2019-2020年高中生物 1.2基因工程的原理和技術(shù)課時作業(yè)（含解析）浙科版選修3.doc

2019-2020年高中生物 1.2基因工程的原理和技術(shù)課時作業(yè)（含解析）浙科版選修3目標(biāo)導(dǎo)航1.簡述基因工程的原理。2.描述基因工程操作的幾個步驟。3.舉例說出篩選含有目的基因的受體細(xì)胞的原理。一、基因工程的基本原理1基本原理：讓人們感興趣的基因(_)在_中穩(wěn)定和高效表達(dá)。2基因工程的基本要素：多種_、_、_和_等。 二、基因工程的基本操作步驟1獲得目的基因(1)目的基因：人們所_，如人的胰島素基因、植物的抗病基因等。(2)獲取方法如果目的基因的序列是已知的，可用_合成目的基因，或者用_(PCR)擴(kuò)增目的基因。如果目的基因的核苷酸序列是未知的，可以從_中獲取。2形成重組DNA分子用_的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNA(如質(zhì)粒)，使其產(chǎn)生相同的_，然后用_將兩者連接在一起，形成_。3將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞(1)常用的受體細(xì)胞：_、枯草桿菌、_和動植物細(xì)胞等。(2)導(dǎo)入方法舉例：用質(zhì)粒作為載體，宿主細(xì)胞應(yīng)該選擇_，用_處理大腸桿菌，增加其細(xì)胞壁的_，使含有目的基因的重組質(zhì)粒進(jìn)入大腸桿菌宿主細(xì)胞。4篩選含有目的基因的受體細(xì)胞(1)篩選原因：不是所有細(xì)胞都接納了_。(2)篩選方法舉例：由于質(zhì)粒上有抗生素抗性基因如_，所以含有這種重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞能夠在_的培養(yǎng)基中生長，而沒有接納重組DNA分子的細(xì)胞則不能在這種培養(yǎng)基上生長。經(jīng)過培養(yǎng)，_能夠和質(zhì)粒一起在宿主細(xì)胞內(nèi)大量_。5目的基因的表達(dá)：目的基因在_中表達(dá)，產(chǎn)生人們需要的_。知識點(diǎn)一獲得目的基因的方法1下列屬于獲得目的基因方法的是()利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成從基因文庫中提取從受體細(xì)胞中提取利用PCR技術(shù)利用DNA轉(zhuǎn)錄人工合成A BC D2下列屬于PCR技術(shù)所需條件的是()單鏈的核苷酸序列引物目的基因所在的DNA片段脫氧核苷酸核糖核苷酸DNA連接酶DNA聚合酶DNA限制酶A BC D知識點(diǎn)二形成重組DNA分子和導(dǎo)入受體細(xì)胞3要想將目的基因插入作為載體的質(zhì)粒中，在操作中應(yīng)選用()ADNA連接酶B同一種限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶C限制性核酸內(nèi)切酶D不同的限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶4將ada(腺苷酸脫氨酶基因)通過質(zhì)粒pET28b導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是()A每個大腸桿菌細(xì)胞至少含一個重組質(zhì)粒B每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酸識別位點(diǎn)C每個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點(diǎn)至少插入一個adaD每個插入的ada至少表達(dá)一個腺苷酸脫氨酶分子知識點(diǎn)三篩選含有目的基因的受體細(xì)胞和目的基因的表達(dá)5在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草過程中，下列操作錯誤的是()A用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸B用DNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體C將重組DNA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體D用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞知識點(diǎn)四基因工程的全過程6回答有關(guān)基因工程的問題：(1)構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生_末端。若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生_(相同、不同)粘性末端的限制酶。(2)利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時，構(gòu)建的重組DNA含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是_。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，常用_處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為_。為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成_，常用抗原抗體雜交技術(shù)。(3)如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的_中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的_上?；A(chǔ)落實(shí)1人們常選用的細(xì)菌質(zhì)粒分子往往帶有一個抗菌素抗性基因，該抗性基因的主要作用是()A提高受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐藥性B對目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測C增加質(zhì)粒分子的分子量D便于與外源基因連接2下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是()從基因文庫中獲取目的基因利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因反轉(zhuǎn)錄法通過DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成目的基因A B C D3正確表示基因操作“五步曲”的是()A目的基因的獲得重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞重組DNA的形成篩選含有目的基因的受體細(xì)胞目的基因的表達(dá)B目的基因的表達(dá)目的基因的獲得重組DNA的形成重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞篩選含有目的基因的受體細(xì)胞C目的基因的獲得重組DNA的形成重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞篩選含有目的基因的受體細(xì)胞目的基因的表達(dá)D重組DNA的形成目的基因的獲得重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞篩選含有目的基因的受體細(xì)胞目的基因的表達(dá)4下列有關(guān)基因工程技術(shù)的正確敘述是()A重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶、載體B為育成抗除草劑的作物新品種，導(dǎo)入抗除草劑基因時只能以受精卵為受體細(xì)胞C選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快D只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功表達(dá)5用基因工程技術(shù)可使大腸桿菌合成人的蛋白質(zhì)。下列敘述不正確的是()A常用相同的限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和質(zhì)粒BDNA連接酶和RNA聚合酶是構(gòu)建重組質(zhì)粒必需的工具酶C可用含抗生素的培養(yǎng)基檢測大腸桿菌中是否導(dǎo)入了重組質(zhì)粒D導(dǎo)入大腸桿菌的目的基因不一定能成功表達(dá)6利用外源基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，可生產(chǎn)人類所需要的產(chǎn)品。下列能說明目的基因完成了在受體細(xì)胞中表達(dá)的是()A棉花二倍體細(xì)胞中檢測到細(xì)菌的抗蟲基因B大腸桿菌中檢測到人胰島素基因及mRNAC山羊乳腺細(xì)胞中檢測到人生長素DNA序列D酵母菌細(xì)胞中提取到人干擾素蛋白能力提升7質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體，它存在于許多細(xì)菌體內(nèi)，某細(xì)菌質(zhì)粒上的標(biāo)記基因如圖所示，通過標(biāo)記基因可以推知外源基因(目的基因)是否轉(zhuǎn)移成功。外源基因插入的位置不同，細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長情況也不同，如圖所示外源基因在質(zhì)粒中可插入的位置有a、b、c點(diǎn)。某同學(xué)根據(jù)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象對其插入的位點(diǎn)進(jìn)行分析，其中分析正確的是()實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)推論在含青霉素培養(yǎng)基上的生長情況在含四環(huán)素培養(yǎng)基上的生長情況目的基因插入的位置A能生長能生長aB不能生長能生長bC能生長不能生長cD不能生長不能生長c8.科學(xué)家通過基因工程的方法，能使馬鈴薯塊莖含有人奶蛋白。以下有關(guān)該基因工程的敘述，錯誤的是()A采用反轉(zhuǎn)錄的方法可得到目的基因B基因的某些非編碼區(qū)對于目的基因在塊莖中的表達(dá)是不可缺少的C馬鈴薯的葉肉細(xì)胞可作為受體細(xì)胞D用不同種限制酶分別處理質(zhì)粒和含目的基因的DNA，可產(chǎn)生相同的粘性末端而形成重組DNA分子9如圖表示基因工程中獲取水稻某目的基因的不同方法。相關(guān)敘述中正確的是()A這三種方法都用到酶，都是在體外進(jìn)行B堿基對的排列順序均相同C片段均不含內(nèi)含子，但含非編碼區(qū)D方法a不遵循中心法則10人們試圖利用基因工程的方法，用乙種生物生產(chǎn)甲種生物的一種蛋白質(zhì)。生產(chǎn)流程是：甲生物的蛋白質(zhì)的mRNA目的基因與質(zhì)粒DNA重組導(dǎo)入乙細(xì)胞獲得甲生物的蛋白質(zhì)，下列說法正確的是()A過程需要的酶是反轉(zhuǎn)錄酶，原料是A、U、G、CB要用限制酶切斷質(zhì)粒DNA，再用DNA連接酶將目的基因與質(zhì)粒連接在一起C如果受體細(xì)胞是細(xì)菌，可以選用枯草桿菌、炭疽桿菌等D過程中用的原料不含有A、U、G、C11.以重組DNA技術(shù)為核心的基因工程正在改變著人類的生活。請回答下列問題：(1)獲得目的基因的方法通常包括_和_。(2)切割和連接DNA分子所使用的酶分別是_和_。(3)運(yùn)送目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體一般選用病毒或_，后者的形狀成_。(4)由于重組DNA分子成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的頻率_，所以在轉(zhuǎn)化后通常需要進(jìn)行_操作。(5)將人胰島素基因分別導(dǎo)入大腸桿菌與酵母菌，從兩者中生產(chǎn)的胰島素在功能和_序列上是相同的。綜合拓展12回答下列有關(guān)基因工程的問題：(1)基因工程中使用的限制酶，其特點(diǎn)是_。下圖四種質(zhì)粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。(2)將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質(zhì)粒X1混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有_。(可多選)AX1 BX2 CX3 DX4(3)若將上圖所示X1、X2、X3、X4四種質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，然后分別涂布在含有青霉素或四環(huán)素的兩種培養(yǎng)基上。在這兩種培養(yǎng)基上均不能生長的大腸桿菌細(xì)胞類型有_、_。(4)如果X1用E1酶切，產(chǎn)生850對堿基和3 550對堿基兩種片段：那么質(zhì)粒X2(Tcr基因的長度為1 200對堿基)用E2酶切后的片段長度為_對堿基。(5)若將外源的Tcr基因兩端用E2切開，再與用E2切開的X1混合鏈接，并導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞，結(jié)果顯示，含X4的細(xì)胞數(shù)與含X1的細(xì)胞數(shù)之比為13，增大DNA連接酶用量能否提高上述比值？_。原因是_。第2課時基因工程的原理和技術(shù)答案知識清單一、1.目的基因宿主細(xì)胞2.工具酶目的基因載體宿主細(xì)胞二、1.(1)需要的基因(2)化學(xué)方法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)基因文庫2.相同粘性末端DNA連接酶重組DNA分子3.(1)大腸桿菌酵母菌(2)大腸桿菌氯化鈣通透性4.(1)重組DNA分子(2)四環(huán)素抗性基因四環(huán)素目的基因擴(kuò)增5.宿主細(xì)胞功能物質(zhì)對點(diǎn)訓(xùn)練1D目的基因應(yīng)該是從供體細(xì)胞中提取，導(dǎo)入受體細(xì)胞中，而不能從受體細(xì)胞中提取，所以不是獲取目的基因的方法；利用DNA轉(zhuǎn)錄出來的是RNA，但目的基因是DNA，所以不能用DNA轉(zhuǎn)錄來獲取目的基因，不正確。思路導(dǎo)引思考獲取目的基因的方法對照選項逐一排查判斷得出正確答案。知識鏈接獲得目的基因的方法(1)從基因文庫中獲得(2)人工合成目的基因已知核苷酸序列的較小基因，直接利用DNA合成儀，用化學(xué)方法合成，不需要模板。反轉(zhuǎn)錄法：利用已知的mRNA為模板，反轉(zhuǎn)錄獲取目的基因。(3)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因原理：利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，在體外將基因的核苷酸序列不斷地加以復(fù)制，使其數(shù)量成指數(shù)方式增加。過程：如圖所示a從上圖中可以看出利用設(shè)計的特異性引物對基因文庫進(jìn)行PCR擴(kuò)增，提取出了相應(yīng)的目的基因，而不是對基因文庫進(jìn)行簡單、全面地復(fù)制。b由于DNA聚合酶不能從頭合成DNA，只能從3端延伸DNA鏈，故目的基因的擴(kuò)增需要引物。引物是一小段單鏈DNA或RNA。加入引物后，DNA聚合酶能從引物的3端開始延伸DNA鏈。2BPCR技術(shù)的條件有：模板(即已知序列的DNA片段)、原料(即四種脫氧核苷酸)、酶(耐高溫的DNA聚合酶)和ATP，至于引物，是根據(jù)模板合成的一小段單鏈DNA或RNA。思路導(dǎo)引了解PCR為體外復(fù)制DNA片段的核酸技術(shù)對比與DNA體內(nèi)復(fù)制的異同確定PCR技術(shù)所需的條件。歸納提升PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因與DNA復(fù)制的比較PCR技術(shù)DNA復(fù)制相同點(diǎn)原理堿基互補(bǔ)配對原料四種脫氧核苷酸條件模板、ATP、酶不同點(diǎn)解旋方式DNA在高溫下變性解旋解旋酶催化場所體外復(fù)制主要在細(xì)胞核內(nèi)酶熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Taq酶)細(xì)胞內(nèi)含有的DNA聚合酶結(jié)果在短時間內(nèi)形成大量的DNA片段形成整個DNA分子3.B用同一種限制酶切取目的基因和質(zhì)粒，才能使目的基因和質(zhì)粒產(chǎn)生相同的粘性末端，然后再用DNA連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接起來。思路導(dǎo)引構(gòu)建重組質(zhì)粒一個是需要“切”，一個是需要“接”。要順利的“接”必須要有相同的粘性末端方可。知識鏈接重組DNA分子的構(gòu)建(1)目的基因是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因，沒有啟動子，若只將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中無法轉(zhuǎn)錄。(2)目的基因的表達(dá)需要調(diào)控序列，因而用做載體的質(zhì)粒插入目的基因時須有啟動子，插入后須有終止子。(3)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞中需要有篩選標(biāo)記標(biāo)記基因。因此，一個重組DNA分子的組成至少應(yīng)該包括：啟動子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因。4C大腸桿菌成功表達(dá)出腺苷酸脫氨酶，說明這些大腸桿菌都至少含有一個重組質(zhì)粒，A項正確；作為載體的條件為至少含有一個或多個酶切位點(diǎn)，所以作為載體的質(zhì)粒至少含有一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點(diǎn)，B項正確；作為重組DNA分子應(yīng)包括目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因四部分，但并不是每個酶切位點(diǎn)都至少插入一個ada，C項錯誤；由于這些目的基因成功表達(dá)，所以每個ada至少表達(dá)一個腺苷酸脫氨酶分子，D項正確。思路導(dǎo)引本題考查基因工程的應(yīng)用，意在考查考生對知識的理解能力、綜合運(yùn)用能力。知識拓展(1)受體細(xì)胞不同導(dǎo)入的方法不同生物種類植物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法Ca2處理法受體細(xì)胞受精卵或體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程重組DNA分子農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞整合到受體細(xì)胞的DNA表達(dá)重組DNA分子提純?nèi)÷?受精卵)顯微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的動物Ca2處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞重組DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子特別提醒目前導(dǎo)入植物細(xì)胞的方法還有花粉管通道法和基因槍法。(2)目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的結(jié)果上圖中發(fā)生與發(fā)生相比，會使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)，原因是在進(jìn)行細(xì)胞分裂時，細(xì)胞核上的DNA經(jīng)復(fù)制后平均分配到兩個子細(xì)胞中，保證了親子代遺傳性狀的穩(wěn)定性，而細(xì)胞分裂時，細(xì)胞質(zhì)是不均分的，子細(xì)胞不一定含有目的基因。5A基因工程的一般過程：用限制性核酸內(nèi)切酶切割含目的基因的DNA分子(除草劑基因)和載體(質(zhì)粒)；用DNA連接酶連接切割好的目的基因和載體；重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，因?yàn)槭侵参锟梢哉f是原生質(zhì)體；用相應(yīng)的試劑和病原體篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞；用植物組織培養(yǎng)技術(shù)篩選抗體除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草(表達(dá))。思路導(dǎo)引思考：限制酶識別的是DNA，還是RNA？基因工程的操作過程怎樣？知識鏈接篩選含有目的基因的受體細(xì)胞(1)原理：質(zhì)粒上有抗生素的抗性基因。(2)方法：利用選擇培養(yǎng)基篩選。(3)舉例6(1)平相同(2)RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)Ca2DNA分子雜交技術(shù)人胰島素(3)TDNA染色體的DNA解析(1)限制酶能識別特定的DNA序列，并在特定位點(diǎn)上切割DNA，形成粘性末端或平末端；要使目的基因和質(zhì)粒直接進(jìn)行連接，應(yīng)使用同一種限制酶進(jìn)行切割，使二者產(chǎn)生相同的粘性末端。(2)啟動子為DNA序列，其具有RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)，能啟動轉(zhuǎn)錄，合成RNA；將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌時，常用Ca2處理；檢測目的基因時，常用分子雜交技術(shù)檢測目的基因或相應(yīng)的mRNA，或采用抗原抗體雜交技術(shù)鑒定相應(yīng)的蛋白質(zhì)。(3)用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時，首先將目的基因?qū)朕r(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的TDNA中，再利用農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的染色體的DNA上。知識鏈接基因工程的圖解舉例(1)抗蟲棉的培育過程(2)利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)凝乳酶的過程課后作業(yè)1B重組DNA必須具有標(biāo)記基因，其目的就是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。2DPCR利用的是DNA雙鏈復(fù)制原理，即將雙鏈DNA之間的氫鍵打開，變成單鏈DNA，作為聚合反應(yīng)的模板鏈。反轉(zhuǎn)錄法則是以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，先反轉(zhuǎn)錄形成互補(bǔ)的單鏈DNA，再合成雙鏈DNA。則不需要模板。3C基因操作“五步曲”包括：目的基因的獲得，重組DNA的形成，重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞，篩選含有目的基因的受體細(xì)胞和目的基因的表達(dá)。4CA項中的載體不是酶；B項中的受體細(xì)胞常用受精卵，但有時也可用植物體細(xì)胞；D項中，目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞并不一定能成功表達(dá)。5B基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是構(gòu)建重組質(zhì)粒必需的工具酶。質(zhì)粒作為載體必須具有標(biāo)記基因，導(dǎo)入的目的基因不一定能成功表達(dá)，還要進(jìn)行修飾或者其他處理。6D基因的表達(dá)是指基因使遺傳信息以一定的方式反映到蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)上這一過程，即必須獲得相應(yīng)的蛋白質(zhì)才能說明基因完成了表達(dá)。只有D得到了蛋白質(zhì)。7B若質(zhì)粒上插入的位置在c點(diǎn)，那么抗四環(huán)素基因和抗青霉素基因都沒有被破壞，導(dǎo)入該重組質(zhì)粒的細(xì)菌在含青霉素的培養(yǎng)基和在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上均能生長。8D采用反轉(zhuǎn)錄的方法得到目的基因的過程是以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需要的目的基因。由于信使RNA中沒有與內(nèi)含子相對應(yīng)的部分，所以采用反轉(zhuǎn)錄的方法得到的目的基因不存在內(nèi)含子?；蚍蔷幋a區(qū)對于基因的表達(dá)具有調(diào)控作用。植物細(xì)胞的全能性很容易得到表達(dá)，所以轉(zhuǎn)基因植物培育過程中的受體細(xì)胞可以是植物的體細(xì)胞。限制酶具有專一性，只有用同一種限制酶處理才能獲得相同的粘性末端，才能夠形成重組DNA分子。9A由圖示可知a為反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因，用到反轉(zhuǎn)錄酶；b為直接從生物體獲得目的基因，用到限制酶；c為用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲取目的基因，用到Taq酶，且三種方法均在生物體外進(jìn)行，故A正確。因水稻為真核生物，所以中含內(nèi)含子，但方法a獲得的目的基因內(nèi)無內(nèi)含子序列，所以B、C錯誤。方法a遵循中心法則，D錯誤。10B過程是反轉(zhuǎn)錄，利用反轉(zhuǎn)錄酶合成DNA片段，所需要的原料含有A、T、G、C；是目的基因與質(zhì)粒DNA重組階段，需要限制酶切斷質(zhì)粒DNA，再用DNA連接酶將目的基因與質(zhì)粒連接在一起；如果受體細(xì)胞是細(xì)菌，則不應(yīng)該用致病菌，而炭疽桿菌是致病菌；過程是基因的表達(dá)過程，原料中含有A、U、G、C。11(1)從基因文庫提取酶切獲取(從染色體DNA分離/從生物細(xì)胞分離)(2)限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)DNA連接酶(3)質(zhì)粒小型環(huán)狀(雙鏈環(huán)狀、環(huán)狀)(4)低篩選(5)氨基酸解析(1)獲取目的基因的方法可以歸納為兩種：一是從供體生物中提取或從基因文庫中提?。欢侨斯ず铣?。(2)基因工程中的工具酶有切割DNA分子的限制性核酸內(nèi)切酶和連接DNA分子的DNA連接酶。(3)載體一般常用質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒，其中質(zhì)粒最為常用，是很小的環(huán)狀DNA分子。(4)重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞頻率較低，所以要利用表達(dá)載體上的標(biāo)記基因進(jìn)行篩選。(5)由于所有生物共用一套密碼子，所以基因工程中表達(dá)的蛋白質(zhì)與自然狀態(tài)蛋白質(zhì)的氨基酸序列是相同的。12(1)特異性地識別和切割DNA(2)ABC(3)無質(zhì)粒細(xì)胞含X3的細(xì)胞(4)4 750(5)不能DNA連接酶對DNA片段沒有選擇性；兩段DNA末端相同解析(1)限制酶的功能及特點(diǎn)是：特異性地識別核苷酸序列并在特定位點(diǎn)將磷酸二酯鍵斷開；(2)用E1酶切得的Tcr基因，X1質(zhì)粒的粘性末端均相同，所以混合后會出現(xiàn)X1、X2、X3三種不同的連接方式；(3)質(zhì)粒X3上無抗生素抗性基因，所以導(dǎo)入該質(zhì)粒的大腸桿菌及無質(zhì)粒導(dǎo)入的大腸桿菌場合被抗生素殺死。(4)質(zhì)粒X1被E1酶切割后產(chǎn)生的一長一短兩種片段，即圖中，Apr片段為850對堿基，剩余部分為3 550對堿基。E2酶切X2只產(chǎn)一種片段，其長度為3 550對堿基Tcr的1 200對堿基4 750對堿基。(5)由于E2酶切割質(zhì)粒X1與切割Tcr基因產(chǎn)生的粘性末端相同，且DNA連接酶的連接作用無選擇性，所以增大DNA連接酶的用量，不會改變連接比值。