2019-2020年高中生物 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離輔導(dǎo)教案 浙科版.doc
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2019-2020年高中生物 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離輔導(dǎo)教案 浙科版導(dǎo)學(xué)誘思一、大腸桿菌1大腸桿菌屬于革蘭氏_性菌,為_(kāi)型的腸道桿菌。2結(jié)構(gòu):屬于_生物。3用途:是在_技術(shù)中被廣泛采用的工具。4與人類(lèi)的關(guān)系:它生活在人類(lèi)的_中,一般對(duì)人_(“有”還是“無(wú)”)害。有一些菌株對(duì)人體能產(chǎn)生危害,因?yàn)樗鼈兛梢郧治g_并產(chǎn)生_。任何大腸桿菌如果進(jìn)入人的_系統(tǒng),都會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。答案:1.陰兼性厭氧2原核3基因工程4腸道無(wú)腸黏膜毒素泌尿二、細(xì)菌的培養(yǎng)和分離1細(xì)菌的培養(yǎng):(1)細(xì)菌的繁殖:細(xì)菌以_的方式繁殖,分裂速度很快,約_分裂一次。(2)培養(yǎng)細(xì)菌的方法:培養(yǎng)細(xì)菌,需要將_轉(zhuǎn)移到_中,一般用_來(lái)轉(zhuǎn)移帶菌的培養(yǎng)物。(3)用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌的差別:接種后,培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基類(lèi)型接種方法接種后培養(yǎng)的時(shí)間(單位:小時(shí))培養(yǎng)結(jié)果液體培養(yǎng)基接種環(huán)直接接種培養(yǎng)8 h后每毫升培養(yǎng)基中有_個(gè)細(xì)菌固體培養(yǎng)基用接種環(huán)在培養(yǎng)基上用_的方式接種(該法還可以用于_)培養(yǎng)1020 h后一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞會(huì)繁殖成許多個(gè)細(xì)菌細(xì)胞,這些細(xì)胞_,形成_2.細(xì)菌的分離:(1)分離的方法與特點(diǎn):分離細(xì)菌有_和_2種。前者方法簡(jiǎn)單,后者操作復(fù)雜,但是_更易分開(kāi)。(2)本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行大腸桿菌分離,是用_法,就是在_培養(yǎng)基上進(jìn)行細(xì)菌的_。答案:1.(1)分裂20 min(2)已有細(xì)菌的培養(yǎng)物新的培養(yǎng)基接種環(huán)(3)幾億劃線分離細(xì)菌緊緊聚集在一起菌落2.(1)劃線分離法涂布分離法單菌落(2)劃線分離固體平面劃線培養(yǎng)三、滅菌操作1滅菌操作的原因:為了獲得_的培養(yǎng)物,其關(guān)鍵是防止外來(lái)_的入侵污染。因此,在培養(yǎng)微生物時(shí)必須進(jìn)行_操作。2無(wú)菌操作的條件:(1)首要條件是_必須是無(wú)菌的;(2)_必須是無(wú)菌的;(3)_的過(guò)程必須是無(wú)菌的等。答案:1.純凈雜菌無(wú)菌2(1)各種器皿(2)各種培養(yǎng)基(3)菌轉(zhuǎn)移操作四、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1)進(jìn)行大腸桿菌的_,利用_培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的操作;(2)進(jìn)行大腸桿菌的_,用_培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌的_培養(yǎng);(3)說(shuō)明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求的原理。2實(shí)驗(yàn)步驟(1)滅菌:用_在_壓力下對(duì)LB液體培養(yǎng)基、LB固體培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌_min。(2)自_向_中轉(zhuǎn)移并分裝固體培養(yǎng)基:待冷卻至_左右,將三角錐形瓶中的_培養(yǎng)基,在_上分裝至幾個(gè)_中,制成_培養(yǎng)基。(3)將大腸桿菌自_轉(zhuǎn)移到_中的_培養(yǎng)基中培養(yǎng):將大腸桿菌用_在無(wú)菌操作下接種至三角錐形瓶中的_培養(yǎng)基中,在_搖床振蕩培養(yǎng)_,完成大腸桿菌的培養(yǎng)。(4)將菌液在_培養(yǎng)基上進(jìn)行_分離:從前一步培養(yǎng)得到的菌液中獲取菌種,用_以_法接種至第二步所制得的_培養(yǎng)基中,在_恒溫箱中培養(yǎng)_h后觀察菌落。(5)菌種保存:在無(wú)菌操作下將_用_取出,再用_法接種在_上,_培養(yǎng)_后,_冰箱保存。3分離實(shí)驗(yàn)的結(jié)果及相應(yīng)結(jié)論:觀察中若看到在_的末端出現(xiàn)_,則表明菌已被分離了。4大腸桿菌分離的用途:_的通用方法,也是用于_的最簡(jiǎn)便方法之一。答案:1.(1)擴(kuò)增液體(2)分離固體平面劃線2(1)高壓鍋1 kg15(2)三角瓶培養(yǎng)皿60 固體超凈臺(tái)培養(yǎng)皿固體平面(3)斜面三角瓶液體接種環(huán)液體37 12 h(4)固體平面劃線接種環(huán)劃線固體平面371224(5)單菌落接種環(huán)劃線斜面37 24 h4 3劃線不連續(xù)的單個(gè)菌落4消除污染雜菌篩選高表達(dá)量菌株核心解讀HEXINJIEDU1微生物、細(xì)菌與大腸桿菌之間有怎樣的關(guān)系?(1)概念內(nèi)涵:其關(guān)系圖解見(jiàn)下(2)結(jié)構(gòu)上:三者都是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,形體微小的生物,但是從細(xì)胞角度看其結(jié)構(gòu)是不同的,具體如下:2培養(yǎng)大腸桿菌的LB培養(yǎng)基中有各種物質(zhì),為什么選擇這些物質(zhì),這些物質(zhì)有什么作用呢?(1)人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出了供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)基。雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同,但一般都含有五大營(yíng)養(yǎng)要素,即水、無(wú)機(jī)鹽、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和生長(zhǎng)因子(不同的細(xì)菌需要的各不相同,有物種差異,它主要補(bǔ)充自身不能合成的或合成能力較弱的,但卻是生長(zhǎng)繁殖必需的物質(zhì))。見(jiàn)下表:微生物的營(yíng)養(yǎng)要素定義功能類(lèi)型化合物類(lèi)型常用物質(zhì)碳源凡可構(gòu)成微生物細(xì)胞和代謝產(chǎn)物中碳架來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱(chēng)為碳源構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì),供給微生物生長(zhǎng)發(fā)育所需要的能量無(wú)機(jī)碳(自養(yǎng)型微生物用)無(wú)機(jī)物CO2、NaHCO3、CaCO3等有機(jī)碳(異養(yǎng)型微生物用)蛋白質(zhì)、核酸類(lèi)牛肉膏、蛋白胨、花生粉餅、明膠、氨基酸等糖類(lèi)脂質(zhì)等葡萄糖、蔗糖、淀粉等氮源凡是構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)或代謝產(chǎn)物中氮素來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱(chēng)為氮源主要是提供合成原生質(zhì)和細(xì)胞其他結(jié)構(gòu)的原料,一般不作能源無(wú)機(jī)氮銨鹽NH3、(NH4)2SO4硝酸鹽KNO3N2空氣有機(jī)氮牛肉膏、蛋白胨、醇母膏、尿素、明膠等生長(zhǎng)因子一類(lèi)對(duì)微生物正常代謝必不可少且又不能從簡(jiǎn)單的碳、氮源自行合成的所需極微量的有機(jī)物一般是酶和核酸的組成成分酵母膏、玉米漿、黃豆餅粉、動(dòng)植物組織液、麥芽汁等,復(fù)合維生素水作用:組成成分;反應(yīng)介質(zhì);物質(zhì)運(yùn)輸媒體;熱的良導(dǎo)體無(wú)機(jī)鹽作用:維持滲透壓、pH等 (2)大腸桿菌的LB培養(yǎng)基微生物的營(yíng)養(yǎng)要素本實(shí)驗(yàn)中大腸桿菌LB培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基配方與微生物營(yíng)養(yǎng)要素的對(duì)應(yīng)關(guān)系LB液體培養(yǎng)基LB固體培養(yǎng)基氮源、碳源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水瓊脂1 g蛋白胨0.5 g主要提供大腸桿菌的氮源、碳源需求酵母提取物0.25 g主要提供生長(zhǎng)因子NaCl0.5 g提供無(wú)機(jī)鹽水50 mL提供水 (3)此外配方中還要注意pH等。3該實(shí)驗(yàn)中這些操作的原因(1)三角錐形瓶中的LB固體培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到60 左右時(shí),才用來(lái)轉(zhuǎn)移和分裝,制成固體平面培養(yǎng)基,為什么?你用什么簡(jiǎn)易方法快速估計(jì)該溫度?因?yàn)槿清F形瓶中的LB固體培養(yǎng)基中有瓊脂,它在98 以上熔化,在44 以下凝固,當(dāng)冷卻到60 左右時(shí),不會(huì)因溫度過(guò)高燙手而不易操作;也不會(huì)因?yàn)闇囟冗^(guò)低而使三角錐形瓶中的培養(yǎng)基凝固,最終無(wú)法轉(zhuǎn)移分裝制成新的平面培養(yǎng)基。簡(jiǎn)易估計(jì)溫度的方法:可以用手觸摸滅菌后的三角錐形瓶,感覺(jué)錐形瓶由燙手轉(zhuǎn)為剛剛不燙手時(shí),則說(shuō)明已經(jīng)冷卻到60 左右了。(2)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí),為什么要將培養(yǎng)皿倒置?恒溫培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)基中的水分會(huì)以水蒸氣的形式蒸發(fā),倒放培養(yǎng)皿則會(huì)使水蒸氣凝結(jié)成水滴留在蓋子上;如果正放培養(yǎng)皿,則水分形成的水滴會(huì)落入培養(yǎng)基表面并且擴(kuò)散開(kāi)。如果培養(yǎng)皿中已形成菌落,則菌落中的菌會(huì)隨水?dāng)U散,菌落間相互影響,很難再分成單菌落,達(dá)不到分離的目的,培養(yǎng)皿中的菌落還有可能被蓋子上掉落的水給污染。(3)將大腸桿菌用接種環(huán)自斜面轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí),為什么接種環(huán)必須先深入到斜面冷卻后,才能再取斜面上的菌體?接種環(huán)在取菌體前曾在酒精燈火焰上灼燒滅菌,一直灼燒至紅,溫度很高,若不冷卻就直接用其取斜面上的菌體,菌體可能因?yàn)榻佑|高溫接種環(huán)而死亡,導(dǎo)致大腸桿菌的轉(zhuǎn)移培養(yǎng)失敗。(4)用劃線法分離大腸桿菌中,第一次和隨后的幾次劃線前都要灼燒接種環(huán),它們的原因一樣嗎?在劃線結(jié)束后仍然要灼燒接種環(huán)這又是為什么呢?雖然每次灼燒都是為了滅菌,但所滅的菌種和原因卻不一樣。灼燒接種環(huán)的時(shí)間消滅的菌體原因第一次劃線前其他雜菌防止其他雜菌的侵入而造成污染隨后的幾次劃線前上次劃線結(jié)束后殘留在接種環(huán)上的實(shí)驗(yàn)菌(本實(shí)驗(yàn)為:大腸桿菌)為了使下一次劃線時(shí),接種環(huán)上的菌來(lái)自上次劃線的末端,從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少,最終獲得單個(gè)菌落,實(shí)現(xiàn)菌的分離最后一次劃線結(jié)束后為了防止實(shí)驗(yàn)菌殘留于接種環(huán)而污染環(huán)境和感染實(shí)驗(yàn)人員 (5)用劃線法分離大腸桿菌時(shí),每次的劃線是怎么樣的?對(duì)隨后的劃線的起點(diǎn)有什么要求?為什么這樣要求呢?每一次的劃線依次的2次劃線之間的關(guān)系各次劃線的分布圖形輔助理解劃線的要求不能出現(xiàn)線條的重疊第二次以及隨后的劃線操作,總是從上一次劃線的末端開(kāi)始不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連這樣要求的原因使線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少因?yàn)閯澗€后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開(kāi)始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,最終得到有單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的單菌落若相連,則可能最后一次劃線末端處的細(xì)菌與第一次的疊加,細(xì)菌的數(shù)目不是最少的,不能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,最終將很難獲得單菌落4消毒與滅菌一樣嗎?概念常用方法應(yīng)用的范圍消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法:在100 煮沸56 min一般物品巴氏消毒法:7075 煮30 min或在80 煮15 min對(duì)于一些不耐高溫的液體,如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼燒滅菌:酒精燈火焰接種工具的滅菌干熱滅菌:160170 下滅菌12 h玻璃器皿、金屬工具的滅菌高壓蒸汽滅菌:121 條件下,滅菌1530 min培養(yǎng)基及容器的滅菌5.本實(shí)驗(yàn)中還需要了解哪些基礎(chǔ)知識(shí)才更便于掌握和理解呢?(1)牛肉膏蛋白胨的知識(shí)牛肉膏和蛋白胨來(lái)源于動(dòng)物原料,含有糖、維生素和有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。1 000 mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分提供的主要營(yíng)養(yǎng)牛肉膏5 g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10 g氮源和維生素NaCl5 g無(wú)機(jī)鹽H2O定容至1 000 mL氫元素、氧元素(2)巴氏消毒法的知識(shí)巴氏消毒法也稱(chēng)做低溫消毒法。日常生活中經(jīng)常用到煮沸消毒法。在100 煮沸 56 min 可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢。對(duì)于一些不耐高溫的液體,如牛奶,則使用巴氏消毒法,在7075 煮30 min或在80 煮15 min,可以殺死牛奶中的微生物,并且使牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。題例領(lǐng)悟TILILINGWU【例題1】 下列操作屬于滅菌的是()A用酒精擦拭實(shí)驗(yàn)人員的雙手B用氯氣處理水源C將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒至紅D殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物解析:此題考查對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)中滅菌的理解。對(duì)微生物培養(yǎng)來(lái)說(shuō),滅菌操作十分重要,其目的就是為了獲得純凈的培養(yǎng)物,其關(guān)鍵是防止外來(lái)一切雜菌的入侵,不僅僅是對(duì)人體有害的微生物。滅菌操作一般使用強(qiáng)烈的物化因素(如:灼燒滅菌、高壓蒸汽滅菌等)。而不是使用較為溫和的物化方法。答案:C消毒與滅菌是不同的。兩者除了在物化手段上是否強(qiáng)烈外,所消滅的微生物內(nèi)容也是不同的。滅菌是消除一切雜菌,而消毒僅僅殺死對(duì)人體有害的微生物。消毒往往無(wú)法消滅微生物的芽孢和孢子?!纠}2】 下列關(guān)于平板劃線的操作及敘述,正確的是 ()A灼燒接種環(huán)之后,為避免其他雜菌的干擾,應(yīng)立即伸入菌液取菌種B劃線結(jié)束后,為避免實(shí)驗(yàn)菌污染環(huán)境和感染操作者,所以必須再次灼燒接種環(huán)C在第一次劃線前灼燒接種環(huán)和每次劃線前灼燒接種環(huán)的目的相同D劃線時(shí)最后一區(qū)域一定要與第一區(qū)域相連,達(dá)到首尾相接解析:此題考查對(duì)劃線法分離大腸桿菌的掌握。這是本實(shí)驗(yàn)的一大重點(diǎn)和難點(diǎn)。A的操作是錯(cuò)誤的,灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后方能取菌種,以免溫度太高殺死菌種。B的操作完全正確。C的敘述是錯(cuò)誤的,它們的灼燒目的完全不同,第一次劃線前的灼燒是為了殺死其他雜菌,保證實(shí)驗(yàn)菌的純凈,而隨后的灼燒卻是為了殺死殘留于接種環(huán)上的實(shí)驗(yàn)菌,保證實(shí)驗(yàn)菌隨劃線次數(shù)的增加而減少,每次劃線的菌種來(lái)自上一次劃線的末端。D的操作也是不正確的,不應(yīng)該相連,這樣才能使最后一次劃線不受第一次劃線的干擾。答案:B大腸桿菌的分離所采用的就是劃線分離法。這一方法十分重要。我們不僅要知其每一步具體的操作,還要知其所以然,還要關(guān)注注意事項(xiàng),避免踏入誤區(qū)。隨堂訓(xùn)練SUITANGXUNLIAN1細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理,這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌()A接種針、手、培養(yǎng)基B高壓鍋、手、接種針C培養(yǎng)基、手、接種針 D接種針、手、高壓鍋答案:C解析:滅菌是微生物培養(yǎng)過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)。其中高壓蒸汽是為了殺滅培養(yǎng)基中的雜菌;酒精擦拭雙手,是滅手上的雜菌;而接種針在火焰上灼燒,就是為了滅接種針上的菌。故C選項(xiàng)是正確的。2下列關(guān)于倒平板的操作姿勢(shì)的敘述中,正確的是()A右手無(wú)名指及小指夾持含有固體培養(yǎng)基的三角瓶封口膜B右手大拇指、食指拿著三角瓶C左手拿著培養(yǎng)皿,蓋子放于桌子上D倒平板時(shí),為防止溫度過(guò)高,暫時(shí)熄滅酒精燈答案:A解析:倒平板技術(shù)是微生物技術(shù)中的基本技術(shù)。只有A是正確的。B中手指姿勢(shì)錯(cuò)誤。C錯(cuò)在培養(yǎng)皿蓋放在桌上了。D中熄滅酒精燈不對(duì),整個(gè)過(guò)程都需在酒精燈火焰旁完成。- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來(lái)的問(wèn)題本站不予受理。
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