鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)

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Ames試驗(yàn) Ames試驗(yàn) 即污染物致突變性檢測(cè) 也稱為鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)污染物對(duì)人體的潛在危害 引起人們的普遍關(guān)注 世界上已發(fā)展了百余種短期快速測(cè)試法 檢測(cè)污染物的遺傳毒性效應(yīng) B N Ames等經(jīng)十余年努力 于1975年建立并不斷發(fā)展完善的沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn) 亦稱Ames試驗(yàn) 已被世界各國(guó)廣為采用 原理 檢測(cè)受試物誘發(fā)鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株 his 回復(fù)突變成野生型 his 的能力 即組氨酸突變菌 his 在不含組氨酸的最低營(yíng)養(yǎng)平皿上不能生長(zhǎng) 回復(fù)突變成野生型 his 可在不含組氨酸的最低營(yíng)養(yǎng)平皿上生長(zhǎng) 是應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)基因突變的體外試驗(yàn) Ames試驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)菌株 配套菌株 有四種TA98 TA97 檢測(cè)移碼突變TA100 檢測(cè)堿基置換突變TA102 對(duì)醛 過氧化物及DNA交聯(lián)劑較敏感這四個(gè)試驗(yàn)菌株除了含有his 突變 還有一些附加突變 以提高敏感性 Ames試驗(yàn) 不加S9混合液得到陽(yáng)性結(jié)果 說(shuō)明受試物是直接致突變物 加S9混合液才得到陽(yáng)性結(jié)果 說(shuō)明該受試物是間接致突變物 Ames試驗(yàn) Ames試驗(yàn) 常規(guī)方法 斑點(diǎn)試驗(yàn) 平板摻入試驗(yàn) Ames試驗(yàn) 斑點(diǎn)試驗(yàn) 1 吸取測(cè)試菌增菌培養(yǎng)后的菌液0 1ml 注入融化并保溫45 左右的上層軟瓊脂中 需S9活化的再加0 3ml 0 4mlS9混合液 立即混勻 傾于底平板上 鋪平冷凝 2 用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣 紙片浸濕受試物溶液 或直接取固態(tài)受試物 貼放于上層培養(yǎng)基的表面 同時(shí)做溶劑對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照 分別貼放于平板上相應(yīng)位置 3 平皿倒置于37 溫箱培養(yǎng)48h 在紙片外圍長(zhǎng)出密集菌落圈 為陽(yáng)性 菌落散布 密度與自發(fā)回變相似 為陰性 Ames試驗(yàn) 平板摻入試驗(yàn) 1 將一定量樣液和0 1ml測(cè)試菌液均加入上層軟瓊脂中 需代謝活化的再加0 3ml 0 4mlS9混合液 混勻后迅速傾于底平板上鋪平冷凝 2 同時(shí)做陰性和陽(yáng)性對(duì)照 每種處理做3個(gè)平行 試樣通常設(shè)4個(gè) 5個(gè)劑量 選擇劑量范圍開始應(yīng)大些 有陽(yáng)性或可疑陽(yáng)性結(jié)果時(shí) 再在較窄的劑量范圍內(nèi)確定劑量反應(yīng)關(guān)系 培養(yǎng)同上 3 同一劑量各皿回變菌落均數(shù)與各陰性對(duì)照皿自發(fā)回變菌落均數(shù)之比 為致變比 MR MR值 2 且有劑量 反應(yīng)關(guān)系 背景正常 則判為致突變陽(yáng)性 鼠傷寒沙門氏菌野生型 his 鼠傷寒沙門氏菌突變型 his 受試物試驗(yàn)菌種 his S9 試驗(yàn)菌種 his S9 Ames試驗(yàn)原理 結(jié)果判斷 只要在一種試驗(yàn)菌株得到陽(yáng)性結(jié)果 即認(rèn)為受試物是致突變物 僅當(dāng)四種試驗(yàn)菌株均得到陰性結(jié)果 才認(rèn)為受試物是非致突變物 Ames試驗(yàn) Ames試驗(yàn) 應(yīng)用1 斑點(diǎn)試驗(yàn)只局限于能在瓊脂上擴(kuò)散的化學(xué)物質(zhì) 大多數(shù)多環(huán)芳烴和難溶于水的化學(xué)物質(zhì)均不適宜用此法 此法敏感性較差 主要是一種定性試驗(yàn) 適用于快速篩選大量受試化合物 2 平板摻入試驗(yàn)可定量測(cè)試樣品致突變性的強(qiáng)弱 此法較斑點(diǎn)試驗(yàn)敏感 獲陽(yáng)性結(jié)果所需的劑量較低 點(diǎn)試獲陽(yáng)性結(jié)果的濃度用于摻入試驗(yàn) 每皿0 1ml 往往出現(xiàn)抑 殺 菌作用 3 致變作用遲緩或有抑菌作用的試樣 培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至72h Ames試驗(yàn) 應(yīng)用4 揮發(fā)性的液體和氣體試樣 可用干燥器內(nèi)試驗(yàn)法進(jìn)行測(cè)試 5 目前 Ames試驗(yàn)作為檢測(cè)環(huán)境誘變劑的一組試驗(yàn)中的首選試驗(yàn) 廣泛應(yīng)用于致突變化學(xué)物的初篩 但是 與今天快信息 高效率的社會(huì)要求相比 該試驗(yàn)程序還嫌繁瑣 方法不夠簡(jiǎn)便 有待于創(chuàng)建新的更為快速靈敏 簡(jiǎn)單易行的環(huán)境誘變劑短期生物測(cè)試法