DBS61 0008-2015 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 植物提取物中苯并（a）芘的測(cè)定 液相色譜-熒光檢測(cè)法.docx

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DBS61/0008—2015 DBS61 陜 西 省 食 品 安 全 地方標(biāo)準(zhǔn) DB S61/0008—2015 植物提取物中苯并（a）芘的測(cè)定 液相色譜-熒光檢測(cè)法 Determination of Benzo (a) pyrene in Plant Extracts by Liquid Chromatography with Fluorescence Detection 2015 - 02-28發(fā)布 2015 -03 -28實(shí)施 陜西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā)布  前 言 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。 請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B均為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)由陜西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā)布并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)陜西出入境檢驗(yàn)檢驗(yàn)局提出并負(fù)責(zé)起草。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：孔祥虹、何強(qiáng)、劉開、張璐、鄒陽(yáng)、李建華、李瑩、付騁宇、吳雙民。 本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。 植物提取物中苯并（a）芘的測(cè)定 液相色譜-熒光檢測(cè)法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了植物提取物中苯并（a）芘殘留量的液相色譜-熒光檢測(cè)法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于生姜、黃芪、甘草、海帶、小白菊、枸杞、蕁麻、貫葉連翹、蔓越橘植物提取物（粉狀）中苯并（a）芘殘留量的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。 3 原理 試樣經(jīng)正己烷提取，用硅膠固相萃取柱和聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱凈化，液相色譜-熒光檢測(cè)法進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法定量。 4 試劑與材料 警告：苯并（a）芘是一種已知的強(qiáng)致癌物質(zhì)，應(yīng)注意危險(xiǎn)品操作規(guī)則。 除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。 4.1 正己烷：色譜純。 4.2 二氯甲烷：色譜純。 4.3 乙腈；色譜純。 4.4 正己烷-二氯甲烷（3 + 1，V/V）：量取300 mL正己烷與100 mL二氯甲烷混合均勻。 4.5 乙腈-水（95 + 5，V/V）：量取950 mL乙腈與50 mL水混合均勻。 4.6 苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：（Benzo(a)pyrene，C20H12，CAS: 50-32-8）：純度≥99 %。 4.7 苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1 mg/mL）：準(zhǔn)確稱取苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10 mg，用乙腈定容至10 mL，搖勻，0 ℃～4 ℃避光保存，有效期1年。 4.8 苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1.0 mg/mL）：準(zhǔn)確量取1 mg/mL苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.025 mL，于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容于25 mL，0 ℃～4 ℃避光保存，有效期6個(gè)月。 4.9 苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：將苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)中間溶液根據(jù)需要用乙腈逐級(jí)稀釋，配制成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。 4.10 硅膠固相萃取柱（1 g，6 mL）：使用前依次用5 mL二氯甲烷、10 mL正己烷活化，保持柱體濕潤(rùn)。 4.11 聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱（Bond Elut ENV柱，500 mg，6 mL）：使用前依次用5 mL二氯甲烷、10 mL正己烷活化，保持柱體濕潤(rùn)。 4.12 微孔濾膜：0.22 mm，有機(jī)系。 5 儀器與設(shè)備 5.1 液相色譜儀：配有熒光檢測(cè)器。 5.2 分析天平：感量0.01 mg。 5.3 天平：感量0.01 g。 5.4 渦旋混勻器。 5.5 超聲波清洗器。 5.6 離心機(jī)：5000 r/min。 5.7 固相萃取裝置。 5.8 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。 5.9 濾膜：0.22 mm。 6 試樣制備與保存 取有代表性樣品200 g，混合均勻，裝入潔凈容器中，密閉并標(biāo)明標(biāo)記，常溫保存。 7 測(cè)定步驟 7.1 提取 準(zhǔn)確稱取試樣 1g（精確至0.01g），加入10 mL正己烷，渦旋混勻，超聲提取30 min，4000 r/min離心5 min，取正己烷層溶液于100 mL梨形瓶中，用10mL正己烷重復(fù)提取2次，合并正己烷提取液，于40 ℃減壓濃縮至約5 mL，待凈化。 7.2 凈化 硅膠固相萃取柱串接在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱上方，取待凈化樣品提取溶液上樣，用約5 mL正己烷洗滌梨形瓶，洗滌液合并上樣，再用15 mL正己烷淋洗固相萃取柱，待淋洗液全部通過(guò)固相萃取柱后，棄去硅膠固相萃取柱，用5 mL正己烷-二氯甲烷溶液（4.4）洗脫聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱，整個(gè)凈化過(guò)程保持流速2~3 mL/min，收集洗脫液，于40 ℃減壓濃縮至干，準(zhǔn)確加入1 mL乙腈溶解定容，過(guò)微孔（5.9）濾膜，供液相色譜檢測(cè)。 7.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 配制濃度為1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/mL的苯并（a）芘系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按規(guī)定的液相色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，以苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)濃度（X，ng/mL）為橫坐標(biāo)，以苯并（a）芘響應(yīng)值（Y）為縱坐標(biāo)作圖，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 7.4 測(cè)定 7.4.1 液相色譜條件 色譜柱：多環(huán)芳烴專用液相色譜柱，粒徑5 mm，250 mm×4.6 mm（內(nèi)徑），或相當(dāng)者； 流動(dòng)相：乙腈-水（95 + 5，V/V）等度洗脫； 柱溫：35 oC； 激發(fā)波長(zhǎng)：384 nm；發(fā)射波長(zhǎng)：406 nm； 流速：1.5 mL / min； 進(jìn)樣量：10 mL。 7.4.2 測(cè)定法 根據(jù)樣液中苯并（a）芘含量情況，選定與樣液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，標(biāo)準(zhǔn)使用溶液和樣液中苯并（a）芘的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)，如果樣液中苯并（a）芘含量超出檢測(cè)的線性范圍，則稀釋后再進(jìn)樣。以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量，在7.4.1給定的液相色譜條件下，苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖參見附錄A中圖A.1。 7.5 空白試驗(yàn) 除不加試樣外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。 8 結(jié)果計(jì)算和表達(dá) 8.1 結(jié)果計(jì)算和表達(dá) 用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式（1）計(jì)算試樣中苯并（a）芘含量 …………………………………………（1） 式中： —試樣中苯并（a）芘的含量，單位為微克每千克，mg/kg； —樣液中苯并（a）芘的色譜峰面積； —標(biāo)準(zhǔn)工作液中苯并（a）芘的濃度，單位為納克每毫升，ng/mL； —樣液最終定容體積，單位為毫升，mL； —標(biāo)準(zhǔn)工作液中苯并（a）芘的色譜峰面積； —試樣質(zhì)量，單位為克，g。 注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。 9 定量限、回收率和精密度 9.1 定量限 本方法苯并芘的定量限為1.0 mg/kg。 9.2 回收率 生姜、黃芪、甘草、海帶、小白菊、枸杞、蕁麻、貫葉連翹、蔓越橘植物提取物（粉狀）中苯并（a）芘的回收率在71.0～118.0 %之間，添加水平及回收率數(shù)據(jù)參見附錄B中表B.1。 9.3 精密度 本方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤10 %。 A A 附　錄　A （資料性附錄） 圖A.1 苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖（2.0 ng/mL） B B 附　錄　B （資料性附錄） 苯并（a）芘殘留量檢測(cè)的添加回收率數(shù)據(jù) 表B.1 植物提取物中苯并（a）芘殘留的添加回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)（n=6） 樣品 加標(biāo)水平 （mg/kg） 回收率范圍 （%） 樣品 加標(biāo)水平（mg/kg） 回收率范圍 （%） 生姜提取物 1.0 82.0~100.0 小白菊 提取物 1.0 75.0~107.0 2.0 80.5~107 2.0 82.0~107.5 5.0 76.4~92.8 5.0 89.0~110.2 黃芪 提取物 1.0 71.0~118.0 蕁麻 提取物 1.0 73.0~105.0 2.0 80.0~103.0 2.0 86.5~106.0 5.0 85.0~100.6 5.0 74.2~91.0 甘草 提取物 1.0 74.0~100.0 貫葉連翹取物 2.0 71.0~104.5 2.0 87.02~96.5 5.0 77.8~91.0 5.0 85.2~106.4 10.0 86.4~106.4 海帶 提取物 1.0 76.0~110.0 枸杞提取物 1.0 73.0~106.0 2.0 79.5~106.5 2.0 89.0~105.5 5.0 89.4~102.8 5.0 97.8~117.8 _________________________________ 7