2019-2020年高中生物第1部分微生物的利用實驗1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離教案浙科版選修.doc
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2019-2020年高中生物第1部分微生物的利用實驗1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離教案浙科版選修課標(biāo)解讀重點難點1.進行大腸桿菌的擴增,利用液體培養(yǎng)基進行細菌培養(yǎng)的操作。2.進行大腸桿菌的分離,用固體平面培養(yǎng)基進行細菌的劃線培養(yǎng)。3.說明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和實驗原理。1.微生物實驗的無菌操作。2.利用LB液體培養(yǎng)基進行細菌培養(yǎng)。3.利用LB固體培養(yǎng)基分離大腸桿菌。4.劃線分離法和涂布分離法。2在腸道中,大腸桿菌一般對人無害,但也有一些菌株可以侵襲腸黏膜并產(chǎn)生毒素,任何大腸桿菌如果進入人的泌尿系統(tǒng),都會對人體產(chǎn)生危害。3大腸桿菌是基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具。二、實驗內(nèi)容1本實驗的內(nèi)容是將大腸桿菌擴大培養(yǎng)和劃線分離。分離后,一個菌體便會形成一個菌落,這是消除污染雜菌的通用方法,也是用于篩選高表達量菌株的最簡便方法之一。2本實驗用LB液體培養(yǎng)基(通用的細菌培養(yǎng)基)擴大培養(yǎng)大腸桿菌。培養(yǎng)后再在LB固體平面培養(yǎng)基上劃線進行分離,隨后培養(yǎng)基上便會形成一個個單獨的菌落。三、細菌的培養(yǎng)和分離1細菌以分裂的方式繁殖,分裂速度很快,約20分鐘分裂一次。人們在培養(yǎng)細菌時,一般用接種環(huán)轉(zhuǎn)移帶菌的培養(yǎng)物。接種時,先將接種環(huán)在明火上燒紅后冷卻,再操作。2細菌的分離(1)劃線分離法:在液體培養(yǎng)基中,只要接種后培養(yǎng)8 h,每毫升培養(yǎng)基中就有幾億個細菌??捎媒臃N環(huán)蘸菌液在含有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿平板上劃線,在劃線過程中接種環(huán)上的菌液逐漸減少,因此,劃線到最后,可使細菌間的距離加大。在固體培養(yǎng)基培養(yǎng)1020 h后,可由一個細菌產(chǎn)生單菌落,菌落不會重疊。如果再將每個菌落分別接種至含有固體培養(yǎng)基的試管斜面上,在斜面上劃線,則每個斜面的菌群就是由一個細菌產(chǎn)生的后代。這種方法也可用于分離細菌,將污染的雜菌除去。接種環(huán)在取菌種前和劃線前都要灼燒、而后都要冷卻、操作完畢后又要灼燒的原因是什么?【提示】取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上的微生物;除第一次劃線外,其余劃線前都要灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種;取菌種和劃線前都要求接種環(huán)冷卻后進行,目的是防止高溫殺死菌種;最后灼燒接種環(huán)的目的是防止細菌污染環(huán)境和操作者。(2)涂布分離法:先將培養(yǎng)的菌液稀釋,通常稀釋105107倍,然后取0.1 mL不同稀釋度的稀釋菌液加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上,用玻璃刮刀涂布在培養(yǎng)基平面上進行培養(yǎng),在適當(dāng)?shù)南♂尪认?,可產(chǎn)生相互分開的菌落。通常每個培養(yǎng)皿有20個以內(nèi)的單菌落最為適合。將每個菌落分別接種在斜面上擴增培養(yǎng)后,再做功能性實驗。細菌的兩種分離法各有優(yōu)點,都可采用。劃線分離法,方法簡單;涂布分離法,單菌落更易分開,但操作復(fù)雜些。四、滅菌操作1各種器皿必須是無菌的:實驗用具用牛皮紙或報紙包好,所有容器都先封口,然后進行高壓蒸汽滅菌(1 kg/cm2壓力、121 、15 min)處理,并在超凈臺上使用。注意:實驗中所需棉花不能用脫脂棉,因為脫脂棉易吸水。2各種培養(yǎng)基必須是無菌的。3細菌轉(zhuǎn)移過程要避免雜菌污染和菌種外泄。注意:培養(yǎng)皿需倒置,防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基,沖散菌落。五、大腸桿菌培養(yǎng)與分離的實驗步驟1在兩個250 mL三角瓶中分別裝入50 mL LB液體培養(yǎng)基和50 mL LB固體培養(yǎng)基,加上封口膜。將培養(yǎng)皿包好,連同培養(yǎng)基一同滅菌15 min。2滅菌后待培養(yǎng)基冷卻至60 時,關(guān)閉紫外燈,點燃酒精燈,并用酒精棉球擦拭桌面和實驗者的手。在酒精燈火焰旁用右手持盛有固體培養(yǎng)基的三角瓶,左手拿培養(yǎng)皿,并將培養(yǎng)基倒入4個培養(yǎng)皿中,將培養(yǎng)皿置于水平位置上,待其凝固。為什么要在酒精燈火焰旁進行操作?【提示】酒精燈火焰旁約10 cm的空間是一個無菌區(qū),在酒精燈火焰旁操作能防止雜菌污染。3擴大培養(yǎng)先將接種環(huán)在酒精燈火焰上燒紅,再深入到大腸桿菌斜面,使環(huán)冷卻后,取菌體,并將菌體放入三角瓶液體培養(yǎng)基中,封瓶后在37 每分鐘200轉(zhuǎn)的搖床上振蕩培養(yǎng)12 h。4劃線分離用在酒精燈火焰上灼燒后的接種環(huán)深入到搖床上培養(yǎng)后的菌液中,然后在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線,接種環(huán)需蘸菌液1次,劃線后蓋好皿蓋,將培養(yǎng)皿倒置,在37 ,恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1224 h后,可在劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個菌落,表明菌已被分離。5. 在無菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出,再用劃線法接種在斜面上,37 培養(yǎng)24 h后,置于4 冰箱中保存。微生物培養(yǎng)的基本條件1.培養(yǎng)基及其類型(1)培養(yǎng)基:概念:人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì),此即培養(yǎng)基。作用:在提供主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上,培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)及O2的需求,如培養(yǎng)乳酸桿菌時需在培養(yǎng)基中添加維生素,培養(yǎng)霉菌時需將pH調(diào)至酸性,培養(yǎng)厭氧型微生物需給予無氧條件等。(2)培養(yǎng)基的種類劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑微生物的擴大培養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑,如瓊脂觀察微生物的運動、分類鑒定固體培養(yǎng)基微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌,可在培養(yǎng)基中加入青霉素;培養(yǎng)金黃色葡萄球菌,可在培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽)用途鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點,在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物,如可用伊紅美藍培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有,菌落呈深紫色,并帶有金屬光澤)2.無菌技術(shù)進行微生物培養(yǎng)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染,無菌技術(shù)即圍繞著如何避免雜菌的污染展開,主要包括以下幾個方面:(1)對實驗操作的空間、操作者的衣著和手,進行清潔和消毒。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌。(3)為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行。(4)實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。3消毒和滅菌的比較概念常用方法應(yīng)用的范圍消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法,殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法:在100 開水中煮沸56 min一般物品巴氏消毒法:7075 煮30 min或在80 煮15 min對于一些不耐高溫的液體,如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等滅菌使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼燒滅菌:酒精燈火焰接種工具的滅菌干熱滅菌:干熱滅菌箱內(nèi)160170 下滅菌12 h玻璃器皿、金屬工具的滅菌高壓蒸汽滅菌:121 條件下,滅菌1530 min培養(yǎng)基及容器的滅菌注:消毒與滅菌的最大區(qū)別是芽孢和孢子能否存活某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)。請回答與此實驗相關(guān)的問題。(1)制備培養(yǎng)基:根據(jù)物理性質(zhì)的不同,可以將培養(yǎng)基分為液體、半固體和固體培養(yǎng)基。對細菌進行大量的擴增,用_培養(yǎng)基進行培養(yǎng);對細菌進行分離,用_培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。(2)滅菌:在培養(yǎng)微生物時必須進行無菌操作,包括各種_都必須是無菌的。對它們進行滅菌,通常用_法滅菌。(3)接種及培養(yǎng):接種時常用的工具是_和玻璃三角刮刀。 為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結(jié)果,應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于_中培養(yǎng),培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 。要使該實驗所得結(jié)果可靠,還應(yīng)該同時在另一平板上接種_作為對照進行實驗。(4)菌落觀察計數(shù):培養(yǎng)20小時后,觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落,這說明湖水樣品中有_種細菌。一般說來,菌落總數(shù)越多,湖水遭受細菌污染的程度越_。(5)選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長。如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度,可以用于篩選耐_細菌?!舅悸伏c撥】(1)細菌擴大培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基,分離用固體培養(yǎng)基。(2)無菌操作包括所有的器皿要無菌,所有的培養(yǎng)基要無菌,接種過程要防止雜菌污染。實驗室中常用高壓蒸汽滅菌法。(3)接種時常用接種環(huán),用恒溫培養(yǎng)箱保持溫度。在實驗過程中,除實驗變量以外的其他各變量應(yīng)適宜且相同,以利于更好地實現(xiàn)實驗?zāi)康摹?4)不同的菌落具有各自不同的菌落特征(如硬度、顏色、透明度、光滑度等。)(5)選擇培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來?!敬鸢浮?1)液體固體平面(2)器皿和培養(yǎng)基 高壓蒸汽滅菌(3)接種環(huán)恒溫培養(yǎng)箱無菌水 (4)多高(5)鹽(或NaCl)1細菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、用酒精棉球擦試、火焰灼燒等幾種不同的處理,這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌()A接種環(huán)、手、培養(yǎng)基B高壓鍋、手、接種環(huán)C培養(yǎng)基、手、接種環(huán)D接種環(huán)、手、高壓鍋【解析】此題考查對無菌技術(shù)的掌握。高壓蒸汽滅菌鍋是滅菌的一個設(shè)備,通常用于培養(yǎng)基的滅菌。用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法?;鹧孀茻梢匝杆購氐椎販缇?,適用于微生物接種工具的滅菌,如接種環(huán)?!敬鸢浮緾大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1.LB培養(yǎng)基的制備(1)計算:根據(jù)LB培養(yǎng)基配方的比例,計算配制50 mL 的培養(yǎng)基時各種成分的用量。(2)稱量:準(zhǔn)確地稱取各種成分。即:蛋白胨0.5 g、酵母提取物0.25 g、氯化鈉0.5 g,加水50 mL。(如配LB固體培養(yǎng)基,則再加1 g 瓊脂)(3)制備空白斜面:將LB液體培養(yǎng)基配好,加入瓊脂并加熱使之融化后,通過玻璃漏斗加入試管中,每試管2 mL,加棉塞并將試管捆在一起,上端加蓋一張牛皮紙,滅菌。滅菌后斜靠于平放的鉛筆上,冷卻后即成空白斜面培養(yǎng)基。2進行大腸桿菌培養(yǎng)與分離操作(1)滅菌(2)制備LB固體平面培養(yǎng)基倒平板操作待培養(yǎng)基冷卻至60 左右時,在酒精燈火焰附近倒平板。倒平板的具體操作描述如下:(3)擴大培養(yǎng)左手持大腸桿菌斜面和有液體培養(yǎng)基的三角瓶,右手拿接種環(huán)并用無名指、小指夾住斜面的棉塞和三角瓶封口膜。將接種環(huán)在火焰上燒紅,再深入到斜面,使其冷卻后取菌體。將菌體放入三角瓶液體培養(yǎng)基中(將封口膜及斜面棉塞復(fù)原)。三角瓶在37 搖床振蕩培養(yǎng)12 h。(4)劃線分離取種在酒精燈火焰上灼燒接種環(huán),將上述培養(yǎng)后的菌液打開,接種環(huán)部分深入到菌液中取種。平板劃線操作在LB固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線(如下圖所示),劃線后蓋好培養(yǎng)皿。培養(yǎng)將上述劃線操作后的培養(yǎng)皿倒置放至37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1224 h,可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個菌落,表明菌已被分離。(5)菌種純化與保藏在無菌操作下,將單菌落用接種環(huán)取出,再用劃線法接種至斜面上,37 培養(yǎng)24 h后,4 冰箱保存即可。劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面,以期在連續(xù)劃線后,可以分離到由單個細胞繁殖而來的子細胞群體(菌落),從而達到純化菌種的目的,為此,在劃線操作時,接種環(huán)只需在菌液中蘸取菌液一次,且作第二次及其以后的劃線操作時,須從上一次劃線的末端劃線如此可使菌體數(shù)量隨劃線次數(shù)的增加而減少,并逐步分散,最終實現(xiàn)在平板上得到單菌落的目的。下圖為“大腸桿菌的培養(yǎng)和分離”實驗的基本流程:請回答:(1)滅菌常用_法,滅菌后,要待_時才能打開鍋蓋。(2)倒平板和接種前要用_擦手。接種和劃線前使用_的方法對接種環(huán)滅菌。(3)劃線分離時,接種環(huán)在菌液中蘸取_次。下圖甲表示在平板培養(yǎng)基上的第一次和第二次劃線,請在乙圖中畫出第三次劃線。(4)劃線后在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時,培養(yǎng)皿須倒置,目的是_。(5)實驗完成后,接觸過細菌的器皿應(yīng)如何處理?_?!舅悸伏c撥】此題考查大腸桿菌的培養(yǎng)和分離過程,具體分析如下:(1)滅菌是指對LB液體培養(yǎng)基和LB固體培養(yǎng)基進行的滅菌。對培養(yǎng)基進行的滅菌應(yīng)該是用滅菌鍋進行高壓蒸汽滅菌。滅菌后,滅菌鍋內(nèi)的壓力與大氣壓相同時,才能打開滅菌鍋,否則會造成培養(yǎng)液濺出。(2)在進行實驗操作時,操作者的雙手要用酒精棉球擦拭消毒,接種環(huán)要用火焰燒灼滅菌。(3)劃線分離時,接種環(huán)在菌液中蘸取菌液1次然后連續(xù)劃線。(4)在培養(yǎng)時,培養(yǎng)皿須倒置,目的是防止冷凝后形成的水滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基,沖散菌落。(5)實驗完成后,接觸過細菌的器皿應(yīng)滅菌處理以防止污染?!敬鸢浮?1)高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)壓力與大氣壓相同(2)酒精棉球(酒精燈火焰上)灼燒(3)1(見右圖)(4)避免水滴污染培養(yǎng)基(5)接觸過細菌的器皿應(yīng)作滅菌處理劃線分離操作第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒滅菌,劃線操作結(jié)束仍需灼燒接種環(huán),每次灼燒的目的如下表:第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結(jié)束灼燒目的避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留的菌種,使每次劃線的菌種來自上次劃線末端殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免細菌污染環(huán)境和感染操作者灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后才能伸入菌液,以免溫度太高殺死菌種。劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。劃線用力要大小適當(dāng),防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。2下圖為“大腸桿菌的培養(yǎng)和分離”實驗的基本流程,請回答:(1)A過程配制的是通用細菌培養(yǎng)基,稱為_培養(yǎng)基。配制時除了加入特定的營養(yǎng)物質(zhì)以外,還要加入一定量的氯化鈉,以維持_。對培養(yǎng)基酸堿度的調(diào)節(jié),應(yīng)該在B過程的_(填“前面”或“后面”)。(2)D過程與C過程相比,培養(yǎng)基中增加的物質(zhì)是_。E過程所需的溫度是_。(3)D過程后,一個菌體便會形成一個_,這種分離方法是_的通用方法,也是篩選特定菌株的最簡便方法之一?!敬鸢浮?1)LB滲透壓前面(2)瓊脂4 (3)(單)菌落消除污染雜菌(純化菌種)1下列有關(guān)倒平板操作錯誤的是()A將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上B使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰C將培養(yǎng)皿打開,培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上D等待平板冷卻凝固后需要將平板倒過來放置【解析】整個倒平板過程要防止外來雜菌的入侵,因此,滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁,打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰,培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,不能將培養(yǎng)皿蓋完全打開,等待平板冷卻凝固后需要將平板倒過來放置?!敬鸢浮緾2無菌技術(shù)包括以下幾個方面的敘述,其中錯誤的是()A對培養(yǎng)操作的空間、操作者的衣著和手進行滅菌B對培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌C為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行D實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸【解析】滅菌是采用強烈的理化因素對用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)皿、接種用具和培養(yǎng)基進行處理,使物體內(nèi)外一切微生物,包括芽孢和孢子都要被殺死;實驗操作者的衣著和手以及操作空間只能進行消毒?!敬鸢浮緼3下列依次表示倒平板、接種的位置,以及劃線法接種的路徑示意圖,其中錯誤的是()【解析】在劃線時,應(yīng)在第一區(qū)的劃線末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線,在第二區(qū)的劃線末端開始往第三區(qū)劃線。【答案】D4關(guān)于大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實驗以下敘述不正確的是()A本實驗的內(nèi)容是將大腸桿菌進行擴大培養(yǎng)和劃線分離B本實驗用LB液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)大腸桿菌,再在LB固體平面培養(yǎng)基上劃線進行大腸桿菌的分離C除劃線分離外,也可用涂布分離法分離大腸桿菌,兩種分離方法中劃線分離方法簡單且單菌落更易分開D進行培養(yǎng)之前對加入培養(yǎng)基的三角瓶、試管也要在121 下滅菌15 min【解析】劃線分離與涂布分離均可實現(xiàn)對大腸桿菌的分離,其中劃線分離法操作簡單,但單菌落相對不易分開,涂布分離法操作雖相對復(fù)雜,但單菌落更易分開?!敬鸢浮緾5微生物與人類關(guān)系密切。雖然有些微生物能使動植物患病,但多數(shù)微生物對人類是有益的。請回答:(1)培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供_。對培養(yǎng)基進行滅菌,應(yīng)該采用的方法是_。接種時通常采用_法。(2)在制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的倒平板操作時,平板冷凝后,要將平板倒置的原因是_。(3)微生物接種的方法很多,最常用的是平板劃線法和_法。在用平板劃線法接種時,在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)的目的是_。在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?_?!敬鸢浮?1)氮源(碳源)、碳源高壓蒸汽滅菌平板劃線(2)皿蓋上會凝有水珠,防止水珠落入培養(yǎng)皿造成污染,還可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)(3)稀釋涂布平板第一步灼燒接種環(huán)是防止接種環(huán)上有其他微生物而污染培養(yǎng)基。每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次接種時留下的菌種,使下一次劃線時接種環(huán)上的菌種直接來自上次劃線的末端,以便通過多次劃線后,得到單個的菌落劃線結(jié)束后仍要灼燒接種環(huán),以免菌種對環(huán)境造成污染和感染操作者學(xué)業(yè)達標(biāo)測評(一)大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1要從多種細菌中分離某種細菌,培養(yǎng)基要用()A固體培養(yǎng)基B液體培養(yǎng)基C加青霉素的培養(yǎng)基D加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基【解析】分離微生物應(yīng)使用固體培養(yǎng)基。【答案】A2涂布平板操作需要用到()A接種環(huán)、滴管、酒精燈B接種環(huán)、移液管、酒精燈C涂布器、移液管、酒精燈D涂布器、接種環(huán)、酒精燈【解析】涂布平板操作過程中不需要接種環(huán)?!敬鸢浮緾3采用干熱滅菌、灼燒滅菌、高壓蒸汽滅菌、紫外線照射等幾種方法,可分別殺死哪些部位的雜菌()A接種環(huán)、吸管、培養(yǎng)基、接種室B吸管、接種環(huán)、培養(yǎng)基、接種箱C培養(yǎng)基、接種環(huán)、吸管、接種箱D培養(yǎng)皿、吸管、培養(yǎng)基、雙手【解析】干熱滅菌主要對玻璃器皿進行滅菌,紫外線主要對接種室和接種箱進行空氣和表面滅菌?!敬鸢浮緽4下列操作錯誤的是()A用酒精擦拭雙手B用氯氣消毒水源C實驗室用紫外線進行消毒D玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)用酒精直接擦拭即可達到徹底滅菌的目的【解析】玻璃器皿應(yīng)用干熱無菌箱在160170 加熱12 h才能達到無菌目的?!敬鸢浮緿5在涂布平板操作時錯誤的是()A將涂布器在酒精燈火焰上灼燒,直到燒紅B取少量菌液滴加在培養(yǎng)基表面C將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃盡后,冷卻810 s再用D涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿,使涂布均勻【解析】涂布平板所用涂布器是玻璃器皿,不能在酒精燈火焰上灼燒,否則會變形,正確方法是沾取少量酒精,引燃。【答案】A6利用涂布分離法純化的大腸桿菌,經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上出現(xiàn)了多種菌落,不可能的原因是()A培養(yǎng)基制備過程中被雜菌污染B接種過程中,無菌操作不符合要求C系列稀釋時,無菌操作不符合要求D由大腸桿菌的種類不同造成的【解析】大腸桿菌培養(yǎng)基中出現(xiàn)了多種菌落,說明污染了雜菌,雜菌可能來自培養(yǎng)基,也可能是因為操作過程中無菌操作不符合要求?!敬鸢浮緿7下列與大腸桿菌及其培養(yǎng)與分離的相關(guān)敘述正確的是()A大腸桿菌是革蘭氏陽性菌B大腸桿菌的代謝類型是異養(yǎng)需氧型C可用LB固體平面培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)大腸桿菌D進行平板劃線分離時,接種環(huán)只需蘸菌液一次【解析】大腸桿菌是革蘭氏陰性菌,其代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型,擴大培養(yǎng)大腸桿菌宜使用LB液體培養(yǎng)基,LB固體平面培養(yǎng)基可用于劃線分離,進行劃線分離時,為達到分離目的,獲得單菌落,接種環(huán)只需蘸取菌液一次,故只有D選項所述正確。【答案】D8(xx杭州檢測)請回答微生物培養(yǎng)的有關(guān)問題:(1)人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需要,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)物質(zhì)稱培養(yǎng)基。培養(yǎng)基之所以有_、_和半固體培養(yǎng)基等三種,主要是培養(yǎng)基中所添加的_含量不同。(2)微生物個體是肉眼看不見的,但固體培養(yǎng)基上的微生物的_是可見的,該結(jié)構(gòu)的特征常常是鑒定菌種的主要依據(jù)之一。(3)微生物的營養(yǎng)包括碳源、氮源、生長因子、水和無機鹽。培養(yǎng)乳酸桿菌時,在培養(yǎng)基中所添加的維生素屬于_;在培養(yǎng)基中添加酸或堿或緩沖溶液的作用是_。(4)培養(yǎng)微生物的操作必須實行無菌操作,以防止_的入侵等作用。無菌操作主要包括_和滅菌;前者不能殺死芽孢和孢子,后者能殺死芽孢和孢子。(5)微生物接種的方法很多,最常用的是_和_?!敬鸢浮?1)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基瓊脂(凝固劑)(2)菌落(3)生長因子調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH(酸堿度)(4)外來雜菌消毒(5)平板劃線法稀釋涂布平板法9從自然菌樣中篩選較理想生產(chǎn)菌種的一般步驟是:采集菌樣富集培養(yǎng)純種分離性能測定。(1)不同微生物的生存環(huán)境不同,獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣,然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)耐鹽菌的菌樣應(yīng)從_中采集,培養(yǎng)厭氧菌的菌樣應(yīng)從_中采集。(2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適應(yīng)于該微生物旺盛生長的特定的環(huán)境條件,使待分離微生物在群落中的數(shù)量大大增加,從而達到從自然界中分離到所需特定微生物的培養(yǎng)方法。對耐鹽菌富集培養(yǎng)的培養(yǎng)基應(yīng)是_的選擇培養(yǎng)基;對高溫淀粉酶的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇_的選擇培養(yǎng)基,并在_條件下培養(yǎng)。(3)實驗室最常用的滅菌方法是利用高溫處理達到殺菌的效果。高溫滅菌的原理是高溫使微生物的_等物質(zhì)發(fā)生_。_滅菌法是微生物研究和教學(xué)中應(yīng)用最廣、效果最好的滅菌法。(4)下面兩圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解,請分析接種的具體方法。獲得圖A效果的接種方法是_,獲得圖B效果的接種方法是_?!敬鸢浮?1)高鹽環(huán)境無氧環(huán)境(2)加鹽以淀粉為唯一碳源高溫(3)蛋白質(zhì)和核酸變性高壓蒸汽(4)(稀釋)涂布分離法劃線分離法- 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- 2019 2020 年高 生物 部分 微生物 利用 實驗 大腸桿菌 培養(yǎng) 分離 教案 浙科版 選修
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