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1、實 驗 一 毛 細 血 管 采 血 白 細 胞 計 數(shù)臨 床 檢 驗 基 礎(chǔ) 實 驗王 梅江 蘇 大 學 基 礎(chǔ) 醫(yī) 學 與 醫(yī) 學 技 術(shù) 學 院臨 床 檢 驗 與 輸 血 教 研 室 第 一 部 分 毛 細 血 管 采 血 毛 細 血 管 采 血 即 皮 膚 采 血 法 ， 主 要 用 于 需 血 量 微 小 的 檢 查 項目 。 所 獲 得 的 末 稍 血 不 單 純 是 毛 細 血 管 血 ， 實 際 是 是 微 動 脈 、 微靜 脈 和 毛 細 血 管 的 混 合 血 ， 并 依 采 血 時 擠 壓 的 力 度 不 同 含 有 少 量細 胞 間 質(zhì) 和 細 胞 內(nèi) 液 。 毛 細 血
2、 管 采 血 器 具采 血 筆 采 血 筆 結(jié) 構(gòu) 示 意 圖 采 血 筆 的 使 用擰 下 采 血 筆 前 端 筆 帽 安 裝 采 血 針 采 血 采血針 1、 準 備 材 料2、 選 擇 采 血 部 位3、 按 摩 皮 膚4、 消 毒 皮 膚 用 75%乙 醇 脫 脂 棉 球 擦 拭 采 血 部 位 的 皮 膚 ， 待 干 。 5、 針 刺 皮 膚 用 左 手 拇 指 和 示 指 固 定 繃 緊 皮 膚 ， 右 手 持 采 血 針 自 指 尖 腹 內(nèi) 側(cè) 迅 速 刺 入6、 拭 去 第 一 滴 血7、 吸 血 血 液 自 然 流 出 時 ， 用 微 量 吸 管 吸 血 至 刻 度 8、 止
3、 血 毛 細 血 管 采 血 操 作 步 驟 1、 采 血 前 準 備 患 者 、 器 材2、 選 擇 采 血 部 位 皮 膚 完 整 處 采 血 3、 消 毒 皮 膚 無 菌 操 作 、 一 人 一 針 一 管 、 皮 膚 消 毒 應(yīng) 待 乙 醇 或 碘 酊 揮 發(fā) 后 采 血 4、 針 刺 皮 膚 迅 速 ， 傷 口 深 度 5、 拭 去 第 1滴 血6、 吸 血 與 檢 測 微 量 吸 管 校 準 、 血 液 充 入 管 內(nèi) 的 速 度 、 應(yīng) 及 時 測 定 毛 細 血 管 采 血 注 意 事 項 第 二 部 分 白 細 胞 計 數(shù) 原 理 ： 血 液 經(jīng) 稀 乙 酸 定 量 稀 釋
4、并 破 壞 成 熟 紅 細 胞 ， 在 血 細 胞 計 數(shù) 池 內(nèi) 計 數(shù) 規(guī) 定 區(qū) 域 內(nèi) 的 白 細 胞 總 數(shù) ， 換 算 成 每 升 血 液 中 白 細 胞 數(shù) 。試 劑 ： 白 細 胞 稀 釋 液 ： 冰 乙 酸 2.0ml 10g/L亞 甲 藍 3滴 加 蒸 餾 水 至 100ml 器 材 ：微 量 吸 管 、 帶 孔 吸 頭 、改 良 牛 鮑 血 細 胞 計 數(shù) 板 及 專 用 蓋 片1ml刻 度 移 液 管 、 小 試 管 、 潔 凈 軟 紗 布 、干 棉 球 、 光 學 顯 微 鏡 微 量 吸 管 的 使 用1、 將 帶 孔 乳 膠 吸 頭 輕 輕 套 在 微 量 吸 管
5、上 ， 連 接 緊 密 不 漏 氣 ；2、 拇 指 和 中 指 夾 住 吸 頭 中 下 端 ， 示 指 蓋 住 吸 頭 小 孔 ， 拇 、 中 指輕 微 擠 壓 排 出 適 量 空 氣 ；3、 將 微 量 吸 管 插 入 抗 凝 血 ， 拇 、 中 指 緩 慢 松 勁 （ 松 動 快 血 液 會吸 入 吸 頭 ） ， 吸 取 抗 凝 血 至 所 需 刻 度 略 上 方 （ 不 能 有 氣 泡 ） ，吸 管 呈 水 平 略 下 垂 ， 松 開 示 指 ；4、 用 干 棉 球 順 吸 管 向 下 拭 盡 管 外 余 血 （ 保 證 血 量 準 確 ） ， 輕 觸吸 管 下 口 吸 去 多 余 血
6、量 ， 使 管 內(nèi) 抗 凝 血 正 處 所 需 刻 度 ；5、 將 微 量 吸 管 插 入 小 試 管 底 部 ， 三 指 輕 微 用 力 慢 慢 排 出 血 液 ，用 上 清 液 沖 洗 管 內(nèi) 余 血 2-3次 ， 輕 搖 試 管 混 勻 ； 6、 拔 出 微 量 吸 管 棄 入 污 物 桶 。 改 良 牛 鮑 血 細 胞 計 數(shù) 板 結(jié) 構(gòu) 計 數(shù) 板 上 下 各 一 個 計 數(shù) 池 血 細 胞 計 數(shù) 池 的 方 格計 數(shù) 區(qū) 域 分 為 9個 大 方 格四 角 的 大 方 格 各 劃 分 為 16個 中 方 格中 央 大 方 格 劃 分 為 25個 中 方 格四 角 的 大 方 格
7、為 白 細 胞 計 數(shù) 區(qū)中 央 大 方 格 四 角 和 正 中 5個 中 方 格 為 紅 細胞 計 數(shù) 區(qū) 白 細 胞 數(shù) /L= N/4 10 106 稀 釋 倍 數(shù)每 個 大 方 格 的 容 積 = 面 積 高 度 =1mm2 0.1mm=0.1mm3 ( l)每 個 大 方 格 的 面 積 = 1mm 1mm=1mm2 （ N： 4個 大 方 格 細 胞 總 數(shù) ） 細 胞 計 數(shù) 原 則 大 方 格 四 邊 壓 線 細胞 數(shù) 左 不 數(shù) 右 ， 數(shù)上 不 數(shù) 下 ， 弓 形 移 動 （ 1） 加 稀 釋 液 用 移 液 管 向 小 試 管 內(nèi) 加 入 0.38ml白 細 胞 稀 釋
8、液 。（ 2） 采 血 、 稀 釋 用 微 量 吸 管 采 血 20ul， 拭 去 管 外 余 血 ， 釋 放 于 小 試 管底 部 ， 用 上 部 稀 釋 液 洗 凈 吸 管 內(nèi) 余 血 ， 輕 搖 試 管 混 勻 ， 靜 置 等 其 溶 血 。（ 3） 清 潔 計 數(shù) 板 及 蓋 片 （ 動 作 輕 柔 ） ， 夾 持 蓋 片 緣 縱 向 前 推 輕 放 于 兩 側(cè)支 持 堤 上 。（ 4） 充 計 數(shù) 池 將 小 試 管 輕 微 振 蕩 2min， 立 即 以 一 次 性 微 量 吸 管 吸 取 混勻 后 的 白 細 胞 懸 液 ， 充 入 計 數(shù) 池 內(nèi) 。 靜 置 2-3min， 使
9、 細 胞 沉 于 計 數(shù) 池底 面 。（ 5） 調(diào) 試 顯 微 鏡 將 計 數(shù) 板 放 置 載 物 臺 上 ， 轉(zhuǎn) 至 低 倍 鏡 （ 10 ） ， 調(diào) 節(jié)聚 光 器 使 光 線 較 暗 ， 調(diào) 節(jié) 旋 鈕 找 到 方 格 線 ， 調(diào) 節(jié) 光 亮 。（ 6） 計 數(shù) 低 倍 鏡 下 計 數(shù) 四 角 4個 大 方 格 內(nèi) 白 細 胞 總 數(shù) ， 壓 線 細 胞 數(shù) 上 不 數(shù) 下 ， 數(shù) 左 不 數(shù) 右 。 白 細 胞 計 數(shù) 操 作 步 驟 (1)稀 釋 液 密 封 保 存 ， 防 止 污 染 ， 小 試 管 、 計 數(shù) 板 、 蓋 片 均 須 清 潔 ， 以免 雜 質(zhì) 、 微 粒 等 被 誤
10、 認 為 細 胞 。(2)采 血 時 針 刺 深 度 必 須 適 當 ， 不 能 過 度 擠 壓 ， 防 止 組 織 液 滲 入 或 采 血時 間 太 長 引 起 血 液 凝 固 。(3)稀 釋 液 和 采 血 量 要 準 確 ， 充 分 混 勻 ， 充 液 適 量 ， 無 不 足 、 外 溢 和 氣泡 ， 細 胞 分 布 均 勻 。(4)白 細 胞 總 數(shù) 在 參 考 范 圍 內(nèi) ， 大 方 格 間 的 細 胞 數(shù) 不 得 相 差 10個 以 上 ，兩 次 重 復(fù) 計 數(shù) 誤 差 不 得 超 過 10 。(5)白 細 胞 數(shù) 量 過 高 時 ， 可 加 大 稀 釋 倍 數(shù) ， 白 細 胞 數(shù) 量 過 低 時 ， 可 計 數(shù) 8個 大 方 格 的 白 細 胞 數(shù) 或 取 雙 倍 血 量 。(6)調(diào) 試 顯 微 鏡 將 血 細 胞 計 數(shù) 板 平 放 于 載 物 臺 ， 低 倍 鏡 處 所 充 計 數(shù) 池 正中 蓋 片 略 上 方 ， 向 下 微 調(diào) 載 物 臺 （ 防 止 壓 碎 蓋 片 ） 至 看 清 計 數(shù) 區(qū) 域 內(nèi) 分 隔 線 條 為 止 。 白 細 胞 計 數(shù) 操 作 注 意 事 項 實 驗 報 告 內(nèi) 容原 理試 劑 器 材操 作 步 驟實 驗 結(jié) 果注 意 事 項思 考 題
實驗毛細血管采血白細胞計數(shù)
