培養(yǎng)基配制與滅菌課件

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1、在此輸入標題,第一級,第二級,第二級,第三級,第四級,第五級,*,培養(yǎng)基配制與滅菌,氧化還原和電極電勢,自定義內容,在此輸入標題,第一級,第二級,第二級,第三級,第四級,第五級,無機化學實驗,2010.10 2010.12,*,實驗中心網(wǎng)站：,http:/ 十二月 2024,培養(yǎng)基配制與滅菌,2021.10 2021.12,2,微生物實驗課是微生物學課程學習中的一個重要環(huán)節(jié)，它不僅與課堂講授的根本理論、根底知識相結合，而且也是學習后續(xù)課程和進行科研工作的根底，同時又是培養(yǎng)學生獨立思考和理論聯(lián)系實際能力的重要手段。,3,發(fā)酵工程,基因工程,細胞工程,酶工程,微生物學,實驗技術,4,常用培養(yǎng)基的制

2、備和滅菌,土壤中微生物的別離純化,細菌的形態(tài)觀察,細菌細胞的生理生化反響,霉菌、放線菌的形態(tài)觀察,酵母菌的形態(tài)觀察及微生物直接計數(shù)法,葡萄酒的釀制,實驗一 常用培養(yǎng)基的制備與滅菌,6,實驗目的,1.了解培養(yǎng)基的配制原理,掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟,2.了解常用滅菌方法的原理及使用范圍，重點掌握高壓蒸汽滅菌法的操作步驟和本卷須知,3.熟悉別離、培養(yǎng)微生物前的有關準備工作及操作方法。,7,實驗原理,一、培養(yǎng)基medium),1.,定義：由人工配制的適合微生物生長、繁殖或適合積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質。,2.,六大要素：水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子、微量元素,8,3.,分類,按培養(yǎng)基的物理狀態(tài),

3、固體培養(yǎng)基：固體狀，通常在液體培養(yǎng)基中參加1.5-2%瓊脂配制而成，用于別離、鑒定、計數(shù)、保藏等,液體培養(yǎng)基：液體狀，未加任何凝固劑，工業(yè)大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)及實驗室生理、遺傳等根底理論研究,半固體培養(yǎng)基：柔軟的漿糨狀，通常在液體培養(yǎng)基中參加0.2-0.7%瓊脂配制而成，用于觀察微生物的運動、分類鑒定及噬菌體效價測定等,9,按照培養(yǎng)基的物質來源分,天然培養(yǎng)基：天然成分 成分不明確 如馬鈴薯、牛肉、豆芽、血清等,合成培養(yǎng)基：高純化學試劑 成清楚確 如葡萄糖、淀粉等,半合成培養(yǎng)基：既有天然成分，又有化學試劑 如馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基,按照培養(yǎng)基的用途分,根底培養(yǎng)基：含根本營養(yǎng)物質如牛肉膏蛋白胨,加富培養(yǎng)基：特

4、殊營養(yǎng)物質如血液瓊脂培養(yǎng)基,鑒別培養(yǎng)基：特定化合物或試劑,選擇培養(yǎng)基：化學物質，抑制非目的菌的生長,10,主要用于細菌的培養(yǎng)。應用最廣泛、最普通，又稱為普通培養(yǎng)基.根底培養(yǎng)基含有牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉。,其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而氯化鈉提供無機鹽。瓊脂為凝固劑，在常用濃度下96時熔化，瓊脂在40時凝固，通常不被微生物分解利用。,用稀酸或稀堿將其pH調至中型或微堿性，利于細菌生長繁殖。,4.,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,牛肉膏,3g,，蛋白胨,10g,，,NaCl5g,，瓊脂,15-20g,，水,1000mL,，,pH7.0-7.2(,后調,),11

5、,是用來培養(yǎng)和觀察放線菌形態(tài)特征的合成培養(yǎng)基。特點：含有多種化學成分的無機鹽，這些無機鹽可以相互作用而產(chǎn)生沉淀。因此，在混合培養(yǎng)基成分時，一般是按配方的順序依次溶解各成分，此外，合成培養(yǎng)基有的還要補加微量元素，如高氏一號培養(yǎng)基中的七水合硫酸亞鐵的量只有0.001%，因此在配制培養(yǎng)基時需預先配成高濃度的七水合硫酸亞鐵貯備液，然后再按需參加,5.,高氏一號培養(yǎng)基,可溶性淀粉,20g,，,KNO3 1g,，,NaCl 0.5g,，,K2HPO4,3H2O 0.5g,，,MgSO4,7H2O 0.5g,，,FeSO4,7H2O 0.01g,，瓊脂,15-20g,，水,1000mL,，,12,是一種用來

6、別離真菌的選擇性培養(yǎng)基。其中葡萄糖主要作為碳源，蛋白胨主要作為氮源，磷酸二氫鉀、七水合硫酸鎂作為無機鹽，為微生物提供鉀、磷、鎂離子。孟加拉紅和鏈霉素能有效的抑制細菌和放線菌的生長，而對真菌無抑制作用，因而對真菌在這種培養(yǎng)基上可以得到優(yōu)勢生長，從而到達別離真菌的目的。,6.,馬丁氏培養(yǎng)基,蛋白胨,0.5g,，葡萄糖,10.0g,，,KH2PO4 1.0g,，,MgSO4,7H2O 0.5g,，瓊脂,15-20g,，水,1000mL,，,pH,自然,13,消毒：一般指消滅病原菌和有害微生物的營養(yǎng)體。,滅菌：一般指殺滅一切微生物的芽孢孢子及休眠體。,滅菌的方法：,一干熱滅菌法 二高壓蒸汽滅菌法三紫外

7、線滅菌法 四過濾除菌,二、滅菌方法,14,方法：熱空氣滅菌和灼燒。,機理：利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而到達滅菌目的。,一干熱滅菌,電烘箱滅菌時，物品擺放不能太擠，以免阻礙空氣流通，物品不能接觸到電烘箱的內壁鐵板，防著火，溫度不能超過180,注意,15,二高壓蒸汽滅菌法,將物品放入一個密閉的高壓滅菌鍋中，通過加熱使鍋內水沸騰產(chǎn)生蒸汽，蒸汽不斷增加，使鍋內壓力升高，沸點升高，得到高于100的高溫，導致菌體蛋白質變性到達滅菌目的。,16,波長為200-300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力最強。,紫外線殺菌機制主要是它誘導了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，從而抑制

8、了DNA的復制,如無菌室、接種箱、物體外表滅菌,穿透力差,三紫外線滅菌,17,主要是選用孔徑小一般0.2微米或0.4微米的微孔材料如磁土、石棉、超濾膜等制作成專門的細菌濾器，通過抽氣泵進行減壓過濾。,許多材料如血清、抗生素及糖溶液都是采用此中方法過濾。,空氣濾菌：發(fā)酵罐，無菌間，超凈工作臺等,四過濾除菌,18,試劑和器材,1,、試劑,牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、,1mol/L,氫氧化鈉、,1mol/L,鹽酸、可溶性淀粉、硝酸鉀、磷酸氫二鉀、七水合硫酸鎂、七水合硫酸亞鐵、葡萄糖、磷酸二氫鉀、孟加拉紅、鏈霉素。,2,、器材,試管、三角瓶、燒杯、量筒、天平、加熱爐、藥匙、,pH,試紙、棉花、牛皮紙

9、、記號筆、線繩、紗布、高壓蒸汽滅菌器。,19,實驗方法,培養(yǎng)基配制方法和步驟,計算用量,稱量,溶解,調,pH,分裝,包扎,滅菌,擺斜面,無菌檢查,加瓊脂熔化,20,1.,計算,每個實驗臺配制,牛肉膏蛋白胨,、,高氏一號,、,馬丁氏,培養(yǎng)基各,400ml,，根據(jù)配方計算各藥品用量,21,2,.,稱量溶解,按實際用量準確稱取各藥品放入1000ml燒杯中，參加所需水量的一半，玻棒攪勻，加熱溶解。,牛肉膏,淀粉,FeSO47H2O,鏈霉素,22,3,.,加瓊脂熔化,將瓊脂條剪成小段，待液體培養(yǎng)基煮沸后，參加其中，繼續(xù)加熱至瓊脂完全熔化。,1加熱過程中要不斷攪拌，防止瓊脂沉 淀在瓶底燒焦,2控制火力，以

10、免培養(yǎng)基因暴沸而溢出,3補水,注意,23,4,.,分裝,一般裝量：試管,1/5,，三角瓶,1/3-1/2,每組分裝牛肉膏蛋白胨、高氏、馬丁氏各,2,個試管,每實驗臺分裝牛肉膏蛋白胨、高氏、馬丁氏各,1,個錐形瓶,注意,分裝過程，應注意不使培養(yǎng)基玷污管口或瓶口，以免污染棉塞，造成雜菌生長。,24,5,、調,pH,值,牛肉高蛋白胨：,pH7.0,7.2,高氏一號：,馬丁氏：,pH,自然,1mol/lNaOH,1mol/lHCl,調節(jié),25,6,.,塞棉塞和包扎,1棉塞的制作：現(xiàn)場演示,用途：防止雜菌侵入 保證良好的通氣性能。,2舊報紙包扎：演示,用途：防止滅菌時水蒸氣打濕棉塞 減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā)

11、。,3帖標簽：注明培養(yǎng)基名稱，組別，日期。貼于離管口1/3管身處或用記號筆也可。注意：標簽用鉛筆書寫，以防高溫滅菌時蒸汽模糊字跡。,需包扎的物品,9,個干凈培養(yǎng)皿、一根,0.2ml,移液管、培養(yǎng)基,26,7.,高壓蒸汽滅菌,滅菌操作的流程,滅菌條件為：,121,30min,加水,裝待滅,菌物品,加蓋,加熱,滅菌時間到后,斷電源,壓力降為零,開箱取物,演示滅菌鍋的具體使用及本卷須知,27,8.,擺斜面,將滅好菌的試管取出，斜靠在玻璃棒或書本等適宜的支撐物上，形成斜面，斜面長度不超過試管總長的1/2，凝固后取出。,28,培養(yǎng)基滅菌后于室溫下培養(yǎng),1,2d,，確定無菌生長，方可使用。,9.,無菌檢查,29,本卷須知,1.藥品稱量要符合稱量規(guī)那么,2.調pH值，應小心操作，防止過頭，以免回調而影響培養(yǎng)基內各離子的濃度,3加熱過程中要不斷攪拌，控制火力，防止培養(yǎng)基因暴沸而溢出或瓊脂沉淀在瓶底燒焦。,4.培養(yǎng)基配制完成后應立即滅菌或暫時冷藏，防止微生物生長而改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)比例和酸堿度所帶來的不利影響,5.分裝過程，應注意不使培養(yǎng)基玷污管口或瓶口，以免污染棉塞，造成雜菌生長。,6.滅菌標簽用鉛筆書寫，以防高溫滅菌時蒸汽模糊字跡。,7.使用高壓滅菌器時，要注意用前的加水。,