2019年高考生物大二輪復習 專題突破練習九 生物技術實踐.doc

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2019年高考生物大二輪復習 專題突破練習九 生物技術實踐 [考綱要求]　1.酶在洗滌等方面的應用(A)。2.制備和應用固相化酶(A)。3.發(fā)酵食品加工的基本方法(A)。4.微生物的分離和培養(yǎng)(A)。5.實驗：(1)探究酶在洗滌方面的應用(b)；(2)酵母細胞的固定化技術(b)；(3)腐乳的制作(a)；(4)果酒和果醋的制作(b)；(5)微生物的分離與培養(yǎng)(b)；(6)DNA的粗提取與鑒定(b)。 [構建網(wǎng)絡] 考點一　微生物的利用 1．有關微生物實驗的基本方法 (1)制備培養(yǎng)基：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。 (2)無菌技術：主要指消毒和滅菌。 (3)倒平板操作：待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。 (4)平板劃線法：是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 (5)稀釋涂布平板法：先將菌液進行一系列的梯度稀釋后涂布平板，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。如圖： 2．微生物的分離與培養(yǎng) (1)分離方法：選擇培養(yǎng)基。 (2)某種微生物的分離 ①土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) a．篩選菌株：利用選擇培養(yǎng)基篩選菌株。 b．計數(shù)方法：稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)法。 c．過程：土壤取樣→樣品的稀釋→微生物的培養(yǎng)與觀察。 ②分解纖維素的微生物的分離 a．實驗原理 即：可根據(jù)是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。 b．流程：土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→涂布平板→挑選菌落。 (3)鑒定方法 鑒定分解尿素的細菌 含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基→細菌→指示劑變紅，則該菌能分解尿素 鑒定纖維素分解菌 [錯混診斷] 1．在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基上的細菌含量(xx新課標Ⅱ，39(1)改編)(　　) 2．某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(xx江蘇，18C)(　　) 3．純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法(2011新課標，39(2)改編)(　√　) 4．在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個菌落含有多種細菌(2011重慶，2A)(　　) 5．檢測土壤中細菌總數(shù)實驗操作中，確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實驗組平板進行計數(shù)(xx安徽，6D)(　　) 6．培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌(xx江蘇，18A改編)(　　) 題組一　從微生物的實驗室培養(yǎng)進行命題 1．(xx新課標Ⅱ，39)為了調查某河流的水質狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}： (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是__________________________________；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為______________。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過________滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是____________________________________________。 (3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結果。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中__________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高____________的利用率。 答案　(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　3.8107　(2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落　(3)B　(4)溶解氧　營養(yǎng)物質 解析　(1)為了檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機取滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間。0.1 mL稀釋液中平均有(39＋38＋37)/3＝38個活菌，則每毫升稀釋液中活菌的數(shù)目為38/0.1＝380，則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為380100＝3.8104，則每升水樣中活菌數(shù)目為3.81041 000＝3.8107。(2)接種環(huán)、接種針等金屬用具可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，以達到迅速徹底滅菌的目的。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落。(3)比較圖A和圖B可以看出：A培養(yǎng)基中細菌的分布呈線性，是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結果；B培養(yǎng)基中細菌均勻分布，是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結果。(4)振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營養(yǎng)物質的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。 題組二　從微生物培養(yǎng)基的組成成分及純化方法進行命題 2．(xx四川，10)有機農藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。 (1)微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質有碳源、水、________________四類，該實驗所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是________________________________________。 (2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和________________，這些植物激素一般需要事先單獨配制成________保存?zhèn)溆谩? (3)純化菌株時，通常使用的劃線工具是________。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有________________________________________。 (4)為探究苯磺隆的降解機制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實驗。該實驗的假設是________________________________，該實驗設計是否合理？為什么？________________________。 答案　(1)氮源和無機鹽　只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長繁殖　(2)細胞分裂素　母液　(3)接種環(huán)?、俳臃N環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開始 (4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質　不合理，缺少空白對照 解析　(1)微生物生長繁殖需要的主要營養(yǎng)物質包括碳源、氮源、水和無機鹽四類。根據(jù)題意可知，土壤中某些微生物有降解苯磺隆的能力，該實驗的目的是探索其降解機制，因此，需要分離出有降解苯磺隆能力的土壤中的某些微生物，故選擇培養(yǎng)時為了排除其他碳源的干擾，培養(yǎng)基中唯一碳源只能是苯磺隆。(2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基需要添加生長素和細胞分裂素，用于調節(jié)植物細胞脫分化和再分化；這些植物激素一般需要事先單獨配制成母液保存?zhèn)溆谩?3)純化菌株時，通常使用的劃線工具是無菌接種環(huán)。劃線的平板培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)域的劃線上不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，而其他劃線上有菌落。造成此現(xiàn)象的原因可能有兩個：一是接種環(huán)灼燒后未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環(huán)而死亡；二是劃第二劃線區(qū)域第一條線時未從第一區(qū)域末端開始。(4)根據(jù)圖乙所示實驗中的上清液加入蛋白酶溶液推測，實驗目的是探究目的菌株是否能分泌降解苯磺隆的蛋白質，實驗設計不合理之處是缺少不加蛋白酶溶液、其他條件同圖乙的空白對照。 3．(xx新課標Ⅱ，39)臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性?；卮鹣铝袉栴}： (1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用____________法或____________法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。 (2)取該單菌落適當稀釋，用______法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長，布滿平板。 (3)為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D 四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A__________________；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B__________________；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明________________________________________；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的__________________。 (4)根據(jù)上述實驗結果，為達到抗菌目的，最好應選用抗生素__________。 答案　(1)劃線(平板劃線)　稀釋涂布(或涂布) (2)涂布　(3)敏感　不敏感　該致病菌對C的敏感性比對A的弱　耐藥菌　(4)A 解析　微生物純化的方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法。根據(jù)微生物的特點對其進行一系列濃度梯度稀釋，然后用涂布法接種于固體培養(yǎng)基表面，然后在適宜條件下培養(yǎng)；抗生素是由真菌產生的，可以抑制生長、繁殖或殺死細菌等致病菌的一類物質，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明有抗生素A的地方該致病菌受到抑制；B的周圍沒有透明圈，說明致病菌對抗生素B不敏感，通過C的透明圈要比A的透明圈小，說明該致病菌對C的敏感性比A的弱；D出現(xiàn)了透明圈，說明該致病菌對D敏感，但是在透明圈上出現(xiàn)一個菌落，又排除雜菌污染，判斷此菌落的微生物對抗生素D產生了耐藥性。根據(jù)以上分析，為達到抗菌的目的，最好選擇抗生素A。 　用選擇培養(yǎng)基分離微生物的方法 (1)在基礎培養(yǎng)基中加入抗性物質。舉例：①加高濃度食鹽分離金黃色葡萄球菌；②加青霉素分離酵母菌和細菌。 (2)通過改變培養(yǎng)基的成分。舉例：①培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存。②培養(yǎng)基中若缺乏有機碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造有機物生存。 (3)利用培養(yǎng)基的特定成分。舉例：①當石油是唯一碳源時，可抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生物生存，從而分離出能消除石油污染的微生物。②當纖維素為唯一碳源時，分離纖維素分解菌?？键c二　傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用 果酒、果醋、腐乳的制作 果酒 果醋 腐乳 原理 無氧：釀酒C6H12O62CO2＋2C2H5OH； 有氧：釀醋C2H5OH＋O2CH3COOH＋H2O 蛋白質小分子肽＋氨基酸； 脂肪甘油＋脂肪酸 控制條件 O2 無氧 有氧 有氧 溫度 18～25 ℃ 30～35 ℃ 15～18 ℃ 實驗流程圖 讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制 [錯混診斷] 1．醋酸菌在無氧條件下利用乙醇產生醋酸(xx廣東，4A)(　　) 2．酵母菌在無氧條件下利用葡萄汁產生酒精(xx廣東，4B)(　√　) 3．泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸發(fā)酵(xx廣東，4C)(　√　) 4．腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶(xx廣東，4D)(　√　) 5．某研究性學習小組以櫻桃番茄為材料進行果酒、果醋發(fā)酵實驗。先供氧進行果醋發(fā)酵，然后隔絕空氣進行果酒發(fā)酵(xx江蘇，14B改編)(　　) 6．在制作果醋時，如果條件適宜，醋酸菌可將葡萄汁中的糖分解成醋酸(xx江蘇，21B改編)(　√　) 7．在制作腐乳時，將長滿毛霉的豆腐裝瓶腌制時，底層和近瓶口處需加大用鹽量(xx江蘇，21D改編)(　　) 8．在家庭中用鮮葡萄制作果酒時，讓發(fā)酵裝置接受光照并放在45 ℃處(xx北京，1AD改編)(　　) 題組　從果酒、果醋和腐乳制作進行命題 1．(xx江蘇，24)同學設計了如圖所示的發(fā)酵裝置，下列有關敘述不正確的是(多選)(　　) 某A．該裝置可阻止空氣進入，用于果酒發(fā)酵 B．該裝置便于果酒發(fā)酵中產生的氣體排出 C．去除彎管中的水，該裝置可滿足果醋發(fā)酵時底層發(fā)酵液中大量醋酸菌的呼吸 D．去除彎管中的水后，該裝置與巴斯德的鵝頸瓶作用相似 答案　ABD 解析　A項，該裝置中注水的彎曲部分可阻止空氣進入，能用于果酒發(fā)酵。B項，果酒發(fā)酵產生的CO2可溶解在彎管的水中，CO2量多時可進一步通過水排出。C項，醋酸菌是好氧菌，因沒有將無菌空氣通入發(fā)酵液中，故去除彎管中的水后也不能滿足底層發(fā)酵液中醋酸菌有氧呼吸的需求。D項，去除彎管中的水后，該裝置的彎管部分既能排出CO2，也能防止空氣中的微生物進入，與巴斯德的鵝頸瓶作用類似。 2．下列有關果酒、果醋和腐乳制作的敘述，正確的是(　　) A．參與果酒發(fā)酵和果醋發(fā)酵的微生物都含有線粒體 B．果酒制成后只需將裝置轉移至溫度較高的環(huán)境中即可制作果醋 C．在腐乳制作過程中必須有能產生蛋白酶的微生物參與 D．在腐乳裝瓶時自下而上隨層數(shù)的增加逐漸減少鹽量 答案　C 解析　參與果酒發(fā)酵的酵母菌是真核生物，有線粒體；參與果醋發(fā)酵的醋酸菌是原核生物，無線粒體。果酒制成后將裝置轉移至溫度較高的環(huán)境中，同時要通入無菌空氣，可制作果醋。在腐乳裝瓶時自下而上隨層數(shù)的增加逐漸增加鹽量。 3．腐乳，又稱豆腐乳，是我國著名的民族特產發(fā)酵食品之一。其滋味鮮美，醬香宜人，制作歷史悠久，品種多樣，主要有紅方腐乳、醬腐乳和白腐乳等，而紅曲醬腐乳既具有紅方腐乳適宜的天然紅曲色澤，又具有醬腐乳特有的濃郁的醬香味，深受人們的喜愛，具有廣闊的市場前景。某興趣小組按照以下工藝流程制作紅曲醬腐乳，請據(jù)圖回答： 毛霉→孢子懸浮液　　　　　　　紅曲醬鹵 　　　　　　↓　　　　　　　　　　　↓ 豆腐→切塊→接菌→搓毛→腌坯→裝壇→兌湯→發(fā)酵 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　成品 (1)現(xiàn)代科學研究表明，許多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，其中起主要作用的是________，它是一種絲狀真菌。 (2)傳統(tǒng)的制作過程中，豆腐塊上生長的毛霉來自________________________。而現(xiàn)代的腐乳生產是在嚴格的無菌條件下，將優(yōu)良的毛霉菌種接種在豆腐上，這樣可以________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)搓毛是將長滿菌絲的白坯用手扶抹，讓菌絲裹住坯體，其目的是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)在逐層加鹽腌坯的過程中，隨層數(shù)的加高而________鹽量，接近瓶口處要________鋪一些。 (5)紅曲醬鹵是紅曲、面醬、黃酒按一定的比例配制而成的，加入黃酒的作用是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 答案　(1)毛霉　(2)空氣中的毛霉孢子　避免其他菌種的污染，以保證腐乳的質量 (3)防止腐乳爛塊　(4)增加　多 (5)可以抑制微生物的生長，能使腐乳具有獨特的香味 解析　(1)豆腐發(fā)酵有多種微生物參與，其中毛霉起主要作用，毛霉是一種絲狀真菌。(2)傳統(tǒng)制作中，豆腐上的毛霉來自空氣中的毛霉孢子，現(xiàn)代腐乳生產是在無菌條件下，將優(yōu)良的毛霉菌種接種在豆腐上，以避免其他菌種的污染，保證腐乳的質量。(3)搓毛促進毛霉覆蓋整塊腐乳，以防止其他微生物的污染導致腐乳爛塊。(4)加鹽的作用是析出豆腐中的水分，使豆腐變硬，在后期制作中不會過早酥爛。同時鹽能抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質。(5)加酒可以抑制微生物的生長，以防腐乳爛塊，同時能使腐乳具有獨特的香味。 　1.果酒和果醋發(fā)酵裝置的設計思路 (1)酵母菌繁殖需要氧氣，醋酸菌是好氧細菌，則果酒制作前期和果醋制作整個過程都需要氧氣；酵母菌產生酒精時是厭氧的，則在充氣口處應該設置開關。 (2)發(fā)酵過程中產生CO2，需要設置排氣口；為了防止空氣中微生物污染，排氣口應該連接一個長而彎曲的膠管。 (3)為便于取樣及監(jiān)測發(fā)酵情況，需要設置出料口。 2．制作果酒、果醋、腐乳的比較 項目 酵母菌 醋酸菌 毛霉 生物學分類 真核生物 原核生物 真核生物 代謝類型 異養(yǎng)兼性 厭氧型 異養(yǎng)需氧型 異養(yǎng)需 氧型 生產應用 釀酒、發(fā)面 釀醋 制作腐乳 氧的需求 前期需氧， 后期厭氧 一直需氧 一直需氧 考點三　酶的應用 1．加酶洗衣粉的洗滌原理 種類 洗滌原理 洗滌實例 蛋白酶 可將蛋白質分解為易溶解或分散于洗滌液中的小分子的肽或氨基酸 血漬、奶漬及各種食品中的蛋白質污垢 脂肪酶 把脂肪水解為較易溶解的甘油和游離的脂肪酸 食品的油漬、人體皮脂、口紅 淀粉酶 能使淀粉迅速分解為可溶性的麥芽糖、葡萄糖等 來自面條、巧克力等的污垢 纖維素酶 使纖維的結構變得蓬松，從而使?jié)B入到纖維深處的塵土和污垢能夠與洗衣粉充分接觸，達到更好的去污效果 2.固定化酶和固定化細胞的比較 固定化酶 固定化細胞 固定酶的種類 一種 一系列 適用方法 化學結合法、物理吸附法 包埋法 特 優(yōu)點 酶既可與反應物結合，又可與產物分離，固定在載體上的酶可反復利用 成本低，操作容易 點 缺點 一種酶只能催化一種或一類化學反應 可能導致反應效率下降 實例 固定化葡萄糖異構酶 固定化酵母細胞 [錯混診斷] 1．玉米淀粉經酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖異構酶的作用下轉化成果糖。利用固定化技術可使葡萄糖異構酶重復利用，從而降低生產成本(xx山東，35(3))(　√　) 2．反應產物對固定化酶的活性沒有影響(xx江蘇，6B)(　　) 3．相同pH時加酶洗衣粉洗滌效果好于普通洗衣粉(xx江蘇，16C)(　　) 4．利用固定化酵母細胞進行發(fā)酵，糖類的作用只是作為反應底物(xx江蘇，3D)(　　) 5．剛溶化的海藻酸鈉應迅速與活化的酵母菌混合制備混合液(xx江蘇，25A)(　　) 6．在酶的制備和應用中，透析、電泳和酸解等方法常用于酶的分離與純化(2011江蘇，15B)(　　) 題組一　從酶在洗滌劑中的應用進行命題 1．(xx江蘇，18)下列關于加酶洗衣粉的敘述，正確的是(　　) A．高溫易使酶失活，因此冷水洗滌去污效果應該比溫水好 B．洗衣粉中表面活性劑對堿性蛋白酶活性有一定的促進作用 C．在pH低于7.0的自來水中，堿性蛋白酶依然能起作用 D．洗衣粉中酶主要是通過快速分解溶在水里的污漬發(fā)揮作用 答案　C 解析　A項，酶有最適溫度，加酶洗衣粉的酶在水溫為45～60 C時能充分發(fā)揮洗滌效果。B項，如果將酶直接加入到洗衣粉中，洗衣粉中的表面活性劑能影響堿性蛋白酶的活性，甚至使酶失活。C項，加酶洗衣粉中的酶是經過特殊處理的，能耐酸、耐堿，可忍受表面活性劑和較高的溫度。D項，加酶洗衣粉中的酶的作用是催化衣物上的污漬分解，使其容易從衣物上脫落下來。 2．洗衣粉是人們日常生活所必需的，有位同學對加酶洗衣粉的作用很感興趣，為此做了以下探究實驗。 實驗過程：①用天平稱取加酶洗衣粉若干份，每份5 g。 ②制作被牛奶(主要含蛋白質、脂肪)和藍墨水[主要成分：阿拉伯樹膠(植物纖維)、鞣酸與硫酸亞鐵]處理過的同一布料若干份(污漬大小以滴管滴數(shù)為準)。 ③取2只500 mL燒杯，依次編號為A、B，分別加入200 mL水和一份已稱好的洗衣粉，放入10 ℃水浴鍋中，并且攪拌。 ④取2塊被牛奶和藍墨水處理過的布料各一份，分別同時放入燒杯中，用玻璃棒攪拌并用秒表記錄除去污漬所需時間。 然后，分別以水浴鍋溫度依次為20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃，重復步驟③④，記錄除去污漬所需要的時間，結果如表所示。 不同溫度下除去不同污漬所需時間/min 水溫/ ℃ 10 20 30 40 50 60 70 80 奶漬 48 43 28 12 6 4 12 17 藍墨水 93 86 80 72 68 67 81 105 (1)請以溫度為橫坐標，酶促反應速率為縱坐標畫出除去奶漬實驗的大致情況圖： (2)解釋在同一水溫下除去兩種污漬時間不同的可能原因是________________________。 (3)此加酶洗衣粉不適宜洗滌下列哪些衣料？________。 ①棉織品?、诿椘贰、垭婢]織品?、苄Q絲織品　⑤滌綸織品?、掊\綸織品 (4)請你為上述探究實驗命題______________________________________。 (5)上述探究過程(①至④)隱含了科學探究的________和________兩個步驟。 (6)上述實驗涉及兩項對照關系，一項是針對________的成分對照，另一項是針對________的條件對照。這里的條件對照與一般實驗空白對照的區(qū)別是__________________。 答案　(1)如圖 (2)加酶洗衣粉含有蛋白酶和脂肪酶，酶具有專一性，且不同酶的活性受溫度影響不同 (3)②④ (4)探究不同溫度對加酶洗衣粉洗滌效果的影響 (5)提出假設　設計實驗 (6)不同底物　不同溫度　條件對照組互為對照(或互為實驗組) 解析　加酶洗衣粉中添加了多種酶制劑，如堿性蛋白酶制劑和堿性脂肪酶制劑等，這些酶適宜溫度不同，而且不適合洗滌蛋白質類纖維織物如羊毛、蠶絲等，因為酶能破壞蛋白質結構。該實驗探究不同底物及不同溫度對酶活性的影響，既可以根據(jù)底物不同設置對照，也可以根據(jù)溫度不同設置對照。 題組二　從酶的固定化技術進行命題 3．下面是制備固定化酵母細胞的實驗步驟，請回答： 酵母細胞的活化→配制CaCl2溶液→配制海藻酸鈉溶液→海藻酸鈉溶液與酵母細胞混合→固定化酵母細胞 (1)在________狀態(tài)下，微生物處于休眠狀態(tài)。活化就是讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復__________________狀態(tài)。活化前應選擇足夠大的容器，因為酵母細胞活化時________。固定化細胞技術一般采用____________________法，而固定化酶常用________________法和________________法。 (2)影響實驗成敗的關鍵步驟是________________________。海藻酸鈉溶化過程的注意事項是________________________。如果海藻酸鈉濃度過低，形成的凝膠珠所包埋的酵母細胞數(shù)目________。如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形，說明________________。 (3)該實驗中CaCl2溶液的作用是_______________________。 答案　(1)缺水　正常的生活　體積會增大　包埋　化學結合　物理吸附　(2)配制海藻酸鈉溶液　小火加熱(或間斷加熱或小火間斷加熱)，不斷攪拌　較少　(海藻酸鈉濃度偏高)制作失敗　(3)使膠體聚沉(或形成穩(wěn)定的結構) 解析　(1)在缺水的狀態(tài)下，微生物處于休眠狀態(tài)。活化就是讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復正常的生活狀態(tài)。活化前應選擇足夠大的容器，因為酵母細胞活化時體積會增大，以免漲破容器或溢出。固定化細胞技術一般采用包埋法，固定化酶常用化學結合法和物理吸附法。這是因為細胞體積大，而酶分子很??；體積大的細胞難以被吸附或結合，而體積小的酶容易從包埋材料中漏出。(2)影響實驗成敗的關鍵是配制海藻酸鈉溶液，這是因為如果海藻酸鈉濃度過高，很難形成凝膠珠；如果濃度過低，形成的凝膠珠所包埋的酵母細胞的數(shù)目少，影響實驗結果。(3)CaCl2溶液的作用是使膠體聚沉。 4．固定化酶是從20世紀60年代迅速發(fā)展起來的一種技術?？蒲腥藛T用雙重固定法，即采用戊二醛作交聯(lián)劑(使酶相互連接)，海藻酸鈉作為包埋劑來固定小麥酯酶，以研究固定化酶的相關性質和最佳固定條件。酶活力為固定化酶催化化學反應的總效率，包括酶活性和酶的數(shù)量。如圖甲、乙、丙為部分研究結果。請分析回答： (1)從對溫度變化適應性和應用范圍的角度分析，甲圖所示結果可以得出的結論是____________________________________。 (2)乙圖曲線表明濃度為____________的海藻酸鈉包埋效果最好，當海藻酸鈉溶液濃度較低時，酶活力低的原因是_____________ ___________________。 (3)固定化酶的活力隨使用次數(shù)的增多而下降，由丙圖可知，固定化酯酶一般可重復使用________次，之后酶活力明顯下降。 (4)使用固定化酶的優(yōu)點有哪些？_________ ______________________。 (5)固定小麥酯酶采用雙重固定法，這是因為________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 答案　(1)固定化酶比游離酶對溫度變化的適應性更強且應用范圍較廣　(2)3%　海藻酸鈉濃度較低時包埋不緊密，酶分子容易漏出，數(shù)量不足　(3)3　(4)既能與反應物接觸，又能與產物分離；可以反復利用　(5)酶分子很小，容易從包埋材料中漏出 　固定化酶和固定化細胞的主要方法 名稱 原理 圖示 包埋法 將微生物細胞均勻地包埋在不溶于水的多孔性載體中 化學結合法 利用共價鍵、離子鍵將酶分子或細胞相互結合，或將其結合到載體上 物理吸附法 通過物理吸附作用，把酶固定在纖維素、瓊脂糖、多孔玻璃或離子交換樹脂等載體上 考點四　DNA的粗提取與鑒定 DNA的粗提取和鑒定方法 (1)操作流程 選取材料→破碎細胞，獲取含DNA的濾液→去除濾液中的雜質→DNA的析出與鑒定。 (2)材料的選?。哼x用DNA含量相對較高的生物組織。 (3)破碎細胞 ①動物細胞：易破碎，可通過吸水破裂。 ②植物細胞：加入洗滌劑、食鹽后研磨。 (4)除去雜質的方法 方法一：利用DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度的不同，通過調節(jié)NaCl溶液的濃度除去溶于和不溶于NaCl溶液中的雜質。 方法二：利用DNA對酶的耐受性，直接在濾液中加入嫩肉粉，反應10～15 min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能夠分解蛋白質，而不會破壞DNA。 方法三：利用DNA對高溫的耐受性，將濾液放在60～75 ℃的恒溫水浴箱中保溫10～15 min，使蛋白質變性沉淀而DNA分子還未變性。 (5)DNA的析出：向處理后的濾液中加入與濾液體積相等的、冷卻的酒精溶液(體積分數(shù)為95%)，靜置2～3 min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分。 (6)DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色。 [錯混診斷] 1．關于高中生物學實驗的基本原理，提取組織DNA是利用不同化合物在溶劑中溶解度的差異(xx北京，5B)(　√　) 2．用菜花替代雞血作為實驗材料進行“DNA的粗提取與鑒定”，其實驗操作步驟相同(2011江蘇，19D改編)(　　) 3．用不同濃度NaCl溶液反復溶解與析出DNA可去除蛋白質(xx江蘇，23B)(　√　) 4．利用雞血進行“DNA的粗提取與鑒定”的實驗中，將絲狀物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺試劑即呈藍色(2011江蘇，19C)(　　) 題組　對DNA的粗提取與鑒定進行命題 1．(xx江蘇，16)下列關于“DNA 的粗提取與鑒定”實驗敘述，錯誤的是(　　) A．酵母和菜花均可作為提取DNA的材料 B．DNA既溶于2 mol/ L NaCl溶液也溶于蒸餾水 C．向雞血細胞液中加蒸餾水攪拌，可見玻棒上有白色絮狀物 D．DNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱，冷卻后變藍 答案　C 解析　A項，原則上含DNA的生物材料都可作為提取DNA的材料，只是DNA含量高的材料成功的可能性更大。B項，DNA在2 mol/L的NaCl溶液和蒸餾水中溶解度都較大。C項，向雞血細胞液中加蒸餾水攪拌，雞血細胞會吸水破裂，玻棒攪拌會加快血細胞的破裂，但在蒸餾水中不會析出DNA。D項，DNA溶液加入二苯胺試劑后需沸水浴加熱，待冷卻后變藍色。 2．(xx江蘇，4)某同學用洋蔥進行DNA粗提取和鑒定實驗，下列操作錯誤的是(　　) A．加入洗滌劑后用力進行快速、充分的研磨 B．用蛋白酶純化過濾后的研磨液中的DNA C．加入酒精后用玻璃棒輕緩攪拌 D．加二苯胺試劑搖勻后沸水浴加熱 答案　A 解析　本題可用排除法進行解答。破碎植物細胞時，加入洗滌劑后，動作要輕緩、柔和，否則容易產生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作，A錯誤。 3．下圖表示以雞血為實驗材料進行DNA的粗提取與鑒定的操作程序，請分析回答下列問題： (1)步驟一中，向雞血細胞液中加入____________并攪拌，可使雞血細胞破裂。 (2)步驟二中，過濾后收集含有DNA的____________。 (3)步驟三、四的操作原理是__________________________； 步驟四中，通過向溶液中加入____________調節(jié)NaCl溶液的物質的量濃度至____________mol/L時，DNA將會析出，過濾去除溶液中的雜質。 (4)步驟七：向步驟六過濾后的____________中加入等體積的冷卻的____________，靜置2～3 min，溶液中會出現(xiàn)________色絲狀物，這就是粗提取的DNA。 (5)步驟七：DNA遇____________試劑，沸水浴5 min，冷卻后，溶液呈______色。 答案　(1)蒸餾水　(2)濾液　(3)DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同，通過控制NaCl溶液的濃度去除雜質　蒸餾水　0.14　(4)濾液　酒精　白　(5)二苯胺　藍 解析　破碎紅細胞應用蒸餾水，使之吸水漲破。DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，在2 mol/L的NaCl溶液中DNA溶解，在0.14 mol/L的NaCl溶液中DNA析出?？赏ㄟ^加入蒸餾水將2 mol/L的NaCl溶液稀釋為0.14 mol/L的NaCl溶液。DNA不溶于冷酒精，遇二苯胺加熱呈藍色。 　 1.DNA粗提取與鑒定中不同試劑的用途及原理比較 試劑 濃度 用途 原理(“△”為實驗的主要原理) NaCl溶液 2 mol/L 溶解DNA DNA在NaCl溶液中的溶解度隨溶液濃度的變化而改變，溶解度在2 mol/L時最大、在0.14 mol/L時最小 △ 0.14 mol/L 析出DNA 2 mol/L 鑒定時的溶劑 酒精 95%(體積分數(shù)) 除去雜質以提純DNA DNA不溶于酒精，但是細胞中的某些物質可以溶于酒精 △ 二苯胺 鑒定劑 DNA遇二苯胺(沸水浴)會變藍色 △ 檸檬酸鈉 0.03 g/mL 抗凝劑 除去血液中的鈣離子，防止血液凝固 2.DNA粗提取實驗材料和方法的選擇 (1)不同生物的組織中DNA含量不同：在選取材料時，應本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。 (2)材料不同所采用的提取方法不同：①植物組織：取材→研磨→過濾→沉淀。②雞血：制備雞血細胞液→提取核DNA→溶解細胞核內DNA→析出并濾取DNA→DNA再溶解→提取較純凈的DNA。 專題突破練 1．下列關于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，正確的是(多選)(　　) A．利用稀釋涂布平板法只能分離微生物不能對微生物進行計數(shù) B．接種時連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單菌落 C．以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌 D．用大白菜腌制泡菜的過程中亞硝酸鹽含量變化是先增加后減少 答案　BCD 解析　用稀釋涂布平板法可以分離微生物，也可以對微生物進行計數(shù)；接種劃線可以將菌體分散，經過培養(yǎng)可以得到單菌落；以尿素為唯一氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌；在泡菜腌制過程中，開始時亞硝酸鹽含量增加，一般腌制10天后含量開始下降。 2．下列關于果酒和果醋的制作原理、發(fā)酵過程的敘述中，錯誤的是(　　) A．果酒和果醋的發(fā)酵菌種不同，但代謝類型相同 B．制作果酒和果醋時都應用體積分數(shù)為70%的酒精對發(fā)酵瓶消毒 C．變酸果酒的表面觀察到的菌膜可能是醋酸菌的菌落 D．果酒和果醋的制作可用同一裝置，但需控制不同的發(fā)酵條件 答案　A 解析　果酒發(fā)酵利用的是酵母菌，酵母菌的代謝類型是異養(yǎng)兼性厭氧型，果醋發(fā)酵利用的是醋酸菌，醋酸菌的代謝類型是異養(yǎng)需氧型。 3．科研人員研究了不同洗滌濃度(單位體積的水中加入洗衣粉的量)的兩種加酶洗衣粉的去污力(%)，結果如下表。下列說法錯誤的是(　　) 洗滌濃度去污力/%洗衣粉品種 0.2% 0.4% 0.6% 0.8% 加酶洗衣粉甲 71.5 78.9 80.0 79.9 加酶洗衣粉乙 69.5 80.4 80.6 80.5 A.實驗時，需控制好溫度、洗滌時間和洗滌方式等無關變量 B．若洗滌的是相同污布，則兩種加酶洗衣粉的洗滌效果相似 C．實際洗滌時，除考慮適宜的洗滌濃度外，還需考慮衣服質地等 D．所有加酶洗衣粉最適洗滌濃度都為0.4%，濃度過大是不必要的 答案　D 解析　表中兩種洗滌劑在不同濃度下洗滌效果基本相同；根據(jù)表中信息不能得出所有加酶洗衣粉最適洗滌濃度都為0.4%。 4．(xx南京、鹽城三模)下列關于生物技術實踐的敘述，錯誤的是(　　) A．在固定化酵母實驗中，溶解海藻酸鈉時，最好采用小火或持續(xù)加熱的方法 B．用加酶洗衣粉洗滌污漬時，浸泡時間不足會造成洗滌效果差 C．利用DNA不溶于冷酒精的性質除去溶于酒精的物質，從而進一步提純DNA D．腐乳制作過程中，添加料酒、香辛料和鹽，均可以抑制雜菌的生長 答案　A 解析　在固定化酵母細胞實驗中，溶解海藻酸鈉時，最好采用小火或間斷加熱的方法，A錯誤；酶與底物作用存在時間依賴性，B正確；利用DNA不溶于冷酒精而雜質可溶的性質，提純DNA，C正確；含鹽量高會使微生物細菌細胞不斷失水，導致細胞脫水致死，而起到防腐的作用，D正確。 5．(xx新課標Ⅰ，39)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}： (1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復合酶，其中的葡萄糖苷酶可將________________分解成________。 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，CR可與纖維素形成________色復合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見下表)： 酵母膏 無機鹽 淀粉 纖維素粉 瓊脂 CR溶液 水 培養(yǎng)基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 培養(yǎng)基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表示有，“－”表示無。 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是________________________________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是________________________________________________________。 答案　(1)纖維二糖　葡萄糖　(2)紅　透明圈　(3)不能　液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落　不能　培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR纖維素紅色復合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌 解析　(1)纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶能使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶能將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅是一種染料，可以與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物就無法形成，培養(yǎng)基中就會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。(3)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，而用于分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，并且培養(yǎng)基中需含有纖維素，才能與CR形成紅色復合物，有纖維素分解菌時才能形成以纖維素分解菌為中心的透明圈。 6．如圖簡單表示葡萄酒的釀制過程，請據(jù)圖分析： (1)葡萄酒的釀制原理是：先通氣使酵母菌進行________________，以增加酵母菌的數(shù)量，然后使酵母菌發(fā)酵獲得葡萄酒。 (2)隨著發(fā)酵過程的加深，液體密度會逐漸變低(可用密度計測量)。其原因是________________________________________________________________________。 (3)在甲中進行攪拌的目的是________________，丙中一段時間后，揭開蓋子是否能夠產生果醋？________(填“能”或“不能”)。 (4)蘋果醋是最受歡迎的飲料之一，其生產過程中利用了________________的發(fā)酵作用。在傳統(tǒng)發(fā)酵技術中，果醋制作往往在果酒制作的基礎上進行，其相關的反應式為：________________________________________________________________________。 答案　(1)有氧呼吸　(2)發(fā)酵時糖被消耗，產生了酒精和CO2，而酒精密度比糖和水低　(3)增加溶氧量　能　(4)醋酸菌　C2H5OH＋O2醋酸菌,CH3COOH＋H2O 解析　(1)酵母菌為一種兼性厭氧真菌，在有氧情況下可進行有氧呼吸，缺氧則進行無氧呼吸。(2)由于發(fā)酵時糖被消耗，產生酒精和CO2，而酒精的密度比糖和水低，這是液體密度降低的原因。(3)攪拌可增加甲內溶氧量，酵母菌有氧呼吸需要氧。揭蓋后氧氣充足，丙中酒精可在醋酸菌作用下被氧化生成醋酸。(4)果醋制作過程中，起作用的微生物主要是醋酸菌。 7．(xx江蘇，30)為了獲得β胡蘿卜素產品，某小組開展了產β胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實驗。請回答下列問題： (1)實驗用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是________________________________；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應該________________________。 (2)為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是______________________________。 (3下圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是________。 (填序號) ①安全閥、放氣閥、壓力表 ②放氣閥、安全閥、壓力表 ③安全閥、放氣閥、溫度表 ④放氣閥、安全閥、溫度表 (4)為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見菌生長，最可能的原因是_____________________________。 (5)為增加β胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細胞時，添加石英砂的目的是__________________________；研磨時__________(填“需要”或“不需要”)添加 CaCO3，理由是____________________________。 答案　(1)干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)　用牛皮紙(報紙)包扎器皿　(2)抑制細菌(放線菌)生長 (3)①　(4)接種環(huán)溫度過高，菌被殺死　(5)有助于研磨充分　不需要　β胡蘿卜素較耐酸 解析　(1)培養(yǎng)皿滅菌常用的方法有濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)、干熱滅菌等。將培養(yǎng)皿放入滅菌鍋之前通常用牛皮紙或報紙包扎，避免滅菌后的再次污染。(2)青霉素能抑制細菌和放線菌的生長繁殖，但對酵母菌等真菌不起作用，因此添加青霉素可篩選出酵母菌。(3)圖中乙連接軟管，為排(放)氣閥，甲為安全閥，丙是壓力表。(4)三塊平板中有兩塊平板長有菌落，說明含有菌株并可在培養(yǎng)基上生長；而其中一塊平板未見菌落，說明接種不成功，可能是接種環(huán)灼燒后未冷卻或未充分冷卻，使菌株因溫度過高而被殺死。(5)從β胡蘿卜素酵母中提取β胡蘿卜素，參照葉綠體中色素提取的方法，可添加石英砂，因為石英砂有助于研磨充分。在提取葉綠體中色素時，CaCO3的作用是中和酸性物質，防止葉綠素被分解，而β胡蘿卜素較耐酸，不易被分解，故在研磨酵母細胞時無需添加CaCO3。 8．圖1表示制備固定化酵母細胞的有關操作和利用固定化酵母細胞進行酒精發(fā)酵的示意圖，圖2是“DNA粗提取與鑒定”相關實驗步驟。請回答下列問題： (1)圖1中，X溶液為____________，其作用是使____________________________。 發(fā)酵過程中用攪拌器攪拌的目的是____________________________________。 (2)在用海藻酸鈉包埋酵母菌形成凝膠珠的過程中，加熱溶解海藻酸鈉時需注意用______________加熱，然后將溶化好的海藻酸鈉溶液________后，加入酵母菌充分攪拌混合均勻。 (3)圖2中，a表示釋放核物質后進行過濾的過程，過濾后取________(填“濾液”或“析出物”)進行下一步實驗；b表示的相關操作過程中，加入2 mol/ L NaCl溶液的作用是__________________；c表示在濾液中加入冷卻的95%的酒精，其目的是________________________________________________________________________。 答案　(1)CaCl2溶液　海藻酸鈉形成凝膠珠　使培養(yǎng)液與酵母菌充分接觸　(2)小火(或間斷)　冷卻(至室溫) (3)濾液　溶解DNA分子　提取雜質更少的DNA(或去除脂溶性雜質) 解析　(1)在制備凝膠珠時需要用CaCl2溶液，海藻酸鈉遇到鈣離子可迅速發(fā)生離子交換，生成凝膠珠，利用這種性質，將海藻酸鈉溶液滴入含有鈣離子的水溶液中可產生海藻酸鈣膠球。(2)為了防止海藻酸鈉焦糊，加熱溶解海藻酸鈉時需注意用小火(或間斷)加熱，然后將溶化好的海藻酸鈉溶液冷卻后，再加入酵母菌充分攪拌混合均勻，防止酵母菌在高溫下死亡。(3)在提取DNA的過程中，首先用清水使血細胞吸水漲破釋放核物質，由于DNA可以溶解于清水中，因此進行過濾后應取濾液進行下一步實驗。DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度最高，DNA不溶于冷卻的95%的酒精。 9．某同學進行葡萄產品開發(fā)的實驗，設計的簡易工藝流程如下圖所示。 (1)渾濁的葡萄汁通過過程③后變得澄清，這是____________催化果膠水解的結果。 (2)將酶應用于生產實踐和科研之前必須對酶進行________________的檢測。 (3)制作葡萄酒時，溫度應該控制在________，釀造過程中如果果汁滅菌不合格，含有醋酸菌，在酒精發(fā)酵旺盛時，醋酸菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸？說明理由。 ________________________________________________________________________。 (4)從野生酵母菌群中分離純化酵母菌，常使用的接種方法是______________和______________兩種。酵母菌適合生活在偏酸性環(huán)境，而放線菌則適合生活在偏堿環(huán)境中，分離二者所用的培養(yǎng)基稱為______________。 (5)葡萄皮、籽中含有原花青素、葡萄皮紅色素和大量葡萄風味物質等，這些物質易溶于乙醇、乙酸乙酯中，因此過程⑤常采用________法來分離提取。 答案　(1)果膠酶　(2)酶活力(酶活性)　(3)18～25 ℃　不能。醋酸菌是好氧細菌，而葡萄酒發(fā)酵是無氧環(huán)境(或醋酸菌是在有氧、30～35 ℃條件下才能將糖轉化為醋酸，而此時發(fā)酵條件為無氧、18～25 ℃)　(4)平板劃線法　稀釋涂布平板法　選擇培養(yǎng)基　(5)萃取 解析　(1)根據(jù)酶的專一性原理，催化果膠水解的酶是果膠酶。(2)將酶應用于生產實踐和科研之前，必須檢測酶活力。(3)酵母菌生存的適宜溫度是18～25 ℃，所以制作葡萄酒時，溫度應該控制在18～25 ℃。在酒精發(fā)酵旺盛時，醋酸菌不能將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸，因為醋酸菌是在有氧、30～35 ℃條件下才能將糖轉化為醋酸，而此時發(fā)酵條件為無氧、18～25 ℃。(4)分離純化酵母菌常用平板劃線法和稀釋涂布平板法。選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)要求或對一些物理、化學抗性而設計的培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。酵母菌和放線菌對pH要求不同，可以此特性設計選擇培養(yǎng)基來分離這二者。(5)原花青素、葡萄皮紅色素和大量葡萄風味物質易溶于有機溶劑中，因此過程⑤常采用萃取法來分離提取。