狂犬病實驗室診斷分析：重慶狂犬疫苗抗體檢測

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1、泓域健康/重慶狂犬抗體檢測 狂犬病實驗室診斷分析 一、 狂犬病實驗室診斷 病人發(fā)病后（死亡前）可采集其唾液（間隔3-6小時，至少采集3份）、腦脊液、血清及頸后帶毛囊的小塊皮膚；病人死后最好采集其腦組織標本（小腦和腦干）進行實驗室檢測。 直接免疫熒光法是狂犬病診斷的金標準，可以快速、敏感、特異地檢測人和動物腦組織中的病毒抗原。臨床病例活體組織標本（如頸后部皮膚毛囊）亦可進行DFA檢測。直接快速免疫組化法及酶聯(lián)免疫吸附測定法亦可特異檢測狂犬病病毒抗原。 病毒核酸檢測可用于早期診斷，以逆轉錄PCR法檢測體液（唾液、血清等）和腦組織等標本，但需要嚴格的質量控制以保證結果的準確性。腦組織及唾液

2、等病毒含量高的樣本還可進行病毒分離。細胞培養(yǎng)分離所需時間（1-2天）遠少于小鼠顱內接種分離法所需時間（10-21天），且前者的生物安全風險遠小于后者。 未接種過疫苗的患者，發(fā)病早期幾乎沒有中和抗體產(chǎn)生，到發(fā)病晚期（通常在臨床癥狀出現(xiàn)后7-8天），病毒在腦內大量增殖后突破血腦屏障進入血液，刺激機體產(chǎn)生低水平的中和抗體。通過病毒中和試驗檢測病人血清或腦脊液中的中和抗體，可作為狂犬病診斷的依據(jù)之一。 世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的抗狂犬病病毒中和抗體標準檢測方法包括快速熒光灶抑制試驗（RFFIT）和小鼠腦內中和試驗（MNT）。由于RFFIT法無需使用小鼠，所用時間短（24小時），目前已被廣泛采用。

3、RFFIT方法也是我國現(xiàn)行藥典規(guī)定的檢測狂犬病病毒中和抗體的標準方法之一。此外，常用的狂犬病病毒中和抗體檢測方法還有熒光抗體病毒中和試驗（FAVNT）。用ELISA法測定的抗狂犬病病毒糖蛋白抗體滴度與用病毒中和試驗測定的結果有一定的相關性（約80%符合率），但相應試劑盒尚未普及。 此外，還可以通過檢測中和抗體，監(jiān)測暴露前抗體背景及暴露后疫苗注射的免疫效果。WHO狂犬病專家咨詢委員會認為：中和抗體水平等于或高于0．5IU/ml時，接種者才具備了有效的保護能力；如果發(fā)現(xiàn)中和抗體水平低于0．5IU/ml，應進行加強免疫，至達到有效保護水平為止。分析 二、 中國RABV的動物系統(tǒng)發(fā)育與進化分析

4、科研人員從177個陽性腦組織樣本中總共擴增到了108個完整的N基因。在這些樣本中，科研人員分析并選擇了代表不同年份，動物種類，疫情程度和地點的78種，連同來自中國以及鄰國和其他國家的222種參考序列進行系統(tǒng)發(fā)育特征分析。結果發(fā)現(xiàn)，中國動物RABV分布在4個主要的進化枝中：亞洲（Asian），世界性（Cosmospolitan），北極相關（Arctic-related）和印度次大陸（IndianSubcontinent），以及這些進化分枝中不同的子分枝。其中，亞洲進化枝是最普遍的進化枝，廣泛分布于中國和東南亞國家，具有豐富的遺傳多樣性，主要通過狗傳播。通過查閱文獻研究人員發(fā)現(xiàn)，雪貂獾（ferrt

5、ebadger）RABV具有豐富的遺傳多樣性，但這僅在中國有報道。印度次大陸的進化枝在中國還沒有被發(fā)現(xiàn)，直到2017年在靠近尼泊爾的西藏邊境地區(qū)發(fā)現(xiàn)了由一只當?shù)亓骼斯芬娜祟惒±?，仍然是迄今為止在中國確認的唯一的印度次大陸分支RABV。 緊接著，研究人員利用對于不同亞類的時間排序，重新定位了1969-2018年期間分離的具有代表性的1，118個中國毒株。其中55個中國RABV序列在1969年（最早提交）至2003年分離。自2004年開始進行官方狂犬病監(jiān)測后，提交給GenBank的基因序列表明，大多數(shù)狂犬病爆發(fā)是由亞洲毒株（93．3%）引起的，其他3種毒株的參與有限。在亞洲類群中，SEA1亞

6、類群在中國狂犬病毒株中占主導地位（70．1%），其次是SEA2（16．7%）。 此外，緬甸、泰國、老撾和越南的許多SEA3毒株在遺傳上接近中國云南和廣西流通的一些毒株，這表明SEA3毒株可能由中國傳播至接壤的國家和地區(qū)。在中國與哈薩克斯坦、俄羅斯、蒙古和韓國之間的邊境地區(qū)也發(fā)現(xiàn)了同樣的傳播跡象。這種相似性令人擔憂，因為中國周圍有14個毗鄰的國家，所有這些國家都有狂犬病流行，在這些國家中，人們尚未對狂犬病的遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育特征進行充分研究。 在中國，狂犬病是一個重大的公共衛(wèi)生問題，2015－2018年更是導致每年幾百人死亡。超過95%的人類狂犬病病例來源于患狂犬病的狗。相比之下，中國報告

7、的動物狂犬病病例數(shù)卻遠低于人類狂犬病病例數(shù)；僅有幾個省、自治區(qū)或直轄市的動物狂犬病病例報告給國家獸醫(yī)當局，且報告中國動物傳染病月度信息的唯一官方雜志是《獸醫(yī)通報（VeterinaryBulletin）》。即便如此，這類零星的研究仍表明野生動物狂犬病在赤狐（VulpesVulpes），貉（Nyctereutesprocyonoides）和鼬獾中都有增加。 三、 狂犬疫苗市場需求大，前景廣闊 （一）國內寵物管理規(guī)模持續(xù)擴大 在單身經(jīng)濟、居民收入增加和資本的共同推動下，我國寵物市場規(guī)模持續(xù)擴張，其中城鎮(zhèn)犬貓市場的規(guī)模達到2490億元，同比增長20．6%，城鎮(zhèn)犬貓數(shù)量合計11235萬只，其中貓5

8、806萬只，犬5429萬只。據(jù)相關研究機構預測：2022年中國寵物數(shù)量可達2．2億只，我國城鎮(zhèn)寵物（犬貓）主達到6844萬多人。雖然我國寵物數(shù)量基數(shù)大，但是寵物疫苗市場滲透率不足3%，與國外發(fā)達國家40%的水平還有很大差距，行業(yè)整體處于培育階段。 隨著人們飼養(yǎng)寵物習慣的逐漸興起，我國寵物數(shù)量呈逐年增長趨勢，未來隨寵物市場規(guī)模的擴大、犬貓等寵物咬傷潛在風險的提升以及暴露前免疫知識的普及，人用狂犬病疫苗潛在市場將進一步提升。 （二）狂犬病至今尚無特效治療方法，狂犬疫苗產(chǎn)品市場前景廣闊 狂犬病是世界上病死率最高的疾病，一旦發(fā)病，病死率接近100%，至今尚無特效治療方法。國內狂犬病疫苗屬于剛性疫

9、苗。近年來，國內人用狂犬病疫苗每年的批簽發(fā)總數(shù)量維持在6，000-8，000萬支，即1，200-1，600萬人份，整體批簽發(fā)量基數(shù)較大。我國人用狂犬病疫苗市場規(guī)模從2015年的16．8億元增長至2018年的28．4億元，期間年復合增長率保持19．1%的較高增速，國際權威機構Frost&Sullivan預計到2023年我國人用狂犬病疫苗市場規(guī)模將達到42．5億元。 四、 狂犬病疫苗批簽發(fā)量呈現(xiàn)平穩(wěn)波動的態(tài)勢 由于狂犬病患病高死亡率，狂犬病疫苗使用接種尤為剛性，人用狂犬病疫苗是我國常年批簽發(fā)量較大的疫苗品種之一。近年來，國內狂犬疫苗每年的批簽發(fā)總量維持在6000-8000萬支，即1200-16

10、00萬人份（4-5針/人份），2020年我國全年批簽發(fā)各類狂犬疫苗大約8238萬劑，較2019年同期增長40．04%。2021年第一季度，狂犬病疫苗批簽發(fā)量為1439萬支，同比增長30．19%。 五、 狂犬病病死率高危害極大 狂犬病是一種危害極大的病毒性人畜共患病，它是有史以來病死率最高的疾?。ú∷缆蕿?00%），狂犬病在全世界絕大多數(shù)國家均有流行，世界衛(wèi)生組織估計全球每年因狂犬病死亡達5．9萬人。根據(jù)中國疾控中心統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，2020年，中國人間狂犬病發(fā)病數(shù)為202例，死亡人數(shù)為188人，病死率較高。2021年1月至3月，中國人間狂犬病發(fā)病書為13人，死亡12人，病死率較高。 六、 凍

11、干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）批簽發(fā)量較多 按照培養(yǎng)基質分品種進行統(tǒng)計，目前Vero細胞狂犬病疫苗是主流產(chǎn)品。凍干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）的批簽發(fā)量為6201．29萬支，市占率為75．27%;人用狂犬病疫苗（Vero細胞）的批簽發(fā)量為1103．18萬支，市占率為13．39%;地鼠腎細胞狂犬病疫苗的批簽發(fā)量為534．57萬支，市占率為6．49%;最后是人二倍體細胞狂犬病疫苗的批簽發(fā)量為399．31萬支，市占率為4．85%。 由此來看，二代狂犬病疫苗（Vero細胞基質）仍然占據(jù)主導地位，三代狂犬病疫苗（人二倍體細胞基質）正在逐步崛起。 七、 狂犬疫苗企業(yè)競爭格局：遼寧成大批簽發(fā)量較多 從供應企業(yè)來看，遼寧成大憑借產(chǎn)能優(yōu)勢占據(jù)著過半的市場份額。我國生產(chǎn)狂犬疫苗的企業(yè)有遼寧成大、廣州諾誠、寧波榮安、河南遠大等。 其中遼寧成大占據(jù)狂犬疫苗市場的批簽發(fā)量占比達到47．2%;其次，寧波榮安與大連雅立峰的批簽發(fā)量占比分別為24．7%和7．5%;此外，成都康華三代狂犬疫苗的批簽發(fā)量占比為4．7%。