 麥 康 凱 、 SS、 伊 紅 美 藍(lán) ） ： 一般 無 色 菌 落 。 D 三 糖 鐵 瓊 脂 斜 面 ： 斜 面 為 紅 色 ， 底 部 變 黑 并產(chǎn) 氣 。 生 化 特 性1） 發(fā) 酵 葡 萄 糖 ， 麥 芽 糖 ， 甘 露 醇 和 山 梨 醇 產(chǎn) 氣 。2） 不 發(fā) 酵 乳 糖 、 蔗 糖 和 側(cè) 金 盞 花 醇 。3） 不 產(chǎn) 吲 哚 、 V-P反 應(yīng) 陰 性 。4） 不 水 解 尿 素 和 對 苯 丙 氨 酸 不 脫 氨 。 傷 寒 沙 門 氏 菌 、 雞 傷 寒 沙 門 氏 菌 及 一 部 分 雞 白 痢沙 門 氏 菌 發(fā) 酵 糖 不 產(chǎn) 氣 ， 大 多

4、 數(shù) 雞 白 痢 沙 門 氏 菌 不發(fā) 酵 麥 芽 糖 。 血 清 學(xué) 特 性 沙 門 氏 菌 具 有 復(fù) 雜 的 抗 原 結(jié) 構(gòu) 。 一 般 沙 門 氏 菌 具 有 菌 體 (O)抗 原 、 鞭 毛 (H)抗 原和 表 面 抗 原 (Vi莢 膜 或 包 膜 抗 原 )三 種 抗 原 。 傳 播 途 徑 肉 的 污 染 肉 及 其 制 品 的 沙 門 氏 菌 檢 出 率 美 國 為 20% 25%、 英 國 為 9.9%、 日 本檢 查 進(jìn) 口 家 禽 的 污 染 率 為 10.3%， 國 內(nèi) 肉 類 沙 門 氏 菌 檢 出 率 在 1.1%39.5%。 蛋 的 污 染 蛋 及 其 制 品 沙

5、 門 氏 菌 檢 出 率 為 3.9%-43.7%， 由 于 吃 蛋 引 起 鼠 傷 寒 病 的病 例 報 告 逐 漸 有 增 加 的 趨 勢 。 環(huán) 境 污 染 食 品 在 加 工 、 運(yùn) 輸 、 出 售 過 程 中 往 往 被 沙 門 氏 菌 污 染 。 沙 門 氏 菌 在糞 便 、 土 壤 、 食 品 、 水 中 可 生 存 5個 月 至 2年 之 久 。 傳 播 問 題 恢 復(fù) 期 患 者 和 無 癥 狀 的 帶 菌 者 也 是 常 見 的 傳 染 源 。 沙 門 氏 菌 檢 測 標(biāo) 準(zhǔn) GB 4 7 8 9 .4 -2 0 1 0 增 菌 和 選 擇 性 培 養(yǎng) 25g樣 品 225

6、ml BPW36 818h培 養(yǎng) 1ml BPW增 菌 液+10ml SC TTB增 菌 液 在 42 、SC增 菌 液 在 36各 培 養(yǎng) 18 24小 時1ml BPW增 菌 液+10ml TTB 分 別 從 TTB和 SC增 菌液 中 取 1環(huán) ， 接 種 到BS和 HE瓊 脂 上 培養(yǎng)BS瓊 脂 在 36 培 養(yǎng)40 48小 時 HE瓊 脂 在 36培 養(yǎng) 18 24小 時 分 別 從 BS和 HE瓊 脂上 挑 選 可 以 菌 落 進(jìn)行 TSI初 步 生 化 鑒 定 可 疑 菌 落 判 定 HE瓊 脂BS瓊 脂 XLD瓊 脂 科 瑪 嘉 顯 色 瓊 脂 陰性科 瑪 嘉 顯 色 瓊 脂

7、陽性 生 化 試 驗1、 先 從 BS、 HE或XLD或 顯 色 培 養(yǎng) 基上 挑 取 可 疑 菌 落 。 2、 接 種 至 TSI， 先在 斜 面 上 劃 線 ，然 后 再 底 層 穿 刺 。 4、 將 TSI和NA至 于 36 ，18 24h培 養(yǎng)3、 將 接 種 TSI完 畢 的 接 種 針 不 要 滅 菌 ，直 接 在 營 養(yǎng) 瓊 脂 平板 上 劃 線 。 根 據(jù) 上 表 中 可 理 解 為 只 有 在 斜 面 和 底 層 產(chǎn) 堿 、 不 產(chǎn) H2 S、不 產(chǎn) 氣 的 情 況 下 可 不 進(jìn) 行 生 化 鑒 定 ， 直 接 判 定 為 非 沙 門氏 菌 ， 其 余 任 何 情 況 均

8、需 進(jìn) 行 生 化 鑒 定 。TSI鑒 定 三 糖 鐵 生 化 試 驗底 層 產(chǎn) H 2 S底 層 產(chǎn) 酸斜 面 產(chǎn) 堿斜 面 底 層產(chǎn) 酸 產(chǎn) 堿底 層 產(chǎn) 酸斜 面 產(chǎn) 堿底 層 產(chǎn) H2 S 產(chǎn) 酸 產(chǎn) 氣產(chǎn) 酸 產(chǎn) 氣 產(chǎn) H2 S只 在 TSI產(chǎn) 堿 的情 況 下 可 判 定無 沙 門 氏 菌 ，其 余 任 何 情 況均 需 進(jìn) 行 生 化鑒 定 生 化 試 驗1 、 準(zhǔn) 備 一 只 2 ml無 菌 生 理 鹽 水 試 管 、 酒 精 燈 、 接 種 環(huán) 、 生 化 鑒 定 套 裝 。2 、 從 營 養(yǎng) 瓊 脂 平 板 上 挑 取 可 疑 菌 落 ， 接 種 至 生 理 鹽 水 中

9、， 制 成 0 .5 個麥 氏 濁 度 。3 、 依 次 在 各 個 安 瓿 （ bu） 瓶 中 滴 加 菌 懸 液 3 滴 。4 、 在 賴 氨 酸 脫 羧 酶 肉 湯 及 對 照 和 氰 化 鉀 及 對 照 中 個 滴 加 無 菌 石 蠟 覆蓋 。5 、 在 3 6 培 養(yǎng) 1 8 2 4 h。 菌 懸 液 制 備OR O.5 個 麥 氏 濁度 的 菌 懸 液依 次 在 每 個 安 瓿瓶 中 滴 加 菌 懸 液2 3 滴 。第 一 步 第 二 步 第 三 步 生 化 試 驗 準(zhǔn) 備 色氨酸 肉湯 賴氨酸脫羧酶肉湯 氨基酸脫羧酶肉湯 尿素酶 氰化鉀培養(yǎng)基 氰化鉀培養(yǎng)基對照 甘露醇 山梨醇 半

10、乳糖苷 色 氨 酸 肉湯 經(jīng) 3 6 ，1 8 2 4 h培養(yǎng) 后 滴 加靛 基 質(zhì) 試劑 ， 片 刻觀 察 結(jié) 果陽 性 為 玫瑰 紅 色 。 色 氨 酸 脫羧 酶 及 對照 和 氰 化鉀 及 對 照轉(zhuǎn) 種 結(jié) 束后 需 滴 加液 體 石 蠟覆 蓋 試 驗管 方 可 進(jìn)行 培 養(yǎng) 。 靛 基 質(zhì)試 驗 +時 補(bǔ) 做甘 露 醇山 梨 醇試 驗 ，試 驗 陽性 后 進(jìn)行 血 清學(xué) 鑒 定 TSI-時 ，進(jìn) 行ONPG試 驗 ，ONPG陰 性時 進(jìn)行 血清 學(xué)鑒 定 。H2 S+、 靛 基 質(zhì) - 、 尿 素 -、 KCN-、 賴 氨 酸 +后 進(jìn) 行 血 清 學(xué) 鑒 定 。生 化 試 驗 色 氨

11、酸吲 哚試 驗陰 性符 合 賴 氨酸陽 性對 照陰 性 0 NPG陰 性尿 素酶陰 性 KCN及對 照陰 性 甘 露醇山 梨醇陽 性符 合 符 合 符 合 符 合 符 合血 清 學(xué) 鑒 定 沙 門 氏 菌 的 分 類沙 門 氏 菌 屬 分 為 兩 個 種 ： 腸 道 沙 門 氏 菌 (種 ) 腸 道 亞 種 、 薩 拉 姆 亞 種 、 亞 利 桑 那 亞 種 、 雙 相 亞 利 桑 那 沙 門 氏 菌 、 豪 頓 沙 門 氏 菌 及 因 迪 卡 沙 門 氏 菌 (6個 亞 種 ) 邦 戈 爾 沙 門 氏 菌 (種 ) 沙 門 氏 菌 的 分 類 及 命 名 -沙 門 氏 菌 的 分 類 、 命

12、 名 沙 門 氏 菌 抗 原 O抗 原 也 稱 菌 體 抗 原 ， 是 細(xì) 胞 壁 的 組 成 成 分Vi抗 原 是 一 種 特 殊 的 菌 體 抗 原 ， 屬 于 K抗 原群 （ 如 傷 寒 沙 門 氏 菌 、 丙 型 副 傷 寒 沙 門氏 菌 和 都 柏 林 沙 門 氏 菌 都 含 有 Vi抗 原 ）H抗 原 （ 即 鞭 毛 抗 原 ） H抗 原 與 抗 血 清 的 反 應(yīng) 成 絮 狀 或 絨 狀 。 大 部 分 沙 門 氏 菌 H抗 原 都 具 有 兩 相 。 第 一 相 被 稱 為 特 異 性 相 ， 第 二 相 為 非 特異 性 相 。O、 H、 Vi抗 原 vi抗 原 因 與 毒

13、力 有 關(guān) 而 命 名 為 vi抗 原 。 由 聚 -n-乙 酰 -d-半 乳 糖 胺 糖 醛 酸 組 成 。 不 穩(wěn) 定 ， 經(jīng) 60 加 熱 、 石 碳 酸 處 理 或 人 工 傳 代 培 養(yǎng) 易破 壞 或 丟 失 。 Vi抗 原 存 在 于 細(xì) 菌 表 面 ， 可 阻 止 o抗 原 與 其 相 應(yīng) 抗 體的 反 應(yīng) 。 vi抗 原 的 抗 原 性 弱 。 當(dāng) 體 內(nèi) 菌 存 在 時 可 產(chǎn) 生 一定 量 抗 體 ； 細(xì) 菌 被 清 除 后 ， 抗 體 也 隨 之 消 失 。 故 測 定 vi抗 體 有 助 于 對 傷 寒 帶 菌 者 的 檢 出 。 新 從 患 者 標(biāo) 本 中 分 離 出

14、 的 傷 寒 桿 菌 、 丙 型 副 傷 寒 桿菌 等 有 此 抗 原 。 O抗 原 為 脂 多 糖 ， 性 質(zhì) 穩(wěn) 定 。 比 較 耐 熱 ， 100 不 被 破 壞 ， 也 不 易 被 酒精 破 壞 ； O抗 原 以 阿 拉 伯 數(shù) 字 表 示 ， 從 1排 到 67，但 刪 去 了 9個 抗 原 ， 現(xiàn) 在 有 58個 抗 原 ； 凡 含 有 群 特 異 性 共 同 抗 原 的 菌 型 歸 類 為一 個 O群 ， 以 主 要 抗 原 來 表 示 ， 某 些 次 要 抗原 可 以 出 現(xiàn) 在 多 個 群 中 。 -H抗 原 H抗 原 存 在 于 鞭 毛 之 中 ， 為 蛋 白 質(zhì) 。 由

15、肽 鏈 中 氨 基 酸 的 排 列 順 序 及 空 間 構(gòu) 型 決 定 其 特 異 性 。 不 耐 熱 ， 經(jīng) 加 熱 和 用 乙 醇 及 堿 處 理 易 變 性 。 H抗 原 常 有 兩 相 的 變 異 。 第 一 相 為 特 異 相 ， 用 小 寫 英 文 字 母 表 示 ， 如 ： a、 b、 I、 e、h等 。 第 二 相 為 非 特 異 相 ， 用 阿 拉 伯 數(shù) 字 表 示 ， 如 ： 1、 2、 5等 。 但 也 有 少 數(shù) 菌 含 有 第 一 相 中 的 抗 原 e、 n、 x等 成 分 。 A F群對 應(yīng) 的 O價 抗 原 沙 門 氏 菌 抗 原 表 中 符 號 意 義 ：

16、_ 指 溶 原 狀 態(tài) 下 O因 子 可 以 并 存 ， 和 平 共 處 。 指 O因 子 不 相 容 ， 只 能 有 一 種 。 指 O或 H因 子 有 存 在 或 不 存 在 的 可 能 性 。 O1 0 、 O1 5 、 O1 5 ， O3 4價 抗 原 不 相 容 只 存 在 一 種 。 都 柏 林 沙 門 氏 菌 存 在或 不 存 在 表 面 Vi抗 原 。西 翰 普 頓 沙 門 氏 菌 、 都 柏 林 沙 門 氏 菌屬 于 單 相 菌 ， H抗 原 只 存 在 第 一 項 。H抗 原 第 二 項 H1 和 H2價 抗 原 存 在 或 不 存 在O1 價 抗 原 與 其 他 抗 原和

17、 平 共 處 ， O5 、 O2 7價 抗 原 存 在 或 不 存 在 。 沙 門 氏 菌 菌 型 的 表 示 方 法 血 清 型 以 數(shù) 字 和 字 母 表 示 . 例 如 :查 考 夫 曼 -懷 特 沙 門 氏 菌 屬 抗 原 表 . 鼠 傷 寒 沙 門 氏 菌 : O抗 （ 1， 4， 5， 12） ， 第 相 H抗 原 （ i） 第 相 H抗 原 ( 1,2)。 它 的 血 清 型 應(yīng) 表 示 為 :鼠 傷 寒 沙 門 氏 菌 （ 1， 4， 5， 12：i： 1， 2） 沙 門 氏 菌 的 判 定 原 則采 用 血 清 學(xué) 的 方 法 ,按 照 考 夫 曼 -懷 特 沙 門 氏 菌屬

18、 抗 原 表 解 判 定 菌 型 . 考 夫 曼 -懷 特 沙 門 氏 菌 屬 抗 原 表 內(nèi) 的 O抗 原 可 能 存 在 或 不 存 在 。 內(nèi) 的 H抗 原 可 能 是 罕 見 的 ， 正 常 情 況 下 一 般 不 存 在 。菌 名 原 名 O抗 原 H抗 原第 1相 第 2相基 桑 加 尼 沙 門 氏 菌 S. kisangani 1,4,5,12 a 1,2維 也 納 沙 門 氏 菌 S. wien 1,4.12,27 b 1,w埃 森 沙 門 氏 菌 S. essen 4,12 g, m -金 斯 敦 沙 門 氏 菌 S. kingston 1,4,5,12,27 g, s, t

19、 1,2鼠 傷 寒 沙 門 氏 菌 S. typhimurium 1,4,5,12 i 1,2 印 地 安 納 沙 門 氏 菌 S. indiana 1,4,12 z 1,7 沙 門 氏 菌 的 血 清 鑒 定 的 方 法 用 O、 H 和 Vi因 子 血 清 與 待 檢 的 菌 株 作 玻 片 凝 聚試 驗 。1.先 用 O因 子 血 清 確 定 菌 株 所 屬 的 O群 及 O抗 原 的各 種 成 分 。2.再 用 H因 子 血 清 檢 查 其 第 1相 和 第 2相 的 H抗 原 以確 定 血 清 型 。3.必 要 時 還 要 用 Vi血 清 檢 查 (目 前 有 3種 )。 1 . 先

20、 用 AF多 價 O血 清 檢 查 ， 確 定 菌 株 是 否 在 AF六 個 O群 的 范 圍 內(nèi) 。2. 再 用 代 表 六 個 O群 的 O因 子 血 清 檢 查 ， 即 O2（ A） 、 O4（ B） 、 O7（ C1） 、 O8（ C2） 、 O9（ D） 、O3， 10（ E） 、 O11（ F） 。3. 確 定 O群 之 后 ， 分 別 用 HA(a、 b、 c、 d、 i、 z10、 z29） HB、 HC、 HD四 種 多 價 H血 清 檢 查 。4. 用 3.所 確 定 的 多 價 H血 清 所 包 括 的 所 有 H因 子 血 清 逐 一 檢 查 定 為 第 1相 或 第

21、 2相 H抗 原 。5. 檢 出 第 1相 H抗 原 而 未 檢 出 第 2相 H抗 原 ， 或 檢 出 第 2相 H抗 原 而 未 檢 出 第 1相 H抗 原 的 ， 要 用 位相 變 異 的 方 法 再 檢 查 其 另 一 個 相 。 單 相 菌 不 必 作 位 相 變 異 檢 查 。6. 綜 合 O和 H因 子 血 清 以 及 Vi因 子 血 清 的 檢 查 結(jié) 果 ， 按 照 考 夫 曼 -懷 特 沙 門 氏 菌 屬 抗 原 表 解 判 定沙 門 氏 菌 的 菌 型 。沙 門 氏 菌 的 血 清 型 鑒 定 步 驟 位 相 變 異 的 解 釋 將 一 個 雙 相 沙 門 氏 菌 的 菌

22、 株 在 瓊 脂 平 板 上 劃 線 分 離 ， 所得 的 菌 落 中 ， 有 的 有 第 1相 H抗 原 ， 有 的 則 有 第 2相 H抗 原 。若 任 意 挑 取 一 個 菌 落 在 培 養(yǎng) 基 上 多 次 傳 代 ， 其 后 代 又 可出 現(xiàn) 部 分 是 第 1相 而 另 一 部 分 是 第 2相 的 菌 落 。 這 種 兩 個相 的 H抗 原 可 以 交 相 產(chǎn) 生 的 現(xiàn) 象 稱 為 位 相 變 異 。 雙 相 菌 初 次 分 離 時 ， 單 個 菌 落 的 純 培 養(yǎng) 往 往 只 有 一 個 相H抗 原 ， 鑒 別 時 常 只 能 檢 出 一 個 相 ， 而 測 不 出 另 一

23、相 。此 時 ， 可 用 已 知 相 血 清 誘 導(dǎo) 的 位 相 變 異 試 驗 來 獲 得 未 知的 另 一 個 相 H抗 原 。 位 相 變 異 試 驗 的 方 法 簡 易 平 板 法1.配 制 0.70.8%的 半 固 體 瓊 脂 培 養(yǎng) 基 。2.在 平 板 內(nèi) 滴 上 一 滴 已 知 的 第 1相 或 第 2相 血 清 因 子 ， 并 作 好 標(biāo) 記 。3.然 后 傾 注 平 板 并 烘 干 表 面 水 分 ， 在 標(biāo) 記 部 位 的 中 間 點 種 已 知 第1相 或 第 2相 的 新 鮮 待 檢 菌 株 。4.培 養(yǎng) 后 ， 其 已 知 相 細(xì) 菌 的 動 力 受 到 抑 制 ，

24、 解 離 出 另 一 相 的 細(xì) 菌 ，并 向 周 圍 蔓 延 生 長 ， 形 成 一 個 大 的 菌 落 。5.檢 查 其 菌 落 的 邊 緣 部 分 ， 即 可 確 定 該 菌 株 的 另 一 相 H抗 原 。6.該 方 法 通 常 13天 內(nèi) 可 以 有 結(jié) 果 。 位 相 變 異 試 驗 的 其 余 方 法 U形 管 法 小 玻 管 法 小 套 管 法 軟 瓊 脂 斜 面法 5 9 種 沙 門 氏 菌 的 血 清 列 表O1 O2 O4 O5 O7 O8 O9 O10 O11 O14O15 O19 O20 O27 O34 O46 O3,19 Ha Hb HcHd Hf Hg Hh Hi Hk Hm Hn Hp HrHs Ht Hu Hv Hw Hx Hy Hz Hz6 Hz10Hz 13 Hz15 Hz28 Hz29 H2 H5 H6 H7 Heh HgpHlv HA HB HC HD Vi A-F群 多價 O A-F群 多價 O Henx H1.2.3.5