浮游植物光合作用活性測定 葉綠素熒光法（報批稿）

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ICS 07.100.20Z 17DB 21遼 寧 省 地 方 標 準DB 21/ XXXXX—XXXX浮游植物光合作用活性測定 葉綠素熒光法 Photochemical vitality of phytoplankton determination ? Chlorophyll fluorescence （報批稿）（本稿完成日期：2018.12.28）XXXX - XX - XX 發(fā)布 XXXX - XX - XX 實施遼 寧 省 市 場 監(jiān) 督 管 理 局 發(fā) 布DB21/ XXXXX—XXXXI前 言本標準是根據(jù)GB/T 1.1-2009 《標準化工作導則 第1部分：標準的結構和編寫》給出的規(guī)則制定的。 本標準由大連市質量技術監(jiān)督局提出。 本標準由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。 本標準起草單位：遼寧省海洋水產(chǎn)科學研究院。 本標準主要起草人：柴雨、董婧、趙慧慧、許鵬、杜萌萌、郭愛娟、孫明、段妍、王彬、王愛勇、李軼平、郭棟、于旭光、劉修澤、李玉龍。DB21/ XXXXX—XXXX1浮游植物光合作用活性測定 葉綠素熒光法 1 范圍本標準規(guī)定了利用葉綠素熒光法測定自然水樣中浮游植物光合活性的原理、樣品的采集與保存、儀器設備與器具、測定步驟等。 本標準適用于含有活體藻細胞的自然水樣的光合活性測定。 2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 GB/T 12763.6 海洋調查規(guī)范 第6部分：海洋生物調查 GB 17378.3 海洋監(jiān)檢測規(guī)范 第3部分：樣品采集、貯存與運輸 GB 17378.7 海洋監(jiān)檢測規(guī)范 第7部分：近海污染生態(tài)調查和生物監(jiān)測 SC/T 9402 淡水浮游生物調查技術規(guī)范 3 術語和定義 下列術語和定義適用于本文件。 3.1 最大光化學量子產(chǎn)量 maximum photochemical quantum yield of PSⅡ 測定的浮游植物的細胞通過光量子能固定的二氧化碳分子數(shù)或者釋放出的氧氣分子數(shù)，反映藻細胞的潛在最大的光合效率，即“生長潛能”。 3.2 實際光化學量子產(chǎn)量 effective photochemical quantum yield of PS Ⅱ 在目前的光照下，測定的浮游植物的細胞光量子能固定的二氧化碳分子數(shù)或者釋放出的氧氣分子數(shù)，反映藻細胞目前的光合效率。 3.3 非化學光淬滅 non-photochemical quenching 植物耗散過剩光能為熱的能力，也就是光保護能力。 4 方法原理 DB21/ XXXXX—XXXX2浮游植物在吸收光能后會進行光合作用同時產(chǎn)生葉綠素熒光和熱，通過測定葉綠素熒光可以計算出浮游植物的光合作用。本標準使用調制熒光儀對海水中的浮游植物的光合作用活性進行測定。樣品為含有活體藻細胞的自然海水。使用葉綠素調制熒光儀進行樣本葉綠素熒光誘導曲線，計算得出浮游植物的最大光量子產(chǎn)量及實際光量子產(chǎn)量。 5 樣品的采集與保存 5.1 樣品的采集 使用采水器采集樣品于1000 mL廣口玻璃樣品瓶中（采水樣品），海水樣品采集方法按 GB 17378.3 規(guī)定執(zhí)行，采樣數(shù)量按照 GB 17378.7 及 GB/T 12763.6執(zhí)行。淡水樣品的采集方法及數(shù)量按照SC/T 9402執(zhí)行。 5.2 樣品的保存 現(xiàn)場進行藻類光合活性的測定，水樣搖勻后用移液器移取自然水樣測定。若樣品需帶回實驗室測量，采集后將樣品密閉送至實驗室并于24 h內(nèi)測定分析。 6 儀器設備與器具 6.1 可測定浮游植物的葉綠素熒光儀；操作溫度范圍：-5℃～+40 ℃；適用電源：充電式密封鉛酸電池，12 V/2 A。 6.2 過濾器：0.2μm；石英比色杯；移液器：2 ml；擦鏡紙；采水器；1000 mL 廣口玻璃樣品瓶。 7 測定步驟 7.1 儀器校正 7.1.1 過濾水樣 采用 0.2 μm 水樣過濾器過濾相應水樣，去除水樣中的藻類。 7.1.2 用三級水清洗石英杯，去除杯壁殘留所導致的背景熒光信號。試驗用水均為 GB/T 6682 規(guī)定的三級水。 7.1.3 用移液器移取 2 ml 過濾后的水樣放入比色杯，用擦鏡紙將比色杯外側擦拭干凈后放入葉綠素調制熒光儀。選擇調零“Z off”并在測量時全程打開。 7.2 樣品稀釋 當水樣的葉綠素濃度高于300 μg/L時，葉綠素分子對熒光的“重吸收”會干擾測量結果。為避免這種影響，當測量出的葉綠素含量高于300μg/L時，請對樣品采用三級水稀釋后重新測量。藻類濃度以肉眼看不出顏色為宜。 7.3 樣品測定 7.3.1 搖勻待測水樣，用移液器移取 2 mL 水樣放入比色杯，用擦鏡紙將比色杯外側擦拭干凈后放入葉綠素調制熒光儀。 7.3.2 用將含有待測樣品的比色杯經(jīng)過暗適應 20 min，打開光通量密度很弱的測量光獲得初始熒光Fo，然后打開飽和脈沖光獲得最大熒光 Fm。 DB21/ XXXXX—XXXX37.3.3 然后打開恒定的可見光，得到可見光條件下的葉綠素熒光值 Fs，并每隔 20 s 打開飽和脈沖光，得到可見光條件下的最大葉綠素熒光值 Fm’，從而獲得葉綠素熒光誘導曲線，參見附錄 A。 8 結果與計算 8.1 最大光化學量子產(chǎn)量計算公式 ………………………………………………………(1)FvFm=Fm-FoFm式(1)中： Fo ???? 為樣品最小葉綠素熒光值；Fm ???? 為樣品最大葉綠素熒光值； ???? 為樣品的最大光化學量子產(chǎn)。 ????????8.2 實際光化學量子產(chǎn)量計算公式 ……………………… ……………………………(2)式(2)中： Fm’ ???? 代表光適應的樣品打開飽和脈沖時得到的最大葉綠素熒光值； Fs ???? 代表某一光照條件下打到的穩(wěn)態(tài)的葉綠素熒光值； ???? 代表穩(wěn)態(tài)光照下的光化學量子產(chǎn)量 ???????'8.3 非光化學淬滅 ……………………… ……………………………(3)??????=Fm-Fm'Fm'式(3)中： Fm ???? 為樣品最大葉綠素熒光值； Fm’ ???? 代表光適應的樣品打開飽和脈沖時得到的最大葉綠素熒光值 NPQ ????植物耗散過剩光能為熱的能力，也就是光保護能力。DB21/ XXXXX—XXXX4A A附 錄 A（資料性附錄）葉綠素熒光誘導曲線 圖 A.1 葉綠素熒光誘導曲線 _________________________________