DBS45 054-2018 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 食品中氟蟲腈及其代謝物殘留量測(cè)定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法.doc

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DBS45 廣西壯族自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn) DBS45/054—2018 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 食品中氟蟲腈及其代謝物殘留量測(cè)定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 2018 - 12 - 30發(fā)布 2019 - 06 - 30實(shí)施 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布 DBS45/054—2018 前言 本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T 1.1—2009的格式編寫。 本標(biāo)準(zhǔn)由廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會(huì)提出。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：廣西出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：秦富、汪文龍、司露露、吳玉杰、呂春秋、羅兆飛、趙永鋒、黃大新、鄭玲、蔡翔宇。 8 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 食品中氟蟲腈及其代謝物殘留量測(cè)定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 1　 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中氟蟲腈及其代謝物氟蟲腈亞砜、氟蟲腈砜和氟甲腈殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于蘋果、芒果、尖椒、大米、綠茶、豬肝、牛肉、蝦、雞蛋中氟蟲腈及其代謝物殘留量的檢測(cè),其它同類食品可參照?qǐng)?zhí)行。 2　 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB 2763 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量 GB/T 27404 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè) GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3　 原理 試樣中的氟蟲腈及其代謝物殘留量用1%醋酸乙腈振蕩提取，用吸附劑Na2SO4、PSA、C18和GCB進(jìn)行凈化，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。 4　 試劑及其配制 除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682中規(guī)定的一級(jí)水。 4.1　 試劑和材料 4.1.1　 乙腈（C2H3N）：色譜純。 4.1.2　 甲醇（CH3OH）：色譜純。 4.1.3　 醋酸（CH3COOH）：色譜純。 4.1.4　 無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）：用前于650℃灼燒4 h，處于干燥器中冷卻使用。 4.1.5　 無(wú)水醋酸鈉（CH3COONa）。 4.1.6　 無(wú)水硫酸鎂（MgSO4）。 4.1.7　 N-丙基乙二胺（PSA）：40—60 μm。 4.1.8　 HC-C18型吸附劑（C18）：40—63 μm。 4.1.9　 石墨化炭黑（GCB）：120—400 MESH。 4.1.10　 凈化管：分別稱取1.00 g Na2SO4、0.30 g PSA、0.20 g C18和0.10 g GCB至15 mL離心管中。 4.2　 溶液配制 4.2.1　 1%醋酸乙腈溶液：取10 mL醋酸，加入乙腈并定容至1000 mL。 4.2.2　 乙腈水溶液（1+1, v/v）：取500 mL乙腈，加入500 mL水，搖勻備用。 4.3　 標(biāo)準(zhǔn)品 4.3.1　 氟蟲腈：Fipronil，C12H4Cl2F6N4OS，CAS號(hào)120068-37-3，純度大于等于98%。 4.3.2　 氟蟲腈砜：Fipronil-sulfone，C12H4Cl2F6N4O2S，CAS號(hào)120068-36-2，純度大于等于98%。 4.3.3　 氟蟲腈亞砜：Fipronil-sulfide，C12H4Cl2F6N4S，CAS號(hào)120067-83-6，純度大于等于98%。 4.3.4　 氟甲腈：Fipronil-desulfinyl，C12H4Cl2F6N4，CAS號(hào)205650-65-3，純度大于等于99%。 4.4　 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 4.4.1　 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取適量（精確至0.0001 g）各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用丙酮溶解配制濃度為100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，避光-18℃保存，保存期12個(gè)月。 4.4.2　 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別準(zhǔn)確移取適量的氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈亞砜和氟甲腈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋配制成濃度為1 μg/mL，避光-18℃保存，保存期1個(gè)月。 4.4.3　 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，用乙腈水（4.2.2）配制成適用濃度（至少5個(gè)濃度系列，用于做標(biāo)準(zhǔn)工作曲線），現(xiàn)配現(xiàn)用。 5　 儀器設(shè)備 5.1　 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI源）。 5.2　 分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。 5.3　 刀式研磨儀。 5.4　 粉碎機(jī)。 5.5　 離心機(jī)：4000 r/min。 5.6　 渦旋振蕩器。 5.7　 垂直或水平往復(fù)型振蕩器。 5.8　 移液器：100 μL，1000 μL，5000 μL。 5.9　 容量瓶：100 mL。 5.10　 微孔濾膜：0.22 μm，有機(jī)相。 5.11　 聚丙烯離心管：15 mL，50 mL。 6　 試樣制備與保存 6.1　 取樣要求 樣品的取樣部位按GB 2763附錄A執(zhí)行，在制樣的操作過(guò)程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。 6.2　 試樣制備 6.2.1　 蘋果、芒果、尖椒 取樣品500 g，切碎，再用刀式研磨儀均質(zhì)化，裝入潔凈容器。 6.2.2　 大米、茶葉 取樣品500 g（茶葉取200 g），用粉碎機(jī)充分磨碎，混勻，裝入潔凈容器。 6.2.3　 豬肝、牛肉、蝦 取樣品500 g，切成小塊，再用刀式研磨儀均質(zhì)化，裝入潔凈容器。 6.2.4　 雞蛋 取樣品500 g，去殼，再用刀式研磨儀均質(zhì)化，裝入潔凈容器。 6.3　 試樣保存 雞蛋等試樣4℃避光保存；蘋果、芒果、尖椒、豬肝、牛肉、蝦等試樣于≤-18℃避光保存；大米、茶葉等試樣于室溫干燥處避光保存。 7　 分析步驟 7.1　 稱樣及預(yù)處理 7.1.1　 蘋果、芒果、尖椒 稱取10 g（精確至0.01 g）均勻試樣于50 mL聚丙烯離心管中。 7.1.2　 大米、豬肝、牛肉、蝦、雞蛋 稱取5 g（精確至0.01 g）均勻試樣于50 mL聚丙烯離心管中， 加入5 mL水，渦旋振蕩1 min，室溫浸泡20 min，期間振蕩2~3次。肉類和內(nèi)臟處理后應(yīng)呈乳糜狀。 7.1.3　 茶葉 稱取2 g（精確至0.01 g）均勻試樣于50 mL聚丙烯離心管中，加8 mL水，渦旋振蕩1 min，室溫浸泡20 min。 7.2　 提取及凈化 向經(jīng)過(guò)預(yù)處理的試樣中加入10 mL 1%醋酸乙腈（4.2.1），蓋緊，振蕩10 min；每管加入4 g無(wú)水硫酸鎂和1 g無(wú)水醋酸鈉，立即蓋緊并渦旋振蕩混合，再于振蕩器上振蕩20 min，然后以4000 rpm離心5 min；取2.5 mL上層清液至凈化管(4.1.10)中，渦旋振蕩1~2 min，以4000 rpm離心5 min；取1 mL上層清液，加入1 mL水，渦旋混合30 s，4000 rpm離心5 min，過(guò)0.22 μm有機(jī)相濾膜后裝瓶。 7.3　 測(cè)定 7.3.1　 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜參考條件 7.3.1.1 液相色譜條件 7.3.1.1.1　 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18, 1.7 μm, 2.1 mm×50 mm，或性能相當(dāng)者。 7.3.1.1.2　 柱溫：35 ℃。 7.3.1.1.3　 流動(dòng)相：A為水；B為乙腈，梯度洗脫程序見表1。 7.3.1.1.4　 進(jìn)樣量：5 μL。 表1　 梯度洗脫程序 時(shí)間（min） 流速（mL/min） A(%) B(%) 0 0.3 50 50 0.5 0.3 50 50 3.0 0.3 10 90 3.9 0.3 10 90 4.0 0.3 50 50 5.0 0.3 50 50 7.3.1.2　 質(zhì)譜條件 7.3.1.2.1　 ESI離子源，負(fù)離子模式。 7.3.1.2.2　 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描。 7.3.1.2.3　 毛細(xì)管電壓（Capillary）：-3.4 kV。 7.3.1.2.4　 源溫度（Source Temperature）：150 ℃。 7.3.1.2.5　 脫溶劑氣溫度（Desolvation Temperature）：500 ℃。 7.3.1.2.6　 脫溶劑氣流（Desolvation Gas Flow）：800 L/Hr。 7.3.1.2.7　 錐孔氣流（Cone Gas Flow）：50 L/Hr。 7.3.1.2.8　 四種化合物的監(jiān)測(cè)離子對(duì)參數(shù)見表2。 表2　 氟蟲腈及其代謝物的監(jiān)測(cè)離子對(duì)參數(shù) 分析物 母離子（m/z） 子離子（m/z） 錐孔電壓(V) 碰撞能(eV) 保留時(shí)間(min) 氟蟲腈 435.0 330.0* 30 12 2.64 氟蟲腈 435.0 250.0 30 26 2.64 氟蟲腈砜 451.1 282.1* 30 25 3.05 氟蟲腈砜 451.1 415.1 30 14 3.05 氟蟲腈亞砜 419.1 262.1* 30 27 3.06 氟蟲腈亞砜 419.1 383.1 30 10 3.06 氟甲腈 387.2 351.1* 30 10 2.83 氟甲腈 387.2 282.1 30 30 2.83 氟甲腈 387.2 331.0 30 26 2.83 注： *，表示定量子離子；387.2/331.0為氟甲腈?zhèn)溆秒x子對(duì)。 7.3.2　 色譜測(cè)定與確證 根據(jù)試樣中氟蟲腈及其代謝物的含量情況，選擇濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行色譜分析，以峰面積進(jìn)行外標(biāo)曲線定量。在上述色譜條件下，氟蟲腈及其代謝物的參考保留時(shí)間見表2。標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子色譜圖參見附錄A。 按照上述條件測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作液，如果檢測(cè)的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作液的時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi)；定性離子對(duì)的相對(duì)豐度與相當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度偏差不超過(guò)表3的規(guī)定，則可判斷樣品中存在相應(yīng)的被測(cè)物。 表3　 定性時(shí)相對(duì)離子豐度最大容許誤差 相對(duì)豐度（基峰） >50 % >20 %至50 % >10 %至20 % ≤10 % 允許的相對(duì)偏差 ±20 % ±25 % ±30 % ±50 % 7.4　 空白實(shí)驗(yàn) 除不加試樣外，均按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。 8　 結(jié)果計(jì)算和表述 8.1　 結(jié)果計(jì)算 按色譜數(shù)據(jù)處理軟件中的外標(biāo)曲線定量或按式（1）計(jì)算試樣中氟蟲腈及其代謝物的殘留量。 ···············（1） 式中： X ——試樣中目標(biāo)化合物的殘留量，單位為μg/kg； A ——樣液中目標(biāo)化合物的峰面積； V ——加入提取液體積，單位為mL； f ——稀釋倍數(shù)，f = 2； As ——標(biāo)準(zhǔn)工作液中目標(biāo)化合物的峰面積； c——標(biāo)準(zhǔn)工作液中目標(biāo)化合物的濃度，單位為ng/mL； m ——稱樣量，單位為g。 注： 計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。 8.2　 結(jié)果表述 依據(jù)GB 2763對(duì)氟蟲腈殘留物的定義，應(yīng)計(jì)算氟蟲腈總量作為樣品中氟蟲腈的殘留量。氟蟲腈總量=氟蟲腈含量+氟蟲腈砜含量+氟蟲腈亞砜含量+氟甲腈含量 9　 精密度 本標(biāo)準(zhǔn)的精密度數(shù)據(jù)是按照GB/T27404-2008規(guī)定確定的，以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示，參見附錄B。 10　 測(cè)定低限和回收率 10.1　 定量限 本方法氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈亞砜和氟甲腈在蔬菜、水果中的定量限均為0.50 μg/kg；在糧谷類、肉類、內(nèi)臟、鮮蛋中的定量限均為1.0 μg/kg；在茶葉中的定量限均為2.5 μg/kg。 10.2　 回收率 氟蟲腈及其代謝物在不同試樣及不同添加濃度加標(biāo)試驗(yàn)中的回收率參見附錄B。 A A 附　錄　A （資料性附錄） 標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子色譜圖 圖A.1　 氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈亞砜、氟甲腈標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子色譜圖 B 附　錄　B （資料性附錄） 氟蟲腈及其代謝物的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 表B.1　 不同添加濃度氟蟲腈的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6） 樣品名稱 0.5a/1b/2.5c μg/kg 2 a/4b/10c μg/kg 10a/20b/50c μg/kg Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% 綠茶c 85.1 4.1 81.2 4.0 84.0 2.7 大米b 112.6 2.5 91.7 6.6 98.3 4.1 雞蛋b 95.2 4.7 94.7 4.2 102.3 1.9 尖椒a 88.9 6.5 88.0 13.6 85.9 6.8 芒果a 109.2 3.5 95.7 7.7 101.7 4.1 牛肉b 86.5 2.8 80.0 2.8 87.0 5.5 蘋果a 100.7 5.8 96.5 1.5 97.3 2.7 蝦b 75.5 6.6 84.6 4.8 88.3 3.4 豬肝b 89.6 4.5 84.8 2.5 84.5 2.2 注： 不同類別樣品的加標(biāo)水平不同，分別以a, b, c進(jìn)行區(qū)別。 表B.2　 不同添加濃度氟蟲腈砜的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6） 樣品名稱 0.5a/1b/2.5c μg/kg 2 a/4b/10c μg/kg 10a/20b/50c μg/kg Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% 綠茶c 107.3 3.3 103.9 3.4 99.5 5.0 大米b 113.6 3.3 104.2 0.8 101.6 1.6 雞蛋b 100.8 3.7 89.5 4.0 94.0 4.4 尖椒a 108.7 3.1 109.2 2.9 109.1 2.7 芒果a 112.1 3.3 107.4 4.9 112.4 3.1 牛肉b 96.5 5.2 90.4 2.5 92.4 2.6 蘋果a 102.6 9.0 103.4 3.6 101.6 4.0 蝦b 103.9 6.5 101.9 2.5 100.7 2.4 豬肝b 115.1 0.9 108.5 4.8 114.4 3.1 注： 不同類別樣品加標(biāo)水平不同，分別以a, b, c進(jìn)行區(qū)別。 表B.3　 不同添加濃度氟蟲腈亞砜的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6） 樣品名稱 0.5a/1b/2.5c μg/kg 2 a/4b/10c μg/kg 10a/20b/50c μg/kg Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% 綠茶c 109.9 3.1 103.5 2.7 109.6 2.5 大米b 99.1 3.2 92.7 2.2 94.8 2.6 雞蛋b 112.1 3.2 107.1 0.8 112.4 2.2 尖椒a 105.8 5.3 96.8 4.2 99.8 3.6 芒果a 95.6 4.3 99.4 1.2 103.3 2.2 牛肉b 93.3 6.2 102.2 3.5 104.1 3.3 蘋果a 106.8 3.6 105.2 3.9 113.8 2.6 蝦b 103.2 4.8 98.9 3.0 99.4 2.8 豬肝b 93.2 4.0 98.4 12.4 100.7 3.2 注： 不同類別樣品的加標(biāo)水平不同，分別以a, b, c進(jìn)行區(qū)別。 表B.4　 不同添加濃度氟甲腈的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6） 樣品名稱 0.5a/1b/2.5c μg/kg 2 a/4b/10c μg/kg 10a/20b/50c μg/kg Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% Rec/% RSD/% 綠茶c 90.7 1.6 87.1 2.3 84.6 3.6 大米b 92.3 4.1 85.8 3.6 93.8 2.5 雞蛋b 96.9 4.1 95.0 1.8 97.7 2.3 尖椒a 81.3 6.6 86.3 3.4 82.7 3.3 芒果a 93.0 1.6 88.9 3.4 97.2 3.3 牛肉b 89.0 5.0 84.6 4.1 88.4 4.8 蘋果a 73.0 4.0 70.0 2.0 75.4 2.9 蝦b 88.5 2.7 95.7 2.7 94.6 3.8 豬肝b 86.5 2.1 77.5 0.7 76.8 2.1 注： 不同類別樣品的加標(biāo)水平不同，分別以a, b, c進(jìn)行區(qū)別。 _________________________________